高效液相色谱法测定氟氧头孢钠有关物质

曲学伟

哈药集团技术中心

高效液相色谱法测定氟氧头孢钠有关物质

曲学伟

哈药集团技术中心

目的通过方法筛选，建立注射用氟氧头孢钠有关物质检查方法。方法色谱条件为磷酸盐缓冲液：甲醇（75：25），调整流速主峰出峰时间为9min，系统适用性应符合规定，保留时间应为主峰出峰时间的7倍。结果供试品溶液不稳定，需现配现进样；检测限为35ng/ml；专属性降解产物主要为1-（2-羟乙基）-1氢-四唑-5-硫醇。结论所建立有关物质方法可有效控制产品质量，方法可行。

有关物质；检测限；氟氧头孢钠

氟氧头孢钠为白色至浅黄色粉末，主要用于各种感染，在临床上应用比较广泛，近年来在医院占有率逐渐增加，目前已上市的氟氧头孢钠注射剂只有一家，为日本盐野义制药株式会社在中国进口的制剂，于2001年进口中国，规格有0.5g及1.0g，没有国内厂家上市，主要因为氟氧头孢钠原料合成比较困难，制剂在制备过程中质量不易控制。注射用氟氧头孢钠的进口注册标准2001年批准，有关物质控制不全面，未对主要的已知杂质进行控制，同时没有考察相关杂质与主成分的相对相应因子，同时与日本药典制剂标准相比，未明确出峰时间，保留时间定为主峰的3倍，不同色谱柱导致出峰时间不相同，可能存在杂质不容易检出情况，参照相关标准［2-3］，我们对氟氧头孢钠制剂杂质进行详细研究，建立制剂标准。

1.仪器与材料

Agilent 1260高效液相色谱仪（DAD检测器）。

注射用氟氧头孢钠样品，来源：日本盐野义制药株式会社，规格：0.5g。

氟氧头孢钠对照品及1-（2-羟乙基）-1氢-四唑-5硫醇对照品，来源为日本药典委员会。四甲基氢氧化铵、磷酸氢二钠及甲醇均为色谱纯。

2.方法

2.1方法筛选

对进口注册标准及《日本药典》标准进行比较，可知所用流动相相同，均为磷酸盐缓冲液及甲醇，比例有差异（《日本药典》为75：25，进口注册标准为40：60），检测波长相同均为246nm，《日本药典》规定出峰时间为9min，而进口注册标准没有规定出峰时间，检测波长均为246nm。

我们按照上述色谱条件对检测色谱条件进行优化，同时也对色谱柱进行筛选，通过筛选可知，当流动相比例为磷酸盐缓冲液—甲醇（25∶75）时，且色谱柱为热电色谱柱（250mm*4.6mm*5um），出峰时间为9min时杂质检出最佳，同时，我们研究发现需进行系统适用性考察，因为在供试品加入流动相制成0.25mg/ml的溶液后，在60℃下放置1小时，在主峰之后会出现5%左右的杂质，该杂质与主峰比较难分离，只有主峰在9min时才可有效分离，作为系统适用性检测条件，如出峰在10min之后，该杂质无法与主峰分离。因此，确定主峰出峰时间为9min，主峰出峰时间为9min。

2.2检测限

取氟氧头孢钠对照品加水制成不同浓度溶液，洗针进样，以信噪比约为3∶1时溶液浓度作为检测限浓度。结果本品检测限溶液浓度为35ng/ml（信噪比为2.8）。供试品溶液的浓度为0.25mg/ml，供试品溶液与检测限的溶液之比约为7100，表明0.015%以上的杂质均可有效检出，证明供试品溶度可行。

2.3耐用性试验

变换柱温、改变流速、改变流动相比例，考察杂质检出情况，结果各条件变化时要保证主峰出峰时间在9min，否则系统适用性不符合规定，因此，在测定本品时主要调整主峰出峰时间，使其在9min。

2.4溶液稳定性试验

取供试品溶液，分别于0小时、1小时、2小时、4小时测定，结果1小时时供试品杂质明显增加，说明溶液不稳定，应现配现进。

2.5专属性试验

考察供试品溶液在酸、碱、氧化、高温及强光条件下稳定性情况，使用DAD检测器全波长监测，对主峰纯度进行检测，为确定检测波长提供依据，评价在各条件下稳定性及判断制剂可能降解产物。结果主峰纯度均符合要求，破坏时的主要产物为1-（2-羟乙基）-1氢-四唑-5-硫醇，该杂质为合成过程中起始物料，也是制剂主要杂质，出峰时间与主峰保留时间约为0.45。通过专属性试验发现有一个杂质出峰时间比较晚，该杂质含量约为0.5%左右，主峰出峰时间为9min，该杂质出峰时间约50min。

2.6相对相应因子测定

采用标准曲线斜率之比测定氟氧头孢钠与1-（2-羟乙基）-1氢-四唑-5-硫醇得相对相应因子，为准确测定该杂质量提供依据。制备不同浓度样品溶液，进样并取5点绘制线性，结果氟氧头孢钠与该杂质的相对相应因子为0.48。

通过上述方法学验证证明本品所建立的方法可行，保留时间为主峰7倍，在进样前应进行系统适用性考察，即取供试品加流动相制成0.25mg/ml的溶液后，于60℃下放置1小时，作为系统适用性溶液

2.7三批供试品检查

取三批供试品，加水制成浓度为0.25mg/ml的溶液作为供试品溶液，取供试品溶液0.5ml加水50ml作为对照溶液，取样进样，已知杂质（1-（2-羟乙基）-1氢-四唑-5-硫醇）按照相对相应因子计算，结果已知杂质均在0.5%左右，50min左右杂质为0.6%左右，其它单一未知杂质均小于0.1%，三批供试品杂质基本一致。

3.讨论

方法学研究结果表明所建立方法可行，溶液不稳定需要现配现进，检测限为35ng/ml，供试品溶液浓度与检测限比值约为7100，说明供试品浓度可行，破坏条件下降解产物主要为已知杂质。比较进口注册标准及日本药典标准可知，9min出峰时间对杂质有效检出尤为重要，在新的方法中增加了系统适用性考察，通过破坏样品，破坏出来的杂质峰与主峰应有效分离，同时我们研究发现，在主峰出峰时间为9min时，在50min有一比较大杂质峰，同时我们对已知杂质与氟氧头孢钠的相对相应因子进行测定，相对相应因子为0.48，这样可以更准确测定杂质量。通过上述研究，可知进口注册标准存在不完善的地方，我们建立的质量标准可更有效地控制产品质量。

［1］李波，何洪，陆豫.氟氧头孢中间体1-羟乙基-5-巯基-1H-四唑的合成进展.化学世界，2014，55（4）∶247-250.

［2］注射用氟氧头孢钠日本药典标准（JP16）.

［3］注射用氟氧头孢钠进口注册标准（X20010221）.

曲学伟（1983-），女，黑龙江省木兰县人，硕士研究生，中级，作者单位：哈药集团技术中心，研究方向：药物质量研究。