丹参注射液对非酒精性脂肪肝炎性因子IL-6、TNF-a的影响

闫 蕾,张洪宇,郭英君

(宁夏自治区人民医院 感染科，宁夏 银川 750001)



丹参注射液对非酒精性脂肪肝炎性因子IL-6、TNF-a的影响

闫 蕾,张洪宇,郭英君

(宁夏自治区人民医院 感染科，宁夏 银川 750001)

目的：观察丹参注射液对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠血清中白细胞介素(IL-6)及肿瘤坏死因子-a(TNF-a)的影响，从而验证丹参注射液对非酒精性脂肪肝治疗作用。方法：将40只大鼠随机分为正常组、模型组、丹参小剂量组(400mg/kg)、丹参大剂量组(1 600mg/kg)，8周后采用免疫组化法(ELLSA)检测各组大鼠血清中IL-6及TNF-a的水平。结果：模型组大鼠血清中IL-6、TNF-a水平明显增高；与模型组比较，不同剂量丹参组血清中IL-6、TNF-a水平显著降低。结论：丹参可能通过降低血清中IL-6、TNF-a水平，从而抑制肝细胞炎症反应，减轻肝组织损伤，达到治疗NAFLD的效果。

非酒精性脂肪肝；丹参；IL-6;TNF-a

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是引起肝功能紊乱的主要诱因，是指以无过量饮酒史的肝细胞脂肪变性和脂肪贮积为病理特征的临床病理综合征，NAFLD可迅速进展为纤维化和肝硬化，是隐源性肝硬化的重要因素之一。近年来，非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)逐渐取代了病毒性肝炎，成为欧美发达国家的最主要肝病。据预测，仅需10年左右的时间，NAFLD将有可能成为终末期肝病和肝移植的首要病因。因此，开展NAFLD相关研究具有重要意义[1]。丹参为活血化瘀类中药，其主要成分丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA，TSA)具有抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗氧化和抗凋亡等作用。本文采用高脂饮食诱导NAFLD大鼠模型，检测血清中IL-6、TNF-a水平，初步探讨丹参对NAFLD大鼠肝脏炎性因子的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

实验动物：健康雄性SD大鼠40只，体重150～200g，购自宁夏医科大学动物实验中心；丹参注射液购自四川升和药业股份有限公司；IL-6、TNF-a试剂盒购自武汉博士德生物工程公司；高脂饲料购自宁夏医科大学动物实验中心。

1.2 方法

健康雄性SD大鼠40只，正常喂养1周后，随机分为4组，每组10只，即：正常组、模型组、低剂量丹参组(400mg/kg)、高剂量丹参组(1 600mg/kg)。正常组喂饲普通饲料，其余各组均给予高脂饲料，连续8周。造模开始第5周，干预组大鼠给予肌肉注射不同剂量的丹参注射液28天，正常组、模型组均给予肌肉注射等量生理盐水，各组大鼠均于第8周结束处死。

1.3 检测指标

所有观察对象抽取静脉血，分离血清，放置于-20℃低温冰箱贮存备用。检测前将血清置室温复融，转离心，取上清液进行检测。采用光度酶联免疫分析法(ELLSA)检测各组大鼠的TNF-a和IL-6含量。

1.4 统计学处理

2 结果

经检测，模型组血清中IL-6和TNF-a含量明显升高；经丹参治疗后，低、高剂量丹参注射液组血清中IL-6和TNF-a含量均低于模型组(P<0.05)。低、高剂量组之间差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 不同组各指标比较 (±s，ng/mL)

注：与模型组比较，*P<0.05。

3 讨论

非酒精性脂肪肝(NAFLD)是近年来全球范围内患病率迅速增高的一种获得性代谢应激性肝损害，包括一系列由脂肪在肝脏堆积诱发引起的疾病：单纯性脂肪肝，伴有肝细胞损伤和炎症反应的非酒精性脂肪性肝炎，最终可发展为肝纤维化、肝硬化、肝癌。该症常合并有内脏性肥胖、血脂紊乱、高血压、糖调节异常和2型糖尿病等多元代谢性紊乱疾病。病理组织学表现为：肝细胞脂肪变性及肝实质炎症反应。随着现代生活方式、行为方式的改变，NAFLD发病率呈逐年升高趋势，是隐源性肝硬化最主要原因。

近年来研究发现，多种炎性因子、脂肪细胞因子对NAFLD发病具有一定作用，如TNF-a、IL-6等。TNF-a作为一种肝毒性细胞因子，在NAFLD发生时表达增加，成为导致脂肪肝炎发生的首要因子[2]。TNF-a直接损伤肝细胞是通过TNF-a与肝细胞膜受体结合，活化Caspase-8，进而活化Caspase-3，导致肝细胞凋亡；另外，TNF-a是脂蛋白酶强力抑制剂，高浓度TNF-a可减少外周组织脂肪分解，并促进肝细胞甘油三酯的合成及聚集。TNF-a还可诱导激活肝脏Kupffer细胞，释放大量IL-6、IL-8等炎性因子，可直接引起肝细胞脂肪变性、炎症及肝细胞坏死[3]。TNF-a可活化其它细胞因子如IL-6、IL-8和一些黏附分子，形成炎症瀑布反应，诱发肝脏炎症，导致胰岛素抵抗(IR)进而引起NAFLD[4]。

