甲胎蛋白异质体在鉴别良恶性肝病中的临床应用

陶绍能，周建国，程光华，戴云海，张新路，阮 昊

(皖南医学院附属弋矶山医院 核医学科，安徽 芜湖 241001)

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一，早期诊断困难，临床诊断时多已中晚期且常伴有肝内转移，治疗效果差。甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)是目前临床肝细胞癌早期诊断的主要血清学标志物，但除肝癌之外，约有15%～58%的慢性肝炎和11%～47%的肝硬化患者其AFP呈不同程度的升高[1]，在这些高危人群中采用单纯检测AFP进行肝癌预警存在很大困难。因此，AFP作为HCC早期筛查的血清学标志物仍有一定的局限性。

近年研究发现的甲胎蛋白异质体(alpha fetoprotein variant，AFP-L3)是肝癌的高度特异性指标，对良性肝病特异性≥95%[2]，对肝癌的诊断具有很高的准确率，比单纯应用AFP能显著提高准确率。以往AFP-L3的检测方法由于存在试剂昂贵、操作繁琐等缺点，迄今没有在临床广泛使用。本研究采用国内新研制的凝集素亲和层析微量离心柱法分离甲胎蛋白异质体，并用化学发光法对131例包括肝癌、肝硬化、慢性肝炎的患者进行检测，以期评价凝集素亲和层析微量离心柱法检测AFP-L3在鉴别良恶性肝病中的临床价值。

1 资料和方法

1.1 研究对象 经医院伦理委员会批准，131份血清标本取自本院2013年1月～2014年1月住院患者中AFP阳性(>8.0 ng/L)的患者，年龄16～81岁，男性111例，女性20例。其中肝硬化(liver cirrhosis,LC)52例、慢性肝炎(chronic hepatitis,CH) 33例，肝癌(hepatocelluar carcinoma,HCC) 46例。诊断标准符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的“病毒性肝炎防治方案”中病毒性肝炎诊断标准及中华人民共和国卫生部医政司组织并由全国肿瘤防治办公室与中国抗癌协会合编的《新编常见恶性肿瘤诊治规范》中有关原发性肝癌的诊断标准。

1.2 试剂与仪器 AFP检测采用为西门子ADVENTAUR XP化学发光仪原装配套试剂，AFP-L3分离试剂由北京热景生物技术有限公司提供。

1.3 方法 AFP-L3 的分离采用微量离心柱法，离心柱内装有耦联了小扁豆凝集素(LCA)的琼脂糖，可以特异结合 AFP-L3，当血清流过离心柱时与LCA亲合力强的甲胎蛋白异质体就结合于柱中，经过清洗洗去不结合的甲胎蛋白，再经过离心洗脱后获得 AFP-L3，然后应用化学发光法检测总AFP和AFP-L3的含量。并计算AFP-L3占AFP总量的百分比。

1.4 统计学方法 应用 SPSS 17.0 软件进行统计分析，以P<0.05为有统计学意义。因仪器AFP测定的范围为<1 000 ng/ml，故对>1 000 ng/ml者按1 000 ng/ml进行数据的统计分析及相关计算。

2 结果

2.1 AFP、AFP-L3、AFP-L3%在良恶性肝病患者中的结果分析 因血清中AFP、AFP-L3、AFP-L3%为非正态分布，结果以中位数及四分位间距表示，组间比较用Kruskal-Wallis秩和检验。分析发现本研究中AFP、AFP-L3、AFP-L3%在3组中有明显统计学意义，见表1。虽然肝癌患者血清中的AFP浓度高于肝硬化和慢性肝炎患者，但是在良性肝病患者与肝癌患者中AFP有较多的重叠现象。

表1 AFP、AFP-L3、AFP-L3%在良恶性肝病患者中的含量比较[中位数(第25、75百分位数)，ng/ml]

2.2 AFP-L3%在肝癌诊断中的作用分析 与AFP、AFP-L3相比，AFP-L3%诊断HCC ROC曲线下面积(area under the curve，AUC)最大，为0.795，误差较小，可信区间较窄(见图1，表2)。当AFP临界值在70.65 ng/ml时其灵敏度与特异性分别为74.1%和49.4%；AFP-L3临界值在3.325 ng/ml时诊断HCC的灵敏度与特异性可达到85.1%和52.9%；而AFP-L3%临界值在6.90%时其灵敏度为66.7%，特异性可提高到82.4%(见表3)。

