RNA结合蛋白HuR在胃癌中的表达和临床意义

张小风 彭佑共 谢飞 裴芝皆 李晓晖

胃癌（Gastric carcinoma，GC）是最常见的消化道肿瘤之一。在我国，早期胃癌的诊治率低于10%，进展期胃癌根治术后5 年生存率在30%左右[1-2]。临床的实践表明，胃癌的发病与治疗仍存在“三高”和“三低”，即发病率高、死亡率高、转移率高以及早诊断率低、切除率低、5 年生存率低。作为高发病率和高死亡率的恶性肿瘤之一，胃癌的发病机制迄今尚未能证明某单一因素可以作为胃癌的病因，胃癌在早期症状模糊和非特异性，与良性胃溃疡的症状相似，因此容易被患者忽略或药物治疗而掩盖，等到确诊时80%～90%为进展期，出现淋巴结转移甚至是远处转移，失去根治性切除的机会，故预后差，生存率低。胃癌的淋巴转移是胃癌的主要转移途径，早期胃癌发生淋巴结转移率近20%，进展期胃癌的淋巴转移率高达70%左右。研究表明，胃癌的淋巴转移是影响早期胃癌预后的重要因素[3-4]。因此，探讨胃癌转移的相关因素，早期预测淋巴结转移风险，寻找新的治疗思路，阻断肿瘤转移的发生对提高患者生存率具有十分重要的临床意义。

1 资料与方法

1.1 研究对象

收集荆门市第二人民医院2011 年1 月—2012 年6 月胃癌手术切除患者75 例。男性34 例，女性41 例；年龄36～78 岁，平均年龄（49.0±1.7）岁。其中有淋巴结转移者36 例，无淋巴结转移者39 例。根据美国癌肿联合委员会（AJCC）2016 年胃癌TNM 分期（第八版更新）进行分期[5]：Ⅰ期30 例，Ⅱ期26 例，Ⅲ期15 例，Ⅳ期4 例。

1.2 方法

兔抗人多克隆HuR 抗体，购自上海奕驰生物科技有限公司。免疫组化试剂盒（PV-8000）：购自北京中杉金桥生物技术有限公司，根据试剂盒推荐的方法检测HuR 蛋白的表达。

1.3 结果判定

参照Delellis[6]、饶鸿艳[3]等人提供的免疫组化半定量积分法来判断免疫组化结果。免疫组织化学结果由染色强度和染色频率两者来评估，0～1 分为阴性，2～3 分为阳性。4～5 分，表示阳性（++）；6～7 分，表示阳性（+++）。HuR 在胞浆与胞核均有分布，阳性物质均呈黄-棕色颗粒。

1.4 统计学方法

SPSS13.0 统计软件进行分析，计数资料采用χ2检验，相关分析采用Spearman 相关分析和Cox 回归分析，生存分析采用Kaplan-Meier 曲线法和Log rank 检验。以P＜0.05 表示有统计学意义。

2 结果

2.1 HuR 在胃癌组织中的表达

HuR 表达为粗细不一的淡黄或棕褐色颗粒，HuR 在肿瘤细胞中表达阳性，在癌旁间质细胞也有少量表达。在75 例胃癌组织标本中，49 例（65.3%）组织胞浆HuR 表达阳性，64 例（85.3%）胞核表达阳性。有2 例（2.7%）组织胞浆和胞核均未检测到HuR表达。见表1。

2.2 胃癌组织中HuR 的表达与临床病理特征的关系

图1 HuR 胞浆、胞核均强阳性表达×10；图2 HuR 胞浆弱阳性、胞核强阳性表达×10；图3 HuR 胞浆阴性、胞核弱阳性表达×40；图 4 HuR 胞浆、胞核均阴性表达×10；图5 HuR 胞浆阴性、胞核强阳性表达×10；图6 HuR 胞浆、胞核均弱阳性表达×40

在本研究中，胞浆HuR 表达水平与肿瘤大小、胃癌临床分期和淋巴结转移、远处转移明显相关（P＜0.05），然而与患者的年龄、性别、组织学类型和组织分化程度无相关性（P＞0.05）。此外，胞核HuR 表达与所有的临床病理学特征间均无相关性（P＞0.05）（表1）。

进一步将单因素分析中具有统计学意义的变量纳入COX 多因素分析模型，结果表明，HuR 胞浆阳性（HR=1.854，95%CI=1.018-3.875；P=0.044）、肿瘤大小（HR=1.303；95%CI=1.256-3.404；P=0.012）、临床分期（HR=3.607；95%CI=1.729-7.526；P=0.001）是影响胃癌患者预后的独立因素（表2）。以上结果提示，通过免疫组化检测HuR 胞浆表达可以预测胃癌患者术后预后情况。

