复方祛白喷雾剂的皮肤毒性和安全性研究

(山东省济宁市皮肤病防治院，山东 兖州 272100)

复方祛白喷雾剂主要由补骨脂等精制而成，有增加皮肤黑色素及光敏的作用，皮肤用药适用于白癜风、银屑病等。依照国家食品药品监督管理总局颁布的《化学药物急性毒性试验技术指导原则》《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》，笔者对复方祛白喷雾剂进行了急性皮肤毒性和安全性研究，现报道如下。

1 材料与试药

白色中国家兔，雌雄各半，体重(2.0±0.5)kg；白色 DHP豚鼠，雌雄各半，体重250～300 g。以上动物均由山东鲁抗医药股份有限公司实验动物中心提供，清洁级动物，用普通饲料喂养，动物房温度19～23℃、湿度40% ～60%，合格证号为SCXK(鲁)20080002。复方祛白喷雾剂受试物由济宁市皮肤病防治院提供(鲁药制ZBZ0955)；空白对照用生理盐水；阳性对照用2，4-二硝基氯代苯(DNCB)，由上海科丰化学试剂有限公司生产；硫化钠由深州嘉信化工有限责任公司生产。

2 方法与结果

2.1 急性皮肤毒性试验

试验方法[1-2]:取白色中国家兔24只，雌雄各半，随机分为4组，各6只，即复方祛白喷雾剂高、中、低剂量组(A1，A2，A3组分别为临床用药浓度的6倍、3倍、1倍)及空白对照组(B组，用生理盐水)。将中国家兔背部右侧脱毛约50 cm2，避免损伤皮肤，用75%乙醇消毒，于脱毛区涂搽受试物或生理盐水，24 h后用温水除去残留受试物。逐日详细观察并记录动物的体重、皮毛、饮食、呼吸、二便、眼睛、黏膜、行为改变、自主活动改变情况，每日1次，观察14 d。如受试物对完整皮肤未观察到毒性反应，则在中国家兔背部左侧脱毛约50 cm2，24 h后先用75%乙醇消毒皮肤，再用预消毒的400#细砂纸在脱毛处磨成轻度擦伤，以渗血为度；立即在擦伤部位涂搽受试物，试验方法及观察指标同上。如出现死亡动物或濒死动物应行尸解，当肉眼可见病变时，应行病理学检查。

试验结果:A1组、A2组、A3组的完整皮肤和破损皮肤亚组用药后，观察期内体重、皮毛、饮食、呼吸、二便、眼睛、黏膜、行为改变、自主活动情况均无明显改变，未观察到急性毒性反应，无死亡动物或濒死动物。破损皮肤亚组均在给药后第2天出现点状血痂，第7天内脱痂痊愈。在观察期内，中国家兔体重变化见表1，复方祛白喷雾剂各剂量组与B组比较，均无显著性差异。

表1 复方祛白喷雾剂对中国家兔体重的影响（n=6，±s，kg）

表1 复方祛白喷雾剂对中国家兔体重的影响（n=6，±s，kg）

给药后组别 给药前A1组A2组A3组B组2.13±0.17 2.13±0.16 2.14±0.17 2.14±0.18完整皮肤动物2.28±0.20 2.28±0.19 2.29±0.20 2.28±0.20损伤皮肤动物2.42±0.22 2.42±0.21 2.43±0.22 2.44±0.23

2.2 皮肤过敏试验

试验方法[3]:取白色豚鼠20只，雌雄各半，随机分为两组，各10只，复方祛白喷雾剂组(C组)、阳性对照组(D组，阳性对照物为DNCB，致敏溶液浓度为1%，激发溶液浓度为0.1%，临用前用分析纯丙酮配制成溶液)。致敏接触:将豚鼠背部脊柱两侧脱毛，每侧脱毛区面积约为10 cm2。脱毛24h后，先在豚鼠背部左侧脱毛区涂搽0.2mL复方祛白喷雾剂，D组涂搽1%DNCB0.2mL，接触6 h后除去受试物，初次试验后第7天和第14天分别以同样的方法重复1次，共3次。激发接触，末次给受试物致敏接触后14d(总第28天)在豚鼠背部右侧脱毛区涂搽0.2mL复方祛白喷雾剂，D组涂搽0.1%DNCB0.2mL，接触6 h后除去并用温水洗净受试物。分别于0，24，48，72h时观察局部皮肤的过敏反应，同时观察豚鼠是否出现站立不稳、休克等全身过敏反应，计算过敏发生率。过敏发生率=[过敏反应动物数/动物总数]×100%。

