两种检测羊O型口蹄疫免疫抗体方法比较

顾冬花 （青海省大通县畜牧兽医站 810100）

两种检测羊O型口蹄疫免疫抗体方法比较

顾冬花 （青海省大通县畜牧兽医站 810100）

口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)引起的一种急性热性高接触性传染病，我国对其实行强制免疫，其免疫抗体效价检测是科学评价免疫质量的有效手段，也是制定免疫程序的可靠依据。但在实际工作中，常因抗体检测方法不同而使检测结果有差异，同一份样品采用不同的方法检测结果不一致的现象时有发生。因此，选择一种科学合理的检测方法对检验预防免疫效果，提出预警分析具有非常重要的意义。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 被检血清 羊血清157份。

1.1.2 试剂 正向间接血凝抗原，血清稀释液，标准阴阳性血清，自中国农业科学院兰州兽医研究所；胶体金试剂盒省中心配发。

1.2 方法与结果判定

1.2.1 方法 正向间接血凝试验、胶体金试验操作步骤按试剂使用说明书进行。

1.2.2 判定标准 （1）正向间接血凝测定O型免疫抗体的判定标准：阴性对照＜22，稀释液对照孔无凝集，阳性对照≥28，试验成立，否则试验不成立；被检血清抗体≥25则判为免疫抗体合格。（2）胶体金结果判定标准：阳性：在观察孔内，对照线区(C)和检测线区(T)各出现一条紫红色线。检测线(T)越深，表明猪口蹄疫抗体的滴度越高。弱阳性：在观察孔内，检测线区(T)及对照线区各出现一条紫红色线，但检测线区(T)出现的紫红色颜色很浅。阴性：在观察孔内，只有对照线区(C)出现一条紫红色线。无效：在观察孔内，对照线区(C)和检测线区(T)都不出现紫红色或只在检测线区(T)出现紫红色线，在对照线区(C)不出现紫红色线。（3）符合率计算方法：总符合率＝两种方法检测符合数/检测数

2 结果

2.1 合格率对比

2.1.1 均按≥26判定 正向间接血凝试验与胶体金法检测的免疫抗体合格率比对结果(见表1)。

表1 按≥26判定的免疫抗体合格率

2.1.2 分别按≥25和≥26判定 正向间接血凝试验结果按≥25，胶体金法按≥26判定，检测的免疫抗体合格率比对结果(见表2)。

表2 分别按≥25和≥26判定的免疫抗体合格率

从表1和表2来看，2种方法检测结果按≥26判定，正向间接血凝试验与胶体金检测合格率分别为59.8%、64.9%，2种方法检测的误差为5.1个百分点，2种检测方法检测的合格率存在一定差异。正向间接血凝试验结果按≥25、胶体金结果按≥26判定，2种检测方法检测的合格率分别为62.4%、64.9%，2种方法检测结果的误差为2.5%，2种检测方法检测的合格率差异缩小。

2.2 符合率对比

2.2.1 均按≥26判定 正向间接血凝试验与胶体金法检测的免疫抗体符合率比对结果见表3。

表3 按≥26判定，正向间接血凝试验与胶体金符合率

2.2.2 分别按≥25和≥26判定 正向间接血凝试验结果按≥25、胶体金法按≥26判定，检测的免疫抗体符合率比对结果见表4。

表4 分别按≥25和≥26判定的符合率

从表3和4来看，结果判定标准均按≥26判定，其检测结果总符合率为89.8%，2种方法检测出的合格与不合格的符合率存在一定差异。若按各自结果判定标准判定，则2种方法的总符合率达94.9%，同一畜种2种方法检测出的合格与不合格结果的符合率只存在微小差异。

3 分析

（1）正向间接血凝试验和胶体金检测结果按≥26判定后，两种检测方法间检测的抗体合格率出现了一定差异，结果判定的合格与不合格及总符合率较低。这与采用同一滴度判定时，使部分IHA法检测出的25的结果未纳入免疫抗体合格样品中导致的。当按各自结果判定标准判定后，两种检测方法检测的免疫抗体的合格率、合格与不合格符合率和总符合率差异缩小，其符合率达93%以上。2种判定结果证明，用不同检测方法检测免疫抗体时，结果判定必须按各自的判定标准判定，否则会得出人为的错误结论。（2）2种检测方法不论采用哪种判定标准判定，检测结果表明正向间接血凝试验法检出结果略低于胶体金。这可能是因两种检测方法对血清抗体的特异性和敏感性存在一定的差异造成的。（3）通过应用正向间接血凝试验和胶体金法检测动物口蹄疫免疫抗体的试验，笔者认为：①两种方法结果判定均易受操作者熟练程度和主观因素的影响，2种检测方法均存在不同批次试剂检测同一样品的结果有一定差异的问题。②两方法相比，胶体金检测法具有简便、易操作、无需特殊仪器、操作方法简便、试验所需时间短、对血样要求不高、易于现场操作的优点，但结果判定中只能看出26以上的抗体滴度，而没有25及以下的滴度对照，这样就会将部分25的检测结果划入抗体不合格样品中，与部颁标准相悖，试剂盒存在检测结果无效(本次检测无效的试剂盒占3%)和部分样品在重复试验中存在假阴性，对不同畜种血清抗体的敏感性存在一定差异和不能完全了解动物免疫与否的缺点。③正向间接血凝试验检测法是部颁规定的口蹄疫免疫抗体检测方法之一。相对于胶体金检测法，对血样的要求较高，但相对于有经验的操作者而言结果判定准确，重复试验符合性好，且能在疫苗质量不确定的情况下，基本可以全面反映出动物口蹄疫免疫抗体滴度。

S851.33

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1007-1733(2014)06-0065-02

2014–02–04）