瑶药天钻的水分及马兜铃酸A含量测定

张亚洲 ，唐 其 ，陈 兵 ，唐春风 ，覃山丁 ，樊兰兰

（1．广西壮族自治区药用植物园天然药物化学中心，广西 南宁 530023； 2．广西中医药大学，广西 南宁 530001）

瑶药天钻是中国特有植物马兜铃科马兜铃属植物广西马兜铃 Aristolochia kwangsiensis Chun et How ex C．F．Liang 的块根[1]。现已从天钻中分离得到了尿囊素、马兜铃酸、β-谷甾醇、6-甲氧基去硝基马兜铃酸甲酯、6-甲氧基马兜铃酸A甲酯及木兰花碱[2-3]。药理研究发现，天钻总生物碱具有解痉、镇痛作用[4-5]；马兜铃酸主要有抗肿瘤、致突变、肾脏毒性作用[3-6]；天钻提取物对临床各种疾患所致平滑肌痉挛性腹痛的止痛效果较好[7-10]。天钻在民间现仍作为抗肿瘤、止痛药物使用，而其有效成分至今尚未明确。马兜铃酸A是否在天钻药材中普遍存在，其含量如何，值得探讨。为此，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法测定了天钻药材中马兜铃酸A的含量，旨在为药材的安全使用提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪;DAD检测器；色谱柱为Phenomenex Gemini C18柱（250 mm × 4．60 mm，5 μm)。乙腈、甲醇（色谱纯，成都科龙试剂有限公司）；水为自制纯净水；马兜铃酸A对照品（自制，含量98．327%）；天钻药材采集情况见表1。

2 方法与结果

2．1 药材水分测定

参照2010年版《中国药典（一部）》附录ⅨG干燥失重测定法，对11批药材样品的水分进行测定。结果见表2。

2．2 马兜铃酸A含量测定（HPLC法）[11-13]

2．2．1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Phenomenex Gemini C18柱（250 mm ×4．60 mm，5 μm)；流动相：乙腈 -含0．34%三乙胺和0．94%乙酸的水溶液，梯度洗脱（见表 3）；流速：0．8 mL ／min；检测波长：260 nm；进样量：20 μL。在此条件下，色谱分离良好，色谱图见图1。复性较好。

表1 药材样品采集情况表

表2 天钻药材水分测定结果

表3 流动相梯度洗脱表

加样回收试验：精密称取已知含量的药材样品（编号6）0．23 g，平行9份，分别加入已知样品中马兜铃酸A含量的125%，100%，75%的对照品，按样品溶液制备方法处理，依法进样测定含量，计算回收率。结果见表4。

图1 马兜铃酸A高效液相色谱图

表4 马兜铃酸A加样回收试验结果（n＝9）

2．3 样品水分及含量测定

按照2．1及2．2项下方法，依法测定11批药材样品水分及马兜铃酸A含量，结果见表5。

2．2．2 样品超声提取方法选择

马兜铃酸A溶于甲醇，故样品超声提取所用溶剂选用甲醇。称取药材样品 4份，分别加入甲醇，超声 15，30，45，60 min后，再用甲醇稀释到刻度，摇匀后用微孔滤膜过滤，进样20 μL。结果甲醇超声提取 15，30，45，60 min时，马兜铃酸 A提取率分别为95．03% ，98．66% ，98．92% ，100．00% 。可见，超声提取 30 min 时已提取较完全，从节约时间方面考虑，样品用超声提取30 min效果较理想。

2．2．3 方法学考察

线性关系考察：称取马兜铃酸A对照品21．8 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，用甲醇超声溶解后，放至室温，用甲醇稀释至刻度，作为对照品贮备液。取贮备液5 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得溶液A。再取贮备液25 mL，置100 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得溶液B。再取溶液B 5 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得溶液 C。再取溶液C 5 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得溶液D。再取溶液D 5 mL，置10 mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得溶液E。再取溶液E 5 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得溶液 F。取贮备液及溶液 A-F，各进样20 μL，记录色谱图。以进样质量浓度（X）对峰面积（A）进行线性回归，得回归方程 X＝0．009 8 A＋0．050 7，r＝0．999 99(n＝7)。结果表明，马兜铃酸 A质量浓度在 1．703～109 μg／mL范围内与峰面积呈良好线性关系，符合检测要求。

精密度试验：取同一对照品溶液，摇匀后进样20 μL，连续进样 6 次。结果平均峰面积值为 118．42，RSD ＝0．71% （n＝6），表明仪器精密度较好。

稳定性试验：精密称取药材样品（编号 8）0．503 3 g，用甲醇超声30 min，放冷后用甲醇稀释至刻度，摇匀后，用微孔滤膜过滤，分别于 0，2，4，6，8，12 h 时进样测定。结果的 RSD 为 0．26%（n＝6），表明样品溶液在12 h内测定较稳定。

重复性试验：精密称取同一药材样品(编号8)6份，依法制备样品溶液并测定含量。结果的 RSD＝0．55%(n＝6)，表明方法重

表5 药材样品中水分及马兜铃酸A含量测定结果

3 讨论

天钻药材在民间常用于抗肿瘤、镇痛，其活性成分尚不明确，是否有潜在的肾毒性危害，也还未引起足够重视。因此，对天钻药材中含有的马兜铃酸A进行测定非常必要。

本研究结果显示，11批样品中马兜铃酸A含量为0．017 4% ～0．206 4%，含量差异较大，最高者是最低者的12倍。另外，自购药材中马兜铃酸A含量均较低，可能与采集后放置时间较长有关，值得进一步探讨。

天钻为少数民族用药，含有马兜铃酸A，但含量为多少，使用中是否会造成危害，一直未给予足够重视。马兜铃酸A具有肾毒性已较为明确，天钻药材中均含马兜铃酸A，使用过程中是否会产生毒性作用，值得重视。无论如何，应避免大量、超量使用，或是不用。

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