冠心病患者外周血单个核细胞中microRNA-155及146a的表达水平

李凝诗，杨丽霞，郭瑞威，朱国富，齐 峰，叶金善

冠心病患者外周血单个核细胞中microRNA-155及146a的表达水平

李凝诗，杨丽霞，郭瑞威，朱国富，齐 峰，叶金善

目的 观察microRNA-155及146a在冠心病患者外周血单个核细胞中的表达水平。方法 148例心内科住院患者分为两组，对照组35例，冠心病组113例，冠心病组又分为3组，其中AMI组42例，UA组38例，SA组33例。采用实时定量PCR检测外周血单个核细胞上microRNA-155及146a表达情况。结果 与对照组比较，microRNA-155在冠心病组的表达水平降低，microRNA-146a升高(P<0.05)；AMI组及UA组患者的microRNA-155表达水平显著低于对照组和SA组(P<0.05)，microRNA-146a的表达水平则高于对照组和SA组(P<0.05)，而AMI组及UA组两组间无明显差异(P>0.05)。结论 随着冠心病病情的进展，患者microRNA-155及146a的表达水平随之改变，为冠心病患者的筛查及治疗提供了一个新方向。

microRNA-155；microRNA-146a；冠心病；表达

microRNA(miRNA)是一类新近发现的内源性非编码单链RNA分子，由20～23个核苷酸构成，在细胞的分化、增殖、凋亡以及多种生物组织的发育调节过程中起着重要的作用[1-2]。动脉粥样硬化作为冠心病发生的基础，已成为瞩目的焦点。近年来，人们将其定义为一个慢性炎症性疾病，而microRNA-155(miR-155)及microRNA-146a(miR-146a)为炎症相关性miRNA。有研究[3]表明，miR-155可通过一些炎性因子诱导而产生，继而使炎症反应中的单核细胞增加。miR-146a则是通过上调核因子κB促进Th1细胞的增殖和分化来参与炎症反应的形成[4]。本研究通过对冠心病患者外周血单个核细胞中miR-155及miR-146a水平的检测，分析其与病变程度的关系，探索其在冠心病中的意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选择2012年5月～2013年5月成都军区昆明总医院心内科住院患者148例，根据临床表现和冠脉造影分为冠心病组113例和对照组35例(无器质性心脏病，心电图检查未见改变者)，冠心病组中又分为急性心肌梗死(AMI)组42例，不稳定型心绞痛(UA)组38例，稳定型心绞痛(SA)组33例。冠心病组经冠脉造影至少一支血管狭窄≥50%，对照组冠脉造影未见冠状动脉狭窄或痉挛。排除标准：原有心力衰竭、扩张性心肌病、病毒性心肌炎、风湿性心肌炎以及外周血管病；合并肝肾功能不全、肿瘤、DIC、血液系统疾病和免疫疾病。

1.2 标本采集及检测 所有患者于冠脉造影时抽取桡动脉血3 ml，全血置于1∶9枸橼酸钠抗凝管中，用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMC)；用血液(液体样本)总RNA快速提取试剂盒(Bioteke Corporation)按操作说明提取总RNA；采用反应体系共25 μl的All-in-OneTMmiRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒(GeneCopoeia)进行逆转录反应；采用All-in-OneTMmiRNA qPCR Kit试剂盒(GeneCopoeia)进行qPCR，每一反应总体积20 μl；应用Bio-Rad CFX96实时定量PCR仪测定其相对表达量(相对表达量=2-ΔΔCt)，同时以U6作为内参。RT和PCR的特异性U6和miRNA引物由GeneCopoeia公司合成。

2 结果

2.1 两组临床资料比较 冠心病组除高脂血症比例明显高于对照组(P<0.05)外，年龄、性别、危险因素间差异均无统计学意义(P>0.05，表1)。

2.2 两组miR-155及146a的表达结果 冠心病组外周血单个核细胞上miR-155的表达较对照组明显降低，miR-146a的表达显著增高(P<0.05，表2)。

表1 两组临床资料比较

注：与对照组比较，①P<0.05

表2 两组miRNA表达量比较表

注：与对照组比较，①P<0.05；与SA组比较，②P<0.05

2.3 冠心病组各亚组miR-155及146a的表达结果 冠心病组中，不同临床类型患者随病情加重，miR-155的表达逐渐降低，即AMIUA>SA>对照组。AMI及UA组与对照组或SA组相比，miR-155的表达水平明显下降，miR-146a的表达水平明显上升(P<0.05)。而AMI组及UA组相比，两指标无统计学差异(P>0.05)。见表2。

