5个产地羊角药材中氨基酸比较研究

石岩，刘谦，张永清，李佳

（山东中医药大学，山东 济南 250355）

*中药与天然活性产物专栏*

5个产地羊角药材中氨基酸比较研究

石岩，刘谦，张永清，李佳*

（山东中医药大学，山东 济南 250355）

本文采用高效液相柱前衍生异硫氰酸苯酯法（PITC-HPLC）检测了5个产地羊角药材的氨基酸种类及含量，为完善羊角药材质量标准提供依据。结果表明，5个产地羊角药材氨基酸HPLC与氨基酸标准品溶液的出峰顺序一致，出峰时间接近，PITC-HPLC可用于氨基酸的检测。四川山羊角药材样品中氨基酸总量为94.3%，且多种氨基酸含量较高，远超过其他4个产地样品氨基酸总量。山东菏泽产药材的氨基酸总量也较高，为68.10%，山东平邑、山东莱芜、河北衡水产羊角药材氨基酸含量相近。氨基酸含量应作为羊角药材质量的内在控制指标。

羊角；PITC-HPLC；氨基酸

羊角为牛科动物山羊（Capra hircusLinnaeus）或绵羊（Ovis ariesLinnaeus）的角，具清热、镇惊、解毒之功效，用于小儿发热惊痫、风热头痛、烦躁失眠及肿毒。始载于《本草新编》，《本草纲目》亦曾载：“山羊似羚羊”［1］。

羊角目前被收录于山东省药材标准，但只有性状鉴别，没有规定成分检查项目，内在质量评价需要完善，相关的研究也极少。较多的是山羊角作为羚羊角的替代物及简单药理作用的研究，以及关于山羊角水分、灰分、浸出物、磷脂含量及山羊角提取物氨基酸含量等方面的研究［2－5］。

在我国大多数地区，羊角一般被废弃。但羊角药源充足，价格低廉，为了合理有效利用并进一步完善羊角药材标准，本文对5个产地的羊角药材进行氨基酸含量研究，以期为羊角药材质量控制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试剂和材料

天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、脯氨酸标准品购自中国药品生物制品检定所，异硫氰酸苯酯、三乙胺、乙腈、乙酸钠和甲醇均为色谱纯，娃哈哈纯净水。

2014年3月收集四川、河北衡水、山东菏泽、山东莱芜和山东平邑羊角药材，经鉴定，均为牛科动物山羊（Capra hircusLinnaeus）或绵羊（Ovis arisLinnaeus）的角。晒干后磨粉，待用。

1.2 测定方法

参照张波［6］的方法，分别制备标准品溶液及供试品溶液。准确称取10 mg样品于安瓿管中，加入浓度为6 mol／L的HCl溶液10 mL，充氮封管，移入110℃恒温箱中水解22 h，取出冷却；吸取20μL水解液于1.5 mL离心管中，真空干燥备用。加衍生剂异硫氰酸苯酯（PITC）进行柱前衍生。选用Agilent TC-C18柱色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），梯度洗脱，流动相A为0.1 mol／L乙酸钠（pH＝6.50）：乙腈＝93：7；流动相B为乙腈：水＝4：1；流速：1.0 mL／min；检测波长：254 nm；柱温：36℃，进样量为10μL。利用外标校正曲线法计算氨基酸含量。流动相的洗脱见表1。

1.2 数据统计分析

采用SPSS11.5统计软件分析试验所得数据。

2 结果与分析

2.1 不同样品氨基酸PITC-HPLC检测图分析

5个产地羊角药材样品氨基酸的出峰顺序与氨基酸标准品的出峰顺序相同，样品氨基酸的出峰时间也与氨基酸标准品的出峰时间接近，见图1。以山东菏泽样品为例，17种氨基酸的出峰时间（min）分别为：2.72、3.05、5.86、6.42、6.61、7.95、8.87、9.50、10.07、14.76、15.57、16.29、17.33、17.79、18.00、19.19、20.42（见表2）。

2.2 不同产地样品氨基酸含量比较

5个产地羊角药材的氨基酸含量见表2，由表2可以看出，5个产地的羊角药材总氨基酸含量差异显著，四川省样品氨基酸总量高达94.3%；山东菏泽样品氨基酸总量也较高，为68.10%；山东莱芜、山东平邑、河北省样品氨基酸总量分别为25.5%、37.58%、27.9%。除色氨酸外，四川省样品苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸和苯丙氨酸7种人体必需的氨基酸含量为28.32%，山东菏泽样品为19.95%，山东莱芜和河北省样品接近，分别为6.41%和6.8%。

5个产地羊角药材中天冬氨酸、谷氨酸和丝氨酸含量差异显著。河北省、山东莱芜样品组氨酸含量较低（≤0.01%），来自山东菏泽的样品组氨酸含量最高（1.38%），为前二者的138倍；四川省样品组氨酸含量为0.78%，是山东平邑样品组氨酸含量的5.6倍。这几类氨基酸加热易分解［7］，因此在山羊角药材干燥过程中应严格控制干燥时间和温度。

作为一种半必需氨基酸，精氨酸在5个羊角药材样品中的含量也有差异。四川省样品中含量最高，山东菏泽样品精氨酸含量也较高，山东莱芜、河北样品中精氨酸含量较低，两产地样品精氨酸含量无差异。

