检测血尿酸的方法比较及进展

王璟

三诺讲糖

检测血尿酸的方法比较及进展

王璟

近年来随着人们生活水平的提高，饮食结构的变化，嘌呤的摄入量也明显增加，高尿酸血症患者明显增多引发了一系列疾病。

测定尿酸的临床意义在于：①血尿酸过量可导致痛风，测定血清尿酸含量对痛风的诊断和观察是一项灵敏的指标。②尿酸水平可反映体内超氧阴离子自由基水平，在急性脑血管病发作时产生大量超氧阴离子自由基，所以脑出血脑梗塞患者血清尿酸较正常人有明显升高。③血清尿酸含量测定可为心力衰竭疾病的诊断提供重要的依据，血清尿酸水平升高是心血管疾病恶化及其死亡率增加的一个危险因素，检测尿酸水平是评估其预后的一个有意义的生化指标。④血清尿酸增多还见于各种类型的肾脏疾病，肾功能衰竭早期，即可出现血清尿酸含量明显升高，因此血清尿酸含量是预防肾脏疾病的一个早期灵敏可靠的指标之一。⑤血清尿酸含量测定在糖尿病诊断方面具有重要意义，糖尿病患者血清尿酸水平显著高于正常人，尿酸的增加是糖尿病的主要特点之一，尿酸定量测定可作为其检测的一个重要指标。可见血清尿酸含量测定，是临床检测的极为重要的生化指标之一，为临床诊断和观察疾病提供了可靠的依据。

目前测定尿酸的方法主要有磷钨酸还原法、酶法、伏安法、毛细管电泳法、液相色谱法和同位素稀释质谱法等。

1 磷钨酸法

早在1894年，有研究者发现尿酸在碱性条件下能还原磷钨酸。1912年又有研究者首先利用这一原理实现对尿酸含量的测定，后又经一系列的改良。其反应原理是：无蛋白的血清滤过液中的尿酸在碱性溶液中被磷钨酸氧化成尿囊素及CO2，而磷钨酸被还原成钨蓝，可用比色法测定660nm处波长，根据吸光度的变化计算尿酸的含量。

由于方法测定线性范围窄(＜594.8μmol/ L)，尿酸在无蛋白滤液中的稳定性差，尿酸与蛋白产生共沉淀而影响结果，为了防止产物褪色，试剂中加入了有毒的氰化物，并且方法容易受其他非尿酸还原试剂，如麦角硫因、谷胱甘肽、抗坏血酸及糖等物质的干扰，以及特异性不强，目前临床上已经很少应用。

2 酶法

20世纪30年代酶试剂用于临床生化指标测定，70年代得到了较大发展。目前临床上常用的检测尿酸的方法为单酶法，其基本原理是通过单一酶促反应后，利用各种方法测定底物或者产物的浓度来求待测物含量。

酶法进行检测尿酸的方法很多，目前最常用的是尿酸氧化酶传感器检测法。但是各种酶法受不同试剂仪器等的干扰各个方法之间的检测结果偏差很大检测结果没有可比性。

3 伏安法

Kolthoff和Laitinen等人把基于研究电流-电压曲线特性进行分析的方法统称为伏安法。伏安法是目前较常用的检测尿酸的方法近年来伏安法检测尿酸在理论研究和实际运用于临床诊断上都取得了很大的发展。伏安法检测尿酸常用的方法有两种：微电极差示脉冲伏安法和吸附溶出伏安法。

微电极差示脉冲伏安法法测定结果较为准确，可望用于在线检测，但目前应用不是十分广泛。吸附溶出伏安法抗干扰能力较强，操作简便，样品处理简单，易于推广。上述系列方法中很多内源物质、外源物质或者仪器本身对测量产生干扰。后来人们研究发展利用高效液相色谱测定血清中的尿酸。

4 高效液相色谱法

此法是利用乙腈沉淀血清中的蛋白质, 过滤后直接进行HPLC测定血清中的尿酸, 样品前处理过程简单; 采用乙酸铵缓冲体系, 避免使用有机相, 对环境的污染小，具有较高准确性, 是血清中尿酸测定较好的参考方法，但是需要使用复杂的柱切换设备。

5 毛细管电泳法

Grune等人用高效毛细管电泳法同时检测了系列嘌呤碱和核酸。Xu等人采用毛细管区带电泳对血清中的尿酸进行定性和定量。他们用30cm×25μM(I.D.)熔融二氧化硅毛细管柱，采用两性离子缓冲液，用碳纤维作为工作电极，方法的检测限为0.48fmol。与液相色谱法相比，此方法前处理相对较简单，线性范围宽，进样量少，较适合用于日常分析。

6 同位素稀释质谱法

1995年国际物质量咨询委员会(CCQM)在巴黎召开的第六次会议将同位素稀释质谱法(Isotope dilution mass spectrometry, ID/MS) 精密库仑、电位滴定、凝固点下降和重量法定位于具有绝对测量性质的方法。其中，ID/MS是唯一一种微量痕量和超痕量物质含量的权威测量方法。近年来ID/MS 是最常用的临床检验量值的基准方法。目前国际上正利用ID/MS作为基准方法为人体血清中的胆固醇、葡萄糖、尿酸、尿素肌酐以及甘油三酯等定值。同位素稀释质谱法测定血清尿酸的方法精密、准确。

7 末梢血尿酸测定

末梢血尿酸测定近年来应用于临床工作中，目前已有便携式电子末稍血尿酸测定仪面世（比如EA-11血糖尿酸测试仪）。指尖血采集方便，快捷、取血量少，较静脉抽血化验患者更乐意接受。手指末稍血液循环丰富，采血时血量丰沛。研究显示指尖血与静脉血尿酸有良好相关性，相关系数r为0.938(P＜0．01)。

8 总结

磷钨酸法测尿酸由于容易受到物质的干扰，且特异性不强，目前临床上已经很少应用。酶法、伏安法、毛细管电泳法、液相色谱法一般用于血清中尿酸的常规检测，这些方法除了需要抽取血液标本以外，尚需要用标准物质来校准，从而保证检测结果的准确性和可比性。同位素稀释质谱法测定血清尿酸的方法精密、准确，适用于临床血清尿酸的监测，但需要采用样品预处理手段，包括净化离子交换衍生化等等因此样品的前处理，过程比较复杂，费时且成本较高。末稍血测定尿酸具有方便，快速、便于随诊等优点。

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