2.3 不同组的阳性率 以AFP-L3%≥6.90%判断为阳性，HCC患者AFP-L3%阳性率(73.91%)明显高于肝硬化(23.08%)和慢性肝炎阳性率(9.09%)，χ2=42.04，P<0.01，差异有高度统计学意义(见表4)。

表2 AFP、AFP-L3、AFP-L3%诊断HCC的ROC曲线下面积

表3 AFP、AFP-L3、AFP-L3%诊断HCC的ROC曲线特征

表4 131例肝病患者AFP-L3阳性率

3 讨论

肝癌的早期诊断仍是当前肝癌诊治研究的热点之一。AFP用于肝癌的诊断报道较多，但是其诊断肝癌的敏感性和特异性并不高[3-4]。本研究中虽然肝癌患者血清中的AFP浓度高于肝硬化和慢性肝炎患者，但是我们发现肝硬化和慢性肝炎患者与肝癌患者AFP有过多的重叠，经ROC曲线分析发现当AFP临界值在70.65 ng/ml时其灵敏度与特异性仅为74.1%和49.4%，与上述文献报道基本一致，说明单纯依赖AFP来鉴别诊断良恶性肝病仍有一定的局限性。

AFP是一种糖蛋白，因与外源性凝集素的亲和性不同，借此可对AFP的来源作出判断。依据与小扁豆凝集素(LCA)的亲和力，AFP被分为三种类型[5]：AFP-L1、AFP-L2和AFP-L3。AFP-L1主要出现在良性的肝脏疾病中如慢性肝炎和肝硬化。AFP-L3只能由肿瘤细胞产生。AFP-L2多数由卵黄囊肿瘤产生，在孕妇的血清中也能被检测到。本文中HCC患者AFP-L3%阳性率(73.91%)明显高于肝硬化(23.08%)和慢性肝炎阳性率(9.09%)，有明显统计学意义(χ2=42.04，P<0.01)。本研究显示AFP-L3有助于鉴别AFP升高是由于肝癌或良性肝病所致。

受试者工作特性(receiver operating characteristic，ROC)曲线是一种广泛应用的数据统计方法，综合了灵敏度、特异性两个指标，能客观全面地评价诊断试验的准确性，通过ROC曲线得到各指标最佳的临床判断临界值，更方便临床对数据的理解，较以前参考范围提供的信息更有拓展性。某个指标曲线下面积越大，表明该指标对这种疾病的诊断价值越高。本研究资料显示AFP临界值在70.65 ng/ml时其灵敏度与特异性仅为74.1%和49.4%；AFP-L3临界值在3.325 ng/ml时诊断HCC的灵敏度可提高到85.1%，然而特异性却只有52.9%；而AFP-L3%临界值在6.90%时其灵敏度为66.7%，但特异性可提高到82.4%。AFP-L3%诊断HCC ROC曲线下面积(AUC)最大，为0.795，说明AFP-L3%对肝细胞癌诊断准确度明显高于AFP和AFP-L3绝对值，这与国内外文献报道基本一致[6-7]。因此，微量离心柱法检测AFP-L3在良恶性肝脏病变鉴别诊断中具有重要临床价值，非常适用于良、恶性肝病的鉴别诊断，从而使肝癌得到及早诊断。

【参考文献】

[1] LI D,MALLORY T,SATOMURA S.AFP-L3:a new generation of tumor marker for hepatocellular carcinoma[J].Clin Chim Acta,2001,313(1-2):15-19.

[2] TAKETA K.Alpha-fetoprotein:reevaluation in hepatology [J].Hepatology,1990,1(6):1420-1432.

[3] HU Bin,TIAN Xiaohui,SUN Jie,etal.Evaluation of individual and combined applications of serum biomarkers for diagnosis of hepatocellular carcinoma:a meta-analysis[J].Int J Mol Sci,2013,14(12):23559-23580.

[4] CHOI JY,JUNG SW,KIM HY,etal.Diagnostic value of AFP-L3 and PIVKA-II in hepatocellular carcinoma according to total-AFP[J].World J Gastroenterol,2013,19(3):339-346.

[5] SOTA Y,NAKATA K,KATO Y,etal.Early recognition of hepatocellular carcinoma based on altelred profiles of alpha-fetoprotein[J].N Engl J Med,1993,328:1802-1806.

[6] YI Xiaoyan,YU Shuang,BAO Yixi.Alpha-fetoprotein-L3 in hepatocellular carcinoma:a meta-analysis[J].Clin Chim Acta,2013,425:212-220.

[7] 邢卉春.甲胎蛋白异质体检测在原发性肝癌诊疗中的价值[J].中华检验医学杂志,2013,36(2)：123-124.