组织因子途径抑制物-2和趋化因子受体-4在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

纪涛，朱水波，董永强，张晓明，梁江水，殷桂林

（广州军区武汉总医院心胸外科，武汉，430070）

组织因子途径抑制物-2和趋化因子受体-4在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

纪涛，朱水波，董永强，张晓明，梁江水，殷桂林

（广州军区武汉总医院心胸外科，武汉，430070）

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）和趋化因子受体-4（CXCR4）蛋白表达与临床病理特征及预后的关系。方法应用免疫组织化学方法检测60例NSCLC癌组织及癌旁组织及10例正常组织中的TFPI-2及CXCR4，并分析TFPI-2和CXCR4的表达水平与性别、年龄、组织类型、分化程度、TNM分期及淋巴结转移的关系。结果TFPI-2在NSCLC组织中的表达水平明显低于癌旁组织和正常组织，CXCR4表达水平在癌组织中明显高于癌旁组织和正常组织（P＜0.05）。TFPI-2和CXCR4表达与性别、年龄、组织类型、分化程度、TNM分期无关，仅仅与淋巴结转移有关（P＜0.05）。TFPI-2和CXCR4在NSCLC组织中呈现负相关（r=-0.26，P＜0.05）。结论TFPI-2可能通过抑制增高的CXCR4表达来影响肿瘤的迁徙转移。

癌，非小细胞肺；受体，CXCR4；丝氨酸蛋白酶抑制剂

肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，目前一直呈上升趋势，其中约80%为非小细胞肺癌［1］。抑制肿瘤的侵袭性生长和转移是改善患者5年生存率的关键因素。研究发现，趋化因子及其受体介导肿瘤特异性器官转移主要通过基质细胞衍生因子／趋化因子受体-4（CXCR4）通路实现的［2-3］。组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）在维持细胞外基质结构完整性以及调控肿瘤细胞侵袭、转移方面起着重要作用，具有抗炎、抑制血管生成和肿瘤生长，抑制内皮细胞增殖、诱导细胞凋亡等多种生物功能［4-5］。本研究通过检测CXCR4和TFPI-2在非小细胞肺癌组织中的表达情况，结合临床资料，分析其与临床病理参数和预后的关系。

1 资料与方法

1.1 资料来源 收集2011年11月至2012年11月在广州军区武汉总医院行非小细胞肺癌肿瘤切除标本60例，分别收集癌组织和癌旁组织（距离肿瘤边缘5 cm）标本，35例为男性（58.3%），25例为女性（41.7%），年龄36～76岁，平均年龄61岁。按国际抗癌协会（UICC）1997年修订的肺癌TNM临床分期标准：I期33例（55.0%）、Ⅱ期12例（20.0%）、Ⅲ期15例（25.0%）；高分化4例（6.7%）、中分化41例（68.3%）、低分化15例（25%）；肿瘤直径＞3 cm 47例，≤3 cm 13例，有淋巴结转移39例，无淋巴结转移21例。10例正常肺组织取自肺大疱行手术切除的患者。所有标本切取后均经10%中性甲醛溶液固定、石蜡包埋，4μm连续切片，所有患者术前均未行放化疗，所切除标本均经常规病理确诊。

1.2 实验方法及步骤 CXCR4、TFPI-2兔抗人多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，DAB酶底物显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用免疫组织化学SP法染色，按照试剂盒说明书步骤进行。石蜡切片常规脱蜡后采用高压锅进行抗原修复，滴加100 mL／L正常血清，中和非特异性抗原。一抗VEGF（1∶100）、CXCR4（1∶100）、TFPI-2（1∶100）孵育过夜，滴加生物素化二抗工作液，辣根过氧化物标记链霉卵白素、DAB显色，苏木精复染，脱水、透明后中性树胶封固。PBS代替一抗，作为阴性对照，用已知的非小细胞肺癌切片作为阳性对照。

1.3 结果判定 以胞浆或胞核中出现黄色或棕褐色颗粒为阳性。采用半定量计分法，随机选择5个高倍视野（400倍），计数1000个肿瘤细胞，计算阳性细胞百分率。阳性细胞数评分标准：＜5%记为0分；5%～25%计为1分，26%～50%计为2分。51%～75%计为3分，＞75%计为4分。染色强度评分标准：无色计为0分，淡黄色计为1分；棕黄色计为2分；棕褐色计为3分。上述两种评分的乘积≥4为阳性，＜4为阴性。

