紫外分光光度法测定香菊胶囊黄酮总含量

付佳乐，耿 直，徐鹏虎，李 阳

(陕西国际商贸学院，陕西 咸阳 712046)



紫外分光光度法测定香菊胶囊黄酮总含量

付佳乐，耿 直，徐鹏虎，李 阳

(陕西国际商贸学院，陕西 咸阳 712046)

目的：建立香菊胶囊中黄酮总含量的测定方法。方法：采用紫外分光光度法，以芦丁为对照品，检测波长525nm，以线性、精密度、重现性、稳定性、回收率等作为效能指标，进行方法学验证。结果：回归方程为Y=0.476 0X-0.003 7，r=0.999 8，化香树果序黄酮总含量在0.201 2～1.003 0mg范围内线性关系良好，平均加样回收率为98.2%，RSD=1.83%。结论：该方法灵敏快速,准确可靠，可用于香菊胶囊中黄酮成分总含量的测定。

香菊胶囊；芦丁；总黄酮；紫外分光光度法

香菊胶囊为山东步长制药有限公司产品，根据中华人民共和国药品标准《新药转正标准》第31册香菊片的基础剂型制成[1]，具有辛散祛风、清热通窍之功效。临床常用于治疗慢性鼻窦炎、呼吸道感染、鼻炎、慢性鼻炎鼻窦炎鼻息肉等病症，同时可有效治疗急性鼻炎鼻窦炎[2]。临床研究发现，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌和铜绿假单胞菌等为鼻炎、鼻窦炎主要感染菌；体外抑菌试验表明，香菊胶囊中君药化香树果序的有效成分为总酚和总黄酮类，抑制细菌作用较强，可用于治疗鼻炎、鼻窦炎等。根据香菊胶囊质量标准含量测定项，主要采用薄层扫描法检测黄芪中黄芪甲苷作为质量控制指标，而处方中黄芪并非君药，且临床主要功效为补气固表，与香菊胶囊辛散祛风、清热通窍的作用不相符，不能正确体现该药品确切疗效[1]。因此，本文在香菊胶囊原有质量标准基础上，通过研究化香树果序药材的主要化学成分，选择稳定、可靠的指标，筛选专属性好、准确度高的检测方法。建立合理、有效的香菊胶囊含量测定方法，提高香菊胶囊的质量可控性，以期完善该品的质量标准，增强企业的品牌效应，现具体报告如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

722型紫外分光光度计(上海精密仪器有限公司)；KQ300YDB型超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；BSA224S型电子天平(Sartorius公司)。

1.2 试剂

步长必畅香菊胶囊，由山东步长制药有限公司提供；化香树果序药材，购自西安盛兴饮片厂；芦丁对照品(批号：20101112，中国食品药品检定研究院)；亚硝酸钠(天津市鸿鑫化学试剂有限公司)；硝酸铝(天津市科密欧化学试剂有限公司)。

2 方法

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液制备 精密称定于120℃干燥至恒重的芦丁对照品20.06mg，置100mL容量瓶，加95%乙醇50mL，超声处理，待溶解完全后，用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，配制成0.20mg/mL的对照品溶液。

2.1.2 标准曲线绘制[4]精密量取对照品溶液0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，分别置于25mL容量瓶，各加50%乙醇溶液5mL；精密加入 5%亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，放置6min；加10%硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加1%氢氧化钠试液4mL；分别加入50%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15min。以第1瓶做空白对照，采用紫外分光光度法，在525nm波长处测定吸收度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制吸收标准曲线。

2.1.3 化香树果序药材溶液制备 取化香树果序药材，粉成细粉，称取5g，置索氏提取器中，加乙醚120mL，加热回流至提取液无色，放冷，挥去乙醚液；再加甲醇90mL，加热回流至提取液无色，移置100mL容量瓶，加入少量甲醇洗涤容器，洗液并入容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取10mL，置100mL容量瓶，加水至刻度，摇匀；精密量取3mL，置25mL量瓶，按上述标准曲线制备方法进行测定，根据标准曲线可计算药材中总黄酮含量。

2.1.4 供试品溶液制备 取香菊胶囊20粒，内容物混匀，取3.0g，精密称定，置索氏提取器中，按 “2.1.3”项方法制备供试品溶液，根据标准曲线可测得黄酮总含量。

2.2 方法学考察[5-6]

2.2.1 线性关系考察 以空白管为参比溶液，在525nm波长处测定各标准溶液的吸光度，以芦丁浓度X为横坐标，以吸光度Y为纵坐标，绘制芦丁标准曲线。

2.2.2 精密度试验 取本品内容物3.0g，精密称定，置索氏提取器中，按照“2.1.3”项方法进行试验，测定吸光度值，连续测定6次，计算RSD值。

2.2.3 重现性试验 取本品内容物3g(同一批号)6份，精密称定，按照含量测定方法测定黄酮的总含量，计算RSD值。

2.2.4 稳定性试验 取本品内容物3g精密称定，按照含量测定方法，制备供试品溶液，以相应溶液为空白，每隔1h记录1次数据，测定吸光度值，连续测定6次，共5h，计算RSD值。

2.2.5 回收率试验 精密称取已知含量的样品(黄酮平均含量为27.54mg/粒)6份，分别精密加入一定量芦丁对照品，按照含量测定方法操作，制备供试品溶液，测定黄酮总含量，计算回收率及RSD值。

3 实验结果[5-6]