IL-6是由单核细胞和巨噬细胞等多种细胞产生，与肝脏局部炎症反应有关，参与炎性损伤过程。IL-6可直接刺激肝细胞、储脂细胞及库普弗细胞增生分泌胶原、层黏连蛋白和蛋白多糖，参与肝纤维化形成，促进肝损害[5]。此外，IL-6与IR关系密切，可抑制肝脏胰岛素信号，造成胰岛素抵抗，高胰岛素血症可通过阻断线粒体脂肪酸氧化，导致肝脏脂肪酸聚集，形成肝脂肪变性，IL-6可能与非酒精性脂肪肝炎的“第一次打击”有关[6]。因此，炎症细胞因子的表达改变与NAFLD疾病进程密切相关。

丹参为传统临床中药，具有活血通络、祛肝经之瘀、增强肝脏血运等作用，现代药理显示：丹参含有儿茶酸、丹参素、丹参酮等化学成分，文献表明主要成分丹参酮ⅡA是一种新型有效的细胞内脂质过氧化产物，是与DNA相互作用的抑制剂[7]。丹参可能通过抑制促炎因子的分泌，上调抑炎症因子水平，从而显著抑制小鼠血清IL-6、TNF-α表达的上调而发挥作用。

本研究证实：丹参组血清中IL-6、TNF-a水平含量与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05)；高、低剂量组的IL-6、TNF-a含量差异无统计学意义(P>0.05)。因此，IL-6、TNF-a与NAFILD发病关系密切，丹参可能通过降低血清中IL-6、TNF-a水平，调节体内炎性因子变化，从而抑制肝细胞炎症反应，减轻肝组织损伤，达到治疗NAFLD的目的。

[1] KIM D，KIM WK KIM HJ,et a1．Association between noninvasive fibrosis markers and mortality among adults with nonalcoholic fatty liver disease in the United States[J]．Hepatology,2013，57：1357-1365．

[2] 张慧，胡义扬．肿瘤坏死因子、脂联素与非酒精性脂肪性肝病[J]．肝脏，2006，11(2)：137-139．

[3] 韩婷，井源，吴静，等．酒精性脂肪肝的肝损伤机制研究近况[J]．实用肝脏病杂志，2007，10(4)：279-281．

[4] RUAN H，LODISH H F．Insulin resistance in adiposetissue：direct and indirect effects of tumor necrosis factor-alpha[J].Cytokine Growth Factor Rev，2003，22：447-455．

[5] HILL DB ,MARSANO L,COHEN D,et a1.Increased plasma interleukin-6 concentrations in alcoholic hepatitis [J].Lab Clin Med,1992,119:547-552.

[6] KIM HJ, HIGA SHIMORI T,PARK SY,et al.Differential effects of interleukin-6 and -10 on skeletal muscle and liver insulin action in vivo[J].Diabetes,2004,53:1060-1067.

[7] 曹恩华,刘晓麒,李景福,等.天然抗氧化剂丹参酮ⅡA对干细胞脂质过氧化产物与DNA相互作用的影响[J].生物物理学报, 1996(12):24-27.

(责任编辑：李岚春)

Injection of Non-Alcoholic Steatohepatitis Factor IL-6, TNF-a Salvia

Yan Lei, Zhang Hongyu ,Guo Yingjun

(Ningxia Autonomous Region People's Hospital of Infectious Diseases, Ningxia 750001,China)

Objective:Salvia serum of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) in rats injections of interleukin (IL-6 ) and tumor necrosis factor-a (TNF-a) , so as to verify Salvia Injection on non-alcoholic fatty liver treatment.Methods:The 40 rats were randomly divided into normal group, model group and low dose group salvia (400mg / kg), Salvia high dose group (1 600mg / kg), after 8 weeks using immunohistochemistry (ELLSA) detected group, serum levels of IL-6 and TNF-a in. Results:Model group, the serum IL-6, TNF-a levels were significantly higher ; compared with the model group, each group with different doses of Salvia serum IL-6, TNF-a levels were significantly reduced. Conclusion:Salvia possible by reducing the serum IL-6, TNF-a levels,inhibiting the inflammatory response in liver cells,reducing damage to liver tissue , the therapeutic effect of NAFLD.

Non-alcoholic Fatty Liver;Salvia;IL-6;TNF-a

2014-08-25

闫蕾(1983-)，女，宁夏自治区人民医院主治医师，研究方向为脂肪肝治疗。

R285.5

A

1673-2197(2014)24-0010-02