3 讨论

动脉粥样硬化是冠心病产生的基础，其由局部的脂质和复合糖类的聚集、纤维组织的增生和钙质沉着相互作用，继而出现斑块的破裂及局部血栓的形成，因而免疫炎症反应正是动脉粥样硬化发生和发展的基础。近年来对新发现的由20～23个核苷酸构成的内源性非编码单链RNA分子，即miRNA的研究不断深入，发现其是通过对目标mRNA的翻译进行抑制或促使其降解，而参与到人体的多种生理和病理过程，起到调控的作用。最近有研究[5-6]提示，miRNA对在心血管疾病和动脉粥样硬化中起到调节作用的单核巨噬细胞、内皮细胞及血管平滑肌细胞的功能均有所影响，而miR-155及146a也包含其中。

miR-155及146a分别位于人类21号及5号染色体上，均是具有多种功能的miRNA。miR-155因在多种肿瘤疾病中表达，而一度被认为是致癌因子。Lee等[7]发现miR-155会因二氢茉莉酮酸甲酯的处理出现过表达的现象，从而使环氧化酶2的抗炎作用下降。随着研究的不断深入，发现miR-155是具有免疫炎性的一种保护性miRNA，其可通过对一系列炎性因子的负反馈调节作用控制炎症，减少对组织的伤害。并且发现miR-155可直接作用在血管紧张素Ⅱ-1型受体上，从而抑制血管紧张素Ⅱ与之相结合，导致内皮细胞的迁移受阻，同时也抑制了血管紧张素Ⅱ-1型受体的转录水平，最终抑制动脉粥样硬化的发生和发展[8]。miR-146a是miR-146家族中的一种，在急性冠脉综合征患者的外周血单个核细胞中表达明显上升。miR-146a通过Toll样受体通路对免疫和炎症反应进行调节，Yang等[9]研究发现，miR-146a通过Toll样受体4抑制巨噬细胞对脂质的摄入及炎性因子的分泌，从而使巨噬细胞的炎性反应能力下降，使斑块不稳定性增加，导致斑块破裂的可能性上升。miR-146a表达上调也可通过炎性因子对NFκB途径的诱导而产生，同时，miR-146a也可通过NFκB促进Th1的增殖和分化，即可加速炎症的发生发展[10]。

本研究发现，冠心病组中miR-155的表达水平明显低于对照组，而miR-146a的表达水平明显高于对照组(P<0.05)，同时，冠心病组中随病情的不断加重，miR-155及146a的表达水平也有所不同，即miR-155的表达水平随病情加重而下降，miR-146a则上升。

综上所述，miR-155和miR-146a的表达水平与患者病情相关，其对于动脉粥样硬化的发生发展可能起到重要作用。进一步研究其作用机制，有望为预防和治疗冠心病提供一个新靶点，为药物的开发提供一个新思路。

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The expression of microRNA-155 and microRNA-146a in peripheral blood mononuclear cells in patients with coronary artery disease

Li Ningshi1,2,Yang Lixia1,Guo Ruiwei1,Zhu Guofu1,Qi Feng1,Ye Jinsan1

1.Department of Cardiology,Kunming General Hospital of Chengdu Military Command,Kunming,Yunnan,650032,China；2.Kunming Medical University,Kunming,Yunnan,650032,China

Objective To observe the expression levels of microRNA-155 and microRNA-146a in peripheral blood mononuclear cells in patients with coronary heart disease(CAD).Methods 148 cases were divided into 2 groups: control group(n=35)and CAD group(n=113)who was sub-divided into 3 subgroups: AMI group(n=42),UA group(n=38)and SA group(n=33).Real-time quantitative PCR was applied to detect the expression of microRNA-155 and microRNA-146a in peripheral blood mononuclear cells.Results Comparing with the level in control group,the expression level of microRNA-155 was lower and microRNA-146a was higher in CAD group(P<0.05);the expression level of microRNA-155 in AMI group and in UA group was significantly lower than that in control group and in SA group(P<0.05),while the expression level of microRNA-146a in AMI group and in UA group was higher than that in control group and in SA group(P<0.05).No obvious difference in the expression level of microRNA-146a was detected between control group and SA group(P>0.05).Conclusions The expression of microRNA-155 and microRNA-146a changes with the progress of CAD,which provides a new method of the screening and clinical treatment of CAD.

microRNA-155;microRNA-146a;coronary artery disease;expression

650032 昆明，成都军区昆明总医院心血管内科(李凝诗，杨丽霞，郭瑞威，朱国富，齐 峰，叶金善)；昆明医科大学(李凝诗)

杨丽霞,电话:0871-64774571;E-mail:doctorylixia@163.com.cn

R 541.4

A

1004-0188(2014)04-0380-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2014.04.012

2014-01-04)