由此可见，各地药材氨基酸含量同中存异。可以根据实际需要氨基酸种类，正确使用不同产地药材。

表2 不同产地羊角药材样品HPLC氨基酸出峰顺序及含量Table 2 Peak order andcontent of amino acids for Caprae seu ovis cornu from5 different production areas

3 讨论与结论

检测氨基酸的方法较多，常采用衍生化间接分析。衍生剂不同，测定时间、稳定性和出峰顺序均有所不同。本文采用衍生剂异硫氰酸苯酯（PITC）进行柱前衍生测定氨基酸，5个产地羊角药材中17种氨基酸的出峰顺序一致，出峰时间接近，与张波［6］、于京平［8］等采用此法测定时的氨基酸出峰顺序相同。而采用2，4-二硝基氯苯（DNFB）进行柱前衍生，李娜［9］与杨清林等［10］的结果有差别。PITC-HPLC可用于测定氨基酸及其含量。测定氨基酸含量，尤其是氨基酸作为控制药材内在质量的指标时，应选取稳定性更高的测定方法。

氨基酸是构成人体最基本的物质之一，具有广泛的生理活性。有研究证实谷氨酸、精氨酸、苏氨酸和赖氨酸能够有效提高机体的免疫功能。组氨酸可减轻癫痫发作的程度，对幼儿和尿毒症患者来说为必需氨基酸。色氨酸具有防霉、消毒及抗氧化等作用，还可镇痛、抗抑郁、抗高压以及促进睡眠，是一类天然的营养素［11］。本研究在提取氨基酸时用酸水解，色氨酸被破坏，故无法检出。色氨酸是否为羊角药理作用发挥过程中重要的氨基酸还有待进一步研究，山羊角中复合氨基酸起主要药理作用。所研究的5个产地的这5种氨基酸的总量分别为四川（31.94%）＞山东菏泽（26.31%）＞山东平邑（9.75%）＞河北衡水（7.37%）＞山东莱芜（6.57%）。是这5种氨基酸还是总氨基酸对羊角药效起作用？控制药材质量的是氨基酸总量还是几种主要氨基酸？如果是几种主要的氨基酸，氨基酸的种类组成及含量如何？这些均需做深入研究。

文中5个产地氨基酸含量比较表明，山东菏泽和四川样品氨基酸含量远高于其他3个样品，最高值为最低值的2.67倍，其他3个样品的氨基酸含量相近。氨基酸含量应作为羊角药材质量的内在控制指标。

［1］山东省食品药品监督管理局.山东省中药材标准［M］.2012版.济南：山东省科技出版社，2013：93－96.

［2］任伯颖，曲朋，康馨元，等.不同产地山羊角水分和浸出物研究［J］.吉林中医药，2014，34（5）：489－490，510.

［3］曲朋，赵好冬，龙宇，等.不同产地山羊角药材灰分测定研究［J］.吉林中医药，2014，34（6）：606－608.

［4］姜清华，翟延君，王笑康，等.羚羊角与其他羊角磷脂含量比较［J］.实用药物与临床，2006，9（5）：278－279.

［5］刘绍勇，薛东升，李江海，等.山羊角提取物中氨基酸的种类研究与含量测定［J］.中南药学，2014，12（3）：271－274.

［6］张波.栝楼根部形态发育及其药用品质形成研究［D］.济南：山东中医药大学，2013.7

［7］李江海，王伯初，王建，等.山羊角提取物中焦谷氨酸含量测定研究［J］.药物分析杂志，2011，31（8）：1567－1570.

［8］于京平.栝楼果皮生药学研究［D］.济南：山东中医药大学.2014.

［9］李娜.贝类中氨基酸、脂肪酸和重金属的含量分析及其产品质量评价［D］.保定：河北农业大学，2011.

［10］杨清林，傅亚.山羊角提取物中氨基酸含量测定［J］.中药材，2011，34（7）：1023－1026

［11］梁晓庆.绞股蓝蛋白质、氨基酸含量测定及其相关性分析［D］.西安：陕西师范大学，2012.

Amino acid comparative study of Caprae seuovis cornu from five different production areas

SHI Yan，LIU Qian，ZHANG Yong-qing，LI Jia*
（Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China）

We employed PITC-HPLC to detec t amino acidcomposition andcontent of Cap rae seu ovis cornu from 5 different produc tion areas to provide the foundation for the imp rovement of its quality standard．Results show that the standardamino acidsolution andamino acidHPLC of Cap rae seu ovis cornu from5 different areas have consistent peak order andsimilar peak time．PITC-HPLC can be usedto detec t amino acidcontent．The totalamino acidconcentration of Cap rae seu ovis cornu fromSichunis 94．3%，much higher than that of other 4 samp les，and many kinds of amino acidconcentration are higher．Amino acidconcentration of the sample from Shandong Heze is 68．10%．Only slight difference exists for the amino acidconcentration of the other three samples from Laiwu，PingyiandHengshui．Amino acidcontent shouldbe usedas an internal parameter to control the quality of Caprae seu ovis cornu．

Cap rae seu ovis cornu；PITC-HPLC；am ino acid

R284.1

A

1002-4026（2014）05-0014-04

10.3976／j.issn.1002－4026.2014.05.003

2014-08-17

国家科技重大专项（2010ZX09401-302-5-12）；山东省科技发展计划（2008GG2NS02022）

石岩（1988－），男，硕士研究生，研究方向为中药资源与质量控制。

*通讯作者，李佳，女，教授，研究方向为中药资源与质量控制。Email：ljytl7172＠163.com