维生素E对吲哚美辛诱导小鼠胃黏膜损伤的愈合干预

王彩冰,晋玲,黄俊杰,黄彦峰,黄永毅

(广西右江民族医学院生理应用研究室,百色 533000)

维生素E对吲哚美辛诱导小鼠胃黏膜损伤的愈合干预

王彩冰,晋玲,黄俊杰,黄彦峰,黄永毅

(广西右江民族医学院生理应用研究室,百色 533000)

目的 观察维生素E对胃黏膜损伤的愈合干预。方法小鼠50只,随机分为5组,每组10只。正常对照组给予0.9%氯化钠溶液,其余组给予吲哚美辛20mg·kg-1灌胃;4 h后,正常对照组和模型对照组给予0.9%氯化钠溶液,西咪替丁组给予西咪替丁200 mg·kg-1,维生素E低剂量组和高剂量组分别给予维生素E 25,50 mg·kg-1,每天灌胃一次。5 d后检测各组小鼠胃黏膜损伤程度及血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。结果西咪替丁组、维生素E低剂量组和高剂量组的胃黏膜损伤指数明显低于模型对照组,明显高于正常对照组(均P＜0.01);维生素E高剂量组的胃黏膜损伤指数明显低于西咪替丁组(P＜0.05);西咪替丁组、维生素E低剂量组和高剂量组的胃黏膜损伤愈合率明显高于模型对照组(均P＜0.01)。维生素E低剂量组和高剂量组的血清SOD活性明显低于模型对照组和西咪替丁组,西咪替丁组的血清SOD活性明显高于正常对照组,低于模型对照组(均P＜0.05);西咪替丁组、维生素E低剂量组和高剂量组血清MDA含量均明显低于模型对照组(P＜0.05或P＜0.01)。结论维生素E可明显促进胃黏膜损伤愈合,其高剂量作用强于西咪替丁,低剂量作用与西咪替丁相当。

维生素E;损伤,胃黏膜;愈合;小鼠

吲哚美辛是非甾体类抗炎、镇痛、解热药,临床常用于治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎、急性痛风等,随着近年的研究及临床应用的不断发展,发现吲哚美辛对新生儿动脉导管未闭、肾性蛋白尿等有治疗作用,并有抗肿瘤作用；但服用吲哚美辛会造成胃肠黏膜损伤,使其在临床上的使用受到了一定程度的影响[1-5]。本课题组的动物实验研究证明,维生素E (vitamin E,VE)可预防胃黏膜损伤[6],而VE对胃黏膜损伤的治疗研究笔者目前尚未见文献报道。笔者采用吲哚美辛诱导小鼠胃黏膜损伤模型,观察VE对胃黏膜损伤的愈合干预效果,为临床进一步开发和利用VE提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物 昆明种小鼠,雌雄兼用,体质量20～25 g,由广西右江民族医学院实验动物中心提供,动物生产合格证号:SCXK(桂)2009-0003。小鼠放置在室温22～25℃、相对湿度45%～55%及通风环境中饲养。

1.2 药品、试剂、仪器 VE注射液(上海第九制药厂,批号:20100801)；吲哚美辛片(山西省大同云岗制药厂,批号:20101001)；西咪替丁注射液(广东南国药业有限公司,批号:1011192)；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)检测试剂盒、丙二醛(malondialdehyde,MDA)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号分别为20110728,20110723)；0.9%氯化钠注射液(贵州大华制药有限公司,批号: 20101223)；碳酸氢钠(成都市科龙化工试剂厂,分析纯,批号:20100522)；甲醛(成都市科龙化工试剂厂,纯度:40%,批号:20091006)；722型分光光度计(上海精密科学仪器有限公司,型号:722G)；CanonPowershot A2000 IS数码照相机[佳能(中国)有限公司]。

1.3 分组方法 小鼠50只,随机分为正常对照组、模型对照组、西咪替丁组、VE低剂量及高剂量组,共5组,每组10只。

1.4 胃黏膜损伤模型的制备及给药方法 将吲哚美辛片溶于5%碳酸氢钠溶液中,用纯化水稀释制成2 mg·mL-1混悬液。实验前动物禁食24 h,自由饮水至实验前2 h。除正常对照组给0.9%氯化钠注射液10 m L·kg-1灌胃外,其余各组小鼠给予吲哚美辛20 mg·kg-1灌胃4 h后,正常对照组和模型对照组(0.9%氯化钠注射液10 mL·kg-1)、西咪替丁组(西咪替丁200 mg·kg-1)、VE低剂量和高剂量组(25, 50 mg·kg-1,由于对胃黏膜损伤时的VE治疗用量目前还未明确,所以本研究选用其临床用量范围内的最高值为高剂量,中间值为低剂量[7])给予相应药物灌胃治疗,每天1次,共5 d,第6天采用摘除眼球法取血后颈椎脱臼法处死小鼠。处死小鼠立即剖腹,结扎贲门及幽门,取出胃,向胃腔注入4 g·L-1甲醛溶液2 mL并将胃浸泡于该甲醛溶液中固定10 min。

