高效液相色谱分析鲜枣中维生素C

李玉明，邹玉霞

（衡阳师范学院化学与材料科学系，湖南 衡阳 421008）

高效液相色谱分析鲜枣中维生素C

李玉明，邹玉霞

（衡阳师范学院化学与材料科学系，湖南 衡阳 421008）

采用高效液相色谱法对鲜枣中维生素C进行了分析研究，经过一系列的实验条件摸索，最终确定以纯水为流动相，流动相的流速为0.8mL·min-1，检测波长267nm，温度30℃为鲜枣中维生素C的最佳分析条件。此条件下峰形好，峰面积大，标准溶液浓度与峰面积具有良好的线性关系，其相关系数R2＝0.9994。所建立的方法简单﹑快速﹑准确度高，适用于鲜枣中维生素C含量的测定。

高效液相色谱法；鲜枣；维生素C

鲜枣的营养成分既丰富又全面，是“活维生素丸”，具有很高的营养保健价值。维生素C广泛存在于新鲜蔬菜﹑水果中，番茄﹑辣椒﹑柑桔﹑鲜枣中含量较多。维生素C的生理功能主要有保证胶原蛋白的正常合成，抗坏血病，保护牙龈，预防动脉硬化，抗氧化作用[1]，治疗贫血，防癌，提高人体的免疫力[2]，提高机体的应急能力的作用[3]等。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪LC-10AVP，可见-紫外分光光度仪UV2501，超声波脱气装置AS3120，抽滤过滤装置AP-01，电子分析天平。

维生素C标样，磷酸（分析纯)，甲醇（色谱纯），纯水。

1.2 实验方法

1.2.1 流动相的配制

将纯水用0.45μm微孔滤膜真空抽滤，装在洁净的大试剂瓶中，然后超声波脱气15～30min，备用。将甲醇用超声波脱气15～30min，备用。分别以甲醇:纯水为0∶100﹑100∶0﹑5∶95﹑10∶90﹑15∶85﹑20∶80﹑30∶70的比例进行混合，超声波脱气15～30min，备用。

1.2.2 标准溶液的配制

将一定量的维生素C标准品用纯水配制成不同质量浓度的维生素C标准样品溶液。

1.2.3 样品溶液的配制

称取一定量的鲜枣捣碎，加少许0.1%的磷酸溶液，将其研成泥状，再加适量的甲醇溶液，超声波提取1.5h后静置2h，然后高速离心10min，取上清液，再用纯水稀释定容至250mL，摇匀，经0.45μm微孔滤膜真空抽滤，待用[4-6]。

1.2.4 分析方法

配制好流动相﹑标准溶液和样品溶液，采用标准曲线法确定最佳分析条件，再定量分析。

2 结果与讨论

2.1 测定波长的选择

用紫外光谱仪[7]在245～285nm波长范围内对维生素C进行扫描，结果显示267nm的时候峰面积最大，吸收最高，波形最好。所以，选择267nm为维生素C的高效液相色谱分析检测波长。

2.2 流速和温度的选择

根据本实验用高效液相色谱仪的性能特点和检测时的峰形﹑保留时间等出峰情况，选择流动相流速为0.8mL·min-1；检测温度为30℃。

2.3 流动相的选择

维生素C在酸性环境中比较稳定，故在最初选择pH值为酸性的流动相。采用甲醇和0.1%的草酸以不同的比值作流动相进行实验，结果出峰都很杂乱，峰形不好，保留时间也相对较长。于是改用甲醇和纯水以不同的比值作为流动相进行实验，出峰很好，并采用现配现测的方法来弥补Vc不稳定性的不足之处。