3 讨论

胃癌其生物学行为具有很高的直接浸润性和早期转移倾向的特点。然而，对于胃癌细胞经过淋巴道转移的研究，却相对滞后。因此，本文主要目的，通过分析HuR 在胃癌组织中的表达，来研究其对胃癌淋巴转移的影响，并为临床治疗胃癌提供新的思路。

HuR 与肿瘤的发生和生长；ELAV 家族包括HuR、HuB、HuC和HuD。HuR 基因定位于染色体19q13.2，此处编码众多原癌基因产物；正常情况下，HuR 主要表达在细胞核，但在低氧、放射性损伤和细胞因子等刺激下可从细胞核转运到细胞浆，通过RNA 识别基序（RRM）与多种mRNA3’端非翻译区（3’UTR）的富含AU 碱基的序列（ARE）结合，使mRNA 从胞核转运至胞浆的过程中保护mRNA 免受核酸酶降解，从而增加mRNA 的稳定性。多种分子的mRNA，如介导细胞增殖的细胞周期蛋白cyclinA、cyclinB等都含有ARE，均接受ARE 结合蛋白（AUBP）的调控。HuR 通过与ARE 结合，增加上述因子mRNA 的稳定性从而上调该因子蛋白的表达发挥相应的生物学效应；最初于1990 年在小细胞肺癌患者血清中被检测到，后来研究发现，HuR 在肝癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌中表达异常[7-8]。HuR 通过促炎性因子和血管生成因子，如TNF-α、COX-2 和 VEGF 等，来调节关键的致癌过程[9-10]。Shang等[11]研究表明，HuR 的生物学作用是增强mRNA 的稳定性。HuR非常重要、十分广泛的作用是在转录后水平调控真核细胞基因表达，也是唯一可以增强mRNA 稳定性的ELAV 家族蛋白；不仅参与了生物发育等正常生命活动，也在肿瘤发生、发展过程中发挥着重要作用

表1 HuR 在胃癌中的表达及与临床病理特征的关系（例）

表2 75 例胃癌患者总生存率的COX 模型多因素分析

HuR 在胃癌组织中的表达及其对胃癌浸润、转移的影响。在沈耿等的研究中[12]，发现胞浆HuR 表达而不是胞核HuR 表达与VEGF-C 表达显著相关。在多种人类肿瘤中，VEGF-C 表达与淋巴结转移和临床分期密切相关，是评价患者预后的重要因素。HuR 通过调控mRNAs 稳定性，使上皮细胞生长因子、粒细胞集落刺激因子的表达增加，促进细胞增殖。HuR 能稳定并且增加低氧诱导因子（HIα-1）、血管内皮生长因子（VEGF）和环氧化酶-2（COX-2）的mRNAs 的表达，间接促进血管生成。因此，能确保肿瘤细胞的氧供与营养需要，从而促进肿瘤的生长、转移与侵袭[13-14]。本研究发现75例胃癌中胞浆HuR阳性表达者为49例，共阳性率65.3%，胞浆HuR 表达阳性与胃癌肿瘤大小（P=0.014）、淋巴结转移（P=0.002）、TNM 分期（P=0.027）、远处转移（P=0.016）均显著相关。进而说明：胞浆HuR 表达越强，HuR 的高表达，可能促进胃癌组织细胞的生长，胃癌的肿瘤越大；胞浆HuR 表达越强，HuR 的高表达，可能促进胃癌细胞的淋巴结转移，淋巴结转移越多；胞浆HuR 表达越强，HuR 的高表达，可能促进胃癌细胞的远处转移，远处转移越多；以上结果进一步证实了HuR 在肿瘤的发生、发展、转移中存在着相关性。推测HuR 正是通过多种方式，参与胃癌的淋巴管生成、肿瘤增殖，进而促进肿瘤的浸润和转移。

综上所述，根据胞浆HuR 在恶性肿瘤中的过表达和它们的生物学功能以及在肿瘤的发生、发展、转移中存在着相关性；胞浆HuR 表达越强，HuR 的高表达，可能促进胃癌组织细胞的生长，可能促进胃癌细胞的淋巴结转移，可能促进胃癌细胞的远处转移。因此，胞浆HuR 在胃癌中呈高表达，胞浆HuR 而不是胞核HuR表达与胃癌的肿瘤大小、淋巴结转移、TNM 分期、远处转移呈显著正相关。在临床上是否可以考虑通过抑制胞浆HuR 的表达，阻止胃癌组织细胞的生长、淋巴结转移、远处转移等治疗新思路、研究新方向。