1.4 统计学处理 应用SPSS16.0统计软件处理数据，计量资料采用 χ2检验，相关性检验采用Spearman相关性分析。

2 结果

2.1 TFPI-2及CXCR4在NSCLC、癌旁组织及正常肺组织中的表达 TFPI-2和CXCR4蛋白表达主要定位于NSCLC的细胞浆。TFPI-2蛋白在NSCLC中的阳性表达水平为57.6%；低于癌旁组织的64.8%和正常肺组织的73.4%，差异有统计学意义（P＜0.05）。分析CXCR4发现在NSCLC中的阳性表达水平78.3%，在癌旁组织和正常组织中表达水平分别为30.5%和8.9%，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 TFPI-2及CXCR4表达与NSCLC临床病理学的关系 TFPI-2及CXCR4蛋白表达水平与NSCLC患者的年龄、性别、病理类型、肿瘤大小、分化程度、临床分期无关，仅与淋巴结转移有关（P＜0.05），见表1。

表1 TFPI-2、VEGF的表达与非小细胞肺癌临床病理资料的关系［例（%）］

2.3 NSCLC组织中TFPI-2及CXCR4表达的相关性

Spearman相关性分析结果表明，TFPI-2和CXCR4蛋白在非小细胞肺癌中表达呈现负相关，见表2。

表2 非小细胞肺癌组织标本中TFPI-2与CXCR4表达相关性

3 讨论

研究发现，对于胰腺癌患者，TFPI-2高表达患者术后生存时间明显优于低表达组，且其表达水平可作为影响胰腺癌患者预后的独立因素，可作为判断胰腺癌患者预后的因素［6-7］。我们通过研究发现，TFPI-2在正常肺组织中的表达明显高于非小细胞肺癌组织，提示其可能在诱导细胞凋亡中发挥一定的作用［8-9］。进一步研究发现TFPI-2可以通过抑制新生血管的形成来抑制肿瘤细胞的增殖，抑制肿瘤细胞对周围组织的侵袭及远处转移［10］。本研究结果显示，TFPI-2蛋白在NSCLC中的阳性表达水平为57.6%；低于癌旁组织的64.8%和正常肺组织的73.4%，其差异有统计学意义（P＜0.05），可见在正常肺组织中其表达水平明显高于癌组织。进一步研究发现，TFPI-2蛋白表达水平与NSCLC患者的年龄、性别、病理类型、肿瘤大小、分化程度、临床分期无关，仅与淋巴结转移有关，可见TFPI-2在抑制非小细胞肺癌细胞侵袭转移中具有一定的抑制作用。

近来研究发现趋化因子及其受体在肿瘤器官中的特异性转移中具有重要作用［11-12］。我们通过对60例NSCLC组织中CXCR4的表达水平的检测发现，CXCR4发现在NSCLC中的阳性表达水平78.3%，在癌旁组织和正常组织中表达水平分别为30.5%和8.9%，其差异有统计学意义，分析发现CXCR4蛋白表达水平与NSCLC患者的年龄、性别、病理类型、肿瘤大小、分化程度、临床分期无关，仅与淋巴结转移有关。进一步分析发现，对于TFPI-2和CXCR4的相关性发现，两者的相关系数为-0.26，可见在TFPI-2高水平的表达能抑制CXCR4的表达水平，两者究竟有何种关系，目前仍需进一步研究。

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Clinical significance of TFPI-2 and CXCR4 expression in non-small cell lung cancer

JITao，ZHU Shuibo，DONG Yongqiang，ZHANGXiaoming，LIANG Jiangshui，YIN Guilin
（Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery，Wuhan General Hospital of Guangzhou Command，Wuhan 430070，China.）

Dong Yongqiang，Email：yongqiang.dong＠live.com

ObjectiveTo explore the expression of tissue factor way inhibitor-2（TFPI-2）and chemokine receptor-4（CXCR4）protein，clinical pathological characteristics and prognosis in the non-small cell lung cancer（NSCLC）.Methods The expression of TFPI-2 and CXCR4 in tumor issues and adjacentnormal lung tissues collected from 60 NSCLC patients，and normal tissue collected from 10 healthy subjectswere detected by immunohistochemistry.The correlation of the level of CXCR4 and TFPI-2 and the gender，age，histological type，degree of differentiation，lymph nodemetastasis，TNM stage was analyzed.ResultsThe level of TFPI-2 in tumor tissueswas significantly lower than that in carcinoma adjacent tissues and normal tissues，and the level of CXCR4 in the tumor tissue is obviously higher than that in the carcinoma adjacent tissues and normal tissues（P＜0.05）.There was an correlation of TFPI-2 and CXCR4 level with lymph node metastasis（P＜0.05），but this correlation was not seen in the gender，age，histological type，degree of differentiation and TNM staging.The TFPI-2level was negatively correlated with CXCR4 level in NSCLC（r=0.26，P＜0.05）.Conclusions TFPI-2 may influence the migration of tumor metastasis through the inhibition of increased CXCR4 expression.

Carcinoma，non-small-cell lung；Receptors，CXCR4；Serine proteinase inhibitors

R734.2

A

10.3969／J.issn.1672-6790.2014.03.021

2013-08-05）

武汉市青年科技晨光计划项目（201050231090）

纪涛，主治医师，Email：wuhanjitao＠yahoo.cn

董永强，副主任医师，Email：yongqiang.dong＠live.com