1.5 胃黏膜损伤程度检测 将胃沿大弯剪开,把胃黏膜洗净后展开于平板上,检测胃黏膜损伤程度。损伤程度参照KITAGAWA等[8]方法用损伤指数表示,按黏膜损伤的长度评分并计算损伤指数:≤1.0 mm为1分,～2.0 mm为2分,依此类推；测量、评分、记录均由同一人进行；全胃评分的总和为该小鼠的胃黏膜损伤指数,并通过损伤指数计算各给药组的胃黏膜损伤愈合率。

损伤愈合率(%)=(模型组损伤指数-给药组损伤指数)÷模型组损伤指数×100%。

1.6 血清SOD活性、MDA含量的测定 通过摘除眼球法取血放置于试管中,分离血清,用SOD测定试剂盒、MDA测定试剂盒,按说明书要求进行操作,在722型分光光度计上测定吸光度,计算血清SOD活性和MDA含量。

1.7 统计学方法 实验结果数据用SPSS 16.0版统计软件进行统计分析,两组间均数用方差分析组间两两比较方法检验,统计结果以均数±标准差()表示；两组间百分率比较用Χ2(卡方)检验,统计结果以百分比(%)表示,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠胃黏膜损伤指数及愈合率比较 见表1。模型对照组、西咪替丁组、VE低剂量和高剂量组的胃黏膜损伤指数均明显高于正常对照组(q=29.95,3.74,4.93, 4.65,P＜0.01),而明显低于模型对照组(q=23.21, 24.97,25.29,P＜0.01)；西咪替丁组的胃黏膜损伤指数与VE低剂量组差异无统计学意义(q=1.76,P＞0.05),而明显高于VE高剂量组(q=2.09,P＜0.05),VE低剂量组的胃黏膜损伤指数与VE高剂量组差异无统计学意义(q=0.32,P＞0.05)。西咪替丁组、VE低剂量和高剂量组的胃黏膜损伤愈合率两两之间比较均差异无统计学意义(Χ2=0.51,0.51,0.00,P＞0.05),但均明显高于模型对照组(Χ2=73.53,70.53,77.58,P＜0.01)。5组小鼠胃黏膜损伤愈合情况见图1。

2.2 小鼠血清SOD活性和MDA含量的比较 模型对照组、西咪替丁组的SOD活性均明显高于正常对照组(q=4.50,2.47,P＜0.05或P＜0.01),VE低剂量和高剂量组的SOD活性与正常对照组差异无统计学意义(q=0.26,0.36,P＞0.05)；西咪替丁组、VE低剂量和高剂量组的SOD活性均明显低于模型对照组(q= 2.03,4.23,4.14,P＜0.05或P＜0.01),VE低剂量和高剂量组的SOD活性均明显低于西咪替丁组(q= 2.20,2.11,P＜0.05),VE低剂量与高剂量组的SOD活性差异无统计学意义(q=0.10,P＞0.05)。模型对照组的MDA含量明显高于正常对照组(q=2.89,P＜0.01),西咪替丁组、VE低剂量和高剂量组的MDA含量与正常对照组差异无统计学意义(q=0.76,0.20, 0.13,P＞0.05),而均明显低于模型对照组(q=2.13, 2.68,2.76,P＜0.05或P＜0.01),西咪替丁组、VE低剂量和高剂量组的MDA含量两两之间比较差异无统计学意义(q=0.56,0.63,0.07,P＞0.05)。

表1 5组小鼠胃黏膜损伤指数、血清SOD活性和M DA含量比较Tab.1 Comparison of gastricmucosal injury index,SOD activity and MDA content in serum among five groups of mice

表1 5组小鼠胃黏膜损伤指数、血清SOD活性和M DA含量比较Tab.1 Comparison of gastricmucosal injury index,SOD activity and MDA content in serum among five groups of mice

与正常对照组比较,*1P＜0.01,*3P＜0.05;与模型对照组比较,*2P＜0.01,*4P＜0.05;与西咪替丁组比较,*5P＜0.05Compared with normal control group,*1P＜0.01,*3P＜0.05;compared withmodel control group,*2P＜0.01,*4P＜0.05;compared with cimetidine group,*5P＜0.05