试验结果:C组自激发接触后，0～72 h激发接触部位均未出现红斑及水肿，过敏率为0。D组自激发接触后，观察结果:0 h 2只出现明显红斑，评分为2×2分，其中1只又伴轻度水肿，评分为1×1分，6只出现严重红斑，评分为3×6分，其中1只又伴重度水肿，评分为3×1分，其中3只又伴轻度水肿，评分为1×3分，总评分为29分；24 h后开始消退总评分为21分；48 h后总评分为12分；72 h后总评分为9分。详见表2，可见，复方祛白喷雾剂对豚鼠皮肤无致敏作用。

表2 对豚鼠的皮肤过敏试验结果(n=10)

2.3 皮肤刺激性试验

分组方法[4]:取白色中国家兔24只，雌雄各半，随机分为4组，各6只，分组方法及给药方法同2.1项。

完整皮肤刺激性试验:每个剂量组各取3只家兔，将其脊柱两侧对称脱毛2块，每块脱毛面积约50 cm2，避免损伤皮肤，用75%乙醇消毒。试验采用左右侧自身对照，脱毛24h后左侧脱毛区涂搽受试物，右侧脱毛区涂搽生理盐水，涂药6h后用温水除去残留受试物，每天1次，连续涂药观察3次。分别于末次去掉受试物后24，48，72h观察局部红斑和肿胀等反应情况。

破损皮肤刺激性试验:各剂量组均取3只家兔，将其脊柱两侧对称脱毛2块，每块脱毛面积约50 cm2，24 h后先用75%乙醇消毒皮肤，再用预消毒的400#细砂纸在脱毛处磨成轻度擦伤，以渗血为度；立即在擦伤部位涂搽受试物。其他试验方法及观察指标同完整皮肤试验。计算刺激性指数，刺激性指数平均值=(刺激反应分值/动物总数)，评价皮肤刺激性强度。

试验结果:完整皮肤试验，未观察到刺激性，评分均为0分，刺激指数为0。破损皮肤试验，有轻度刺激性，但该刺激性在给药48 h内可自行逐渐消失，刺激强度小于0.5，为无刺激性；破损皮肤试验动物皮肤有点状血痂，至48 h开始脱落，给药区与空白对照区无明显差异，家兔皮肤光泽度、弹性与完整皮肤试验亦无显著差异，结果见表3。

表3 复方祛白喷雾剂对中国家兔损伤皮肤的刺激性试验结果(n=6，分)

3 讨论

复方祛白喷雾剂外用于中国家兔完整皮肤和破损皮肤，均未观察到明显急性毒性；复方祛白喷雾剂对豚鼠皮肤无致敏作用，对中国家兔完整皮肤未观察到刺激性，对中国家兔破损皮肤有轻度刺激性，但该刺激性在给药48 h内可自行消失，该试验给药剂量是临床用药浓度的6倍，故可认为不影响药物治疗的连续性。结果表明，复方祛白喷雾剂经皮肤用药无明显毒性，安全性良好。

参考文献：

[1]唐志立，彭贤东，谭正怀，等.替硝唑螺内酯乳膏的急性毒性试验[J].中国药业，2011，20(21):10-12.

[2]刘 南，李秀安，孙立萍，等.印优灭菌效果及毒性检测[J].中国药业，2002，11(3):45-46.

[3]刘 梅，党学良，王庆伟，等.复方血竭微乳对豚鼠皮肤刺激性实验观察[J].中国医药导报，2011，8(31):15-17.

[4]龙 凤，彭贤东，唐志立，等.熊静悦替硝唑螺内酯乳膏的皮肤过敏性和刺激性实验[J].医药导报，2012，31(10):1 262-1 264.