3.1 标准曲线绘制

按照“2.1.2”线制备方法绘制标准曲线，由试验得出芦丁溶液含量与吸光度结果见表1。

表1 芦丁对照品标准溶液含量与吸光度关系

以芦丁含量为横坐标(X)，吸收度值为纵坐标(Y),根据吸收度值对芦丁量进行线性回归，得回归方程：Y=0.476 0X-0.003 7(r=0.999 8)。由结果可知，芦丁在0.200 6～1.003 0 mg范围内，吸收度与芦丁量线性关系良好。见图1。

图1 芦丁标准曲线

3.2 精密度试验

试验得出，6次重复试验的吸光度分别为0.281 1、0.285 0、0.280 0、0.283 7、0.282 8、0.281 3，由吸光度差值计算，相对标准差为0.63%(n=6)，说明精密度良好。

3.3 重现性试验

试验得出，6次试验样品的黄酮总含量分别为27.61、27.67、27.46、27.56、27.63、27.35(mg/粒)，黄酮含量平均为27.55mg/粒，由吸光度差值计算，相对标准差为0.44%(n=6)，说明该试验重现性良好。

3.4 稳定性试验

试验得出， 5h内样品的吸光度值分别为0.283 1、0.281 4、0.279 5、0.278 7、0.276 8、0.275 3，由吸光度差值计算，相对标准差为1.08%(n=6)，结果表明：5h内吸收度值基本稳定，不影响定量分析结果。

3.5 回收率试验

试验结果表明，平均回收率为98.2%，RSD=1.83%，加样回收率良好。

3.6 药材含量测定

分别按照含量测定方法操作，测定化香树果序药材的黄酮含量，计算平均值为5.57%。根据测定结果，其中化香树果序药材黄酮总含量以无水芦丁(C27H30O16)计，不低于4.5%。

3.7 样品含量测定[6]

分别取3个不同批次的香菊胶囊，内容物研细，分别称取3.0g，各取两份，精密称定，置于索氏提取器，按“2.1.3”项方法，测定吸光度值，计算总黄酮含量。结果显示：三批共六组香菊胶囊中黄酮总含量分别为28.45、29.32、25.36、23.14、24.18、25.69mg/粒，平均含量为26.02mg/粒。

根据试样品测定结果，考虑大生产及药材来源等因素，该品每粒黄酮总含量以无水芦丁(C27H30O16)计，不低于20.0mg。

4 结论

本研究表明：采用乙醇提取香菊胶囊化香树果序成分中黄酮总含量方法良好。在波长525nm处，采用紫外分光光度法，样品在0.201 2～1.003 0mg范围内黄酮总含量呈良好线性关系，回归方程为Y=0.476 0X-0.003 7(r=0.999 8)，加样平均回收率为98.2%，RSD=1.83%。

采用紫外分光光度法可简便、灵敏、准确用于测定化香树果序黄酮的总含量，可为香菊胶囊质量控制研究提供有效的实验依据。以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH为显色剂，芦丁标准品在525nm波长测定化香树果序黄酮总含量。该方法灵敏快速,准确可靠，重复性好，可用于香菊胶囊中黄酮成分总含量的测定。

化香树果序化学成分的研究尚不成熟，虽已有关于黄酮类、挥发油、酚类等成分的研究与文献报道，但由于化香树果序的成分复杂，还不能将一些有效成分完全分离出来，对其药理作用尚不明确，因此化香树果序的进一步研究势在必行。近年来，根据花香树果序在心血管系统、内分泌系统、抗肿瘤等方面的药理作用研究成果，多种以黄酮类成分为主的制剂已经上市，临床应用较为广泛。

[1] 国家食品药品监督管理局.中华人民共和国新药转正标准[S].第31册,2011:21.

[2] 顿宝生.步长中成药[M].北京：人民卫生出版社,2008:321-323.

[3] 仇锦春,卡慧敏,俞晶华,等.香菊软胶囊的主要药效研究[J].现代中药研究与实践,2006,20(6):19-22.

[4] 汪树理,贺凤成,董金平.长白山区野生款冬花不同采收期芦丁含量的差异[J].时珍国医国药,2010(4):842-843.

[5] 宋丽萍.银杏叶总黄酮的提取工艺研究[J].海峡药学,2013,35(6):37-39.

[6] 孔慧,郝丽静,邢红霞,等.宁心解郁胶囊的质量标准研究[J].中成药,2012,34(12):2452-2454.

(责任编辑：李岚春)

Determination of Total Flavonoids in Xiangju Capsule by Ultraviolet Spectrometry

Fu Jiale, Geng Zhi,Xu Penghu，Li Yang

(Shanxi Institute of International Trade and Commerce, Xi’an 712046,China)

Objective:To establish the determination method for total flavonoids from Xiangju Capsule.Methods:The contents of total flavonoids were determined by UV spectrophotometry at detection wavelength of 525 nm with rutin as standard substance, using linear ity and linear range, accuracy,reproducibility,selectivity as the performance parameters.Results:The linear regression equation was Y=0.476 0X-0.003 7(r=0.999 8).The linear range of rutin were 0.201 2～1.003 0mg with average recovery of 98.2%(RSD=1.83%,n=6).Conclusion:This method is sensitive,accurate and rapid,which can be used for quality control of total flavonoids in Xiangju Capsule.

Xiangju Capsule;Rutin; total flavonoids; UV spectrophotometry

2014-07-30

陕西省大学生创业创新训练计划项目(201213123002)

付佳乐(1984-)，女，陕西国际商贸学院讲师，研究方向为中药制剂。

R256

A

1673-2197(2014)24-0017-02