组别小鼠/只胃黏膜损伤指数/分愈合率/% SOD活性/ (nU·mL-1) MDA含量/ (nmol·mL-1)正常对照组10 0.00±0.00…213.78±31.72 3.18±0.20模型对照组10 56.00±7.85*10.00 288.31±52.21*13.54±0.37*1西咪替丁组10 12.60±3.50*1*277.50*2254.64±29.80*3*43.27±0.24*4VE低剂量组10 9.30±2.83*1*283.39*2218.15±33.95*2*53.21±0.26*2高剂量组10 8.70±2.36*1*2*584.46*2219.20±33.03*2*53.20±0.29*2

A.正常对照组;B.模型对照组;C.西咪替丁组;D.VE低剂量组;E.VE高剂量组图1 5组小鼠胃黏膜损伤外观图A.normal control group；B.model control group；C.cimetidine group；D.low-dose VE group；E.high-dose VE group Fig.1 Appearance of gastric mucosal injury among five groups of mice

3 讨论

吲哚美辛通过抑制胃黏膜前列腺素合成、减少胃黏膜血流量和增加胃酸分泌量,使胃黏膜本身的防御保护功能降低而容易遭受氧自由基的氧化攻击,导致胃黏膜损伤[9-10]。西咪替丁通过阻断组胺与H2受体结合,间接抑制胃泌素和胆碱能神经对壁细胞的泌酸效应,使壁细胞分泌胃酸受到抑制,从而起到保护胃黏膜作用[11]。SOD是体内有氧代谢细胞生存所必需的一种酶,能有效地清除代谢过程中所产生的超氧阴离子自由基()。SOD活性上升是一种氧化应激反应,测定脂质过氧化物的中间代谢产物MDA含量能反映脂质过氧化物浓度并间接反映组织细胞被损伤程度[12]。

研究发现,VE对心、肝、肾、胃和生殖等器官起保护作用[6,13-16]。本研究结果显示,模型对照组的胃黏膜损伤指数、SOD活性、MDA含量均明显高于正常对照组,说明参与胃黏膜损伤的过程。西咪替丁和VE都能促进胃黏膜损伤愈合,低剂量VE促进胃黏膜损伤愈合效应与西咪替丁相当,高剂量VE优于西咪替丁。VE参与抗氧化、清除、防止脂质过氧化过程,通过提高胃黏膜细胞的抗氧化和防御保护功能来维持胃黏膜细胞膜的稳定性,起到保护和修复胃黏膜的作用。但VE是否能促进前列腺素和一氧化氮合成、抑制胃酸分泌的功能,有待进一步研究。

VE治疗和预防胃黏膜损伤的效果相当或优于临床上常用于治疗消化性溃疡的西咪替丁[6],这为临床寻找预防和治疗消化道溃疡的新药提供线索,可为VE的进一步开发利用提供参考。

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DOI 10.3870/yydb.2014.05.011

Intervention by Vitamin E on Indomethacin-induced Gastric Mucosal Injury in Mice

WANG Cai-bing,JIN Ling,HUANG Jun-jie,HUANG Yan-feng,HUANG Yong-yi
(Physiological Application Studio of Youjiang Medical College for Nationalities,Baise 533000,China)

ObjectiveTo investigate interventions of vitamin E(VE)on indomethacin-induced gastric mucosal injury.MethodsFifty mice were randomly divided into 5 groups.Normal control group was administrated with saline,others were intragastrically administrated with indomethacin(20mg·kg-1).After 4 hours,mice were intragastrically treated with saline,cimetidine (200 mg·kg-1),VE(25,50mg·kg-1)once a day for 5 consecutive days.By the end of the treatment,gastric mucosa injury index, serum superoxide dismutase(SOD)activity,and malondialdehyde(MDA)contentwere determined.ResultsGastricmucosal injury indexs of mice treated with cimetidine,VE at low and high doseswere significantly lower than that of the model control and higher than that of the normal control(P＜0.01).VE at high doses showed significantly lessmucosal injury than that of the cimetidine group(P＜0.05).Healing-rate of gastric mucosal injury in cimetidine group,VE low-dose and high-dose groupswere significantly higher than that ofmodel control group(P＜0.01).SOD activity of VE at low and high doses was significantly lower than that of the model control and cimetidine groups(P＜0.05).The results also revealed that cimetidine and two doses of VE significantly elevated SOD activity and lowered the level of MDA(P＜0.05,0.01).ConclusionVE can obviously promote the healing of gastric mucosal injury,especially at high dose,which is better than cimetidine,while,the low dose is comparable with cimetidine.

Vitamin E;Injury,gastricmucosal;Healing;Mice

R977.25;R975.6;R965

A

1004-0781(2014)05-0589-04

2013-05-14

2013-12-30

王彩冰(1962-),女,湖南隆回人,副教授,学士,主要从事药效学研究及生理学教学研究。电话:0776-2849485,E-mail:wangcb4444@163.com。