1) 流动相：纯水，检测波长267nm，流动相流速0.8mL·min-1，检测温度30℃。

表1 在条件(1)下维生素C标准溶液浓度、峰面积、保留时间

图1 在条件(1)下维生素C标准溶液浓度与峰面积标准曲线

2) 流动相：甲醇，检测波长267nm，流动相流速0.8mL·min-1，检测温度30℃。

实验测定结果表明，条件（2）下维生素C的出峰均不理想，有很多杂峰。

由以上结果可以发现，甲醇的浓度过高会影响待测物的出峰情况，导致结果不理想，误差较大，因而采用甲醇浓度较小的溶液作为流动相进行探究。

3) 流动相：甲醇:纯水=5∶95，检测波长267nm，流动相流速0.8mL·min-1，检测温度30℃。

图2 在条件(3)下维生素C标准溶液浓度与峰面积标准曲线

4) 流动相：甲醇∶纯水=10∶90，检测波长267nm，流动相流速0.8mL·min-1，检测温度30℃。

图3 在条件(4)下维生素C标准溶液浓度与峰面积标准曲线

5)流动相：甲醇∶纯水=15∶85，检测波长267nm，流动相流速0.8mL·min-1，检测温度30℃。

图4 在条件(5)下维生素C标准溶液浓度与峰面积标准曲线

6) 流动相：甲醇∶纯水=20∶80，检测波长267nm，流动相流速0.8mL·min-1，检测温度30℃。

图5 在条件(6)下维生素C标准溶液浓度与峰面积标准曲线

7) 流动相：甲醇∶纯水=30∶70，检测波长267nm，流动相流速0.8mL·min-1，检测温度30℃。

图6 在条件(7)下维生素C标准溶液浓度与峰面积标准曲线

由图1～6对比得出：在检测波长为267nm，流动相速度为0.8mL·min-1，检测温度为30℃时，以甲醇:纯水=0∶100﹑20∶80﹑30∶70作流动相，维生素C标准溶液浓度与峰面积标准曲线的相关性较好，R2分别为0.9994﹑0.9998﹑0.9989，但从峰形来看，以甲醇:纯水=30∶70作流动相时，有杂峰出现，峰形没有那么好。由此选定以甲醇∶纯水=0∶100﹑20∶80做进一步的分析比较，从而在这2组条件中选取最优条件。

经过多次重复实验，发现以甲醇:纯水=20∶80作流动相时，尽管在该条件下峰面积较大，但线性方程稳定性较差，R2值波动较大；而以纯水作流动相时，峰形均较好，线性方程也较稳定，R2值都比较接近，保留时间波动也很小，由此确定分析鲜枣中维生素C含量的研究条件为：纯水作流动相，检测波长为267nm，流动相速度0.8mL·min-1，检测温度为30℃。

2.4 维生素C标准溶液色谱图

纯水作流动相，检测波长为267nm，流动相速度0.8mL·min-1，检测温度为30℃时，维生素C标准样品溶液色谱图见图7。

图7 维生素C标准溶液色谱图

3 结论

本研究采用高效液相色谱法，经过一系列的实验条件摸索，最终确定以纯水为流动相，流动相的流速为0.8mL·min-1，检测波长267nm，温度30℃下分析维生素C，此条件下峰形好，峰面积大，标准溶液浓度与峰面积具有良好的线性关系，其相关系数R2＝0.9994。所建立的方法简单﹑快速﹑准确度高，适用于鲜枣中维生素C含量的测定。

[1] 王镜岩.生物化学(上册)[M].北京：高等教育出版社，2007：461-463.

[2] 吴梧桐.生物化学[M].北京：高等教育出版社，2007：54-55.

[3] 朱志伟.坏血病的克星——维生素C[J].大学化学，2010(25)：66-68.

[4] 王艳颖，姜国斌，胡文忠，等.高效液相色谱法测定草莓中维生素C含量[J].大连大学学报，2006，27(2)：21-23.

[5] 何优选，梁奇峰.高效液相色谱法测定梅县沙田柚果肉中维生素C的含量[J].光谱实验 室，2010，27(4)：1290-1293.

[6] 胡应杰，潘康标，陈昌云，等.高效液相色谱法测定辣椒中维生素C的含量[J].南京晓庄学院学报，2008(6)：30-32.

[7] 李秋菊，王亚红，刘秀萍.维生素C的测定方法[J].太原师范学院学报，2005(1)：89-91.

Analysis of Vitamin C in Fresh Jujubes by High Performance Liquid Chromatography

LI Yu-ming, ZOU Yu-xia
(Department of Chemistry and Material Science, Hengyang Normal University, Hengyang 421008, China)

High performance liquid c hromatography was performed to research vitamin C in the fresh jujubes. The best analysis conditions were: 0.8mL/min Ultra-pure water was taken as fl owing phase, and the ultraviolet examination wave length was at 267nm, the column temperature at 30℃. Through the experimental data, the good linear relationship was established to get the correlation coeff i cient R2=0.9994. The method established was simple, fast and accurate, and was suitable to analyze vitamin C in the fresh jujubes.

high performance liquid chromatography; fresh jujubes; vitamin C

O 657.7+2

A

1671-9905(2014)11-0043-03

衡阳市科技计划项目（2013KN35）

李玉明(1978-), 男，江西赣州人，硕士，衡阳师范学院教师，主要从事应用化学研究。Email: luck53681@sina.com

2014-10-10