三七皂苷R1对实验性肝纤维化大鼠TNF—α的影响

李力燕等

【摘要】目的：探讨SD大鼠肝纤维化后肝组织肿瘤坏死因子α的表达和变化，以及三七皂苷R1对肝纤维化的保护作用。方法：72只健康雄性SD大鼠分为对照组（A组）、NDMA组（B组）和三七皂苷R1组（C组），再按不同时间点分为1、2、4周3个亚组，每个亚组8只动物。B组采用二甲基亚硝胺（NDMA）腹腔注射，C组同时静脉注射三七皂苷R1，剂量为100 mg/kg，A组注射等量的生理盐水。在各组的不同时间点取肝组织约100 mg，采用逆转录-聚合酶链式反应技术及ELISA技术检测肝组织中TNF-α 蛋白及mRNA的表达及变化。结果：TNF-α 蛋白及mRNA在各组中均有表达。A组各时间点比较均无统计学意义（P>0.05）。在B组中，随着损伤时间的延长，TNF-α 蛋白及mRNA的表达逐渐上调（P<0.05），且各时间点与对照组比较有统计学意义（P<0.05）。而C组TNF-α蛋白及mRNA在各时间点均较B组表达下调，有统计学意义（P<0.05）。结论：1、TNF-α参与了肝纤维化的发生和发展过程，且随损伤的逐渐加重，表达逐渐越高。2、三七皂苷R1可降低肝组织中TNF-α的表达，减轻肝细胞的纤维化，发挥保护肝组织损伤的作用。

【关键词】 三七皂苷R1；肝纤维化；大鼠；肿瘤坏死因子α

【中图分类号】R285 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）01-0011-01

肝纤维化（Hepatic fibrosis）是由于多种因素导致肝细胞坏死，是肝硬化的早期经过阶段，病毒性肝炎特别是乙型肝炎是其主要的致病因素之一。近年来，应用中药治疗乙型肝炎有较多的研究[1]。本实验采用大鼠肝纤维化模型，采用ELISA及RT-PCR技术检测肝组织中TNF-α 蛋白和mRNA的表达和变化，并探讨三七皂苷R1对肝纤维化的保护作用，可为临床治疗乙肝所导致的肝纤维化提供进一步的理论依据，为临床寻找有效的药物提供进一步的实验支持。

1 材料与方法

1.1 所需的试剂

1.2 动物及其分组

72只健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，购自昆明医科大学动物科，重180-200g，分為对照组（A组）、NDMA组（B组）和三七皂苷R1组（C组），再按不同时间点分为1、2、4周3个亚组，每个亚组8只动物。所有大鼠均在同样的条件下饲养，定时给予饲料和水，以确保实验结果的可靠，尽量降低误差。

1.3 动物模型的制备及取材

NDMA组采用NDMA注射大鼠腹腔制作肝纤维化模型。方法为将NDMA溶解于生理盐水使其最终浓度为0.5%，按2ml/kg的剂量腹腔注射，每周前3天每天1次，连续4周建立肝纤维化模型。三七皂苷R1组于第4周采用股静脉注入三七皂苷R1（以0.9%生理盐水稀释为5 mg/ml）1ml。对照组仅腹腔注射等量的生理盐水。所有动物于不同时间点取肝组织约100mg，装入盛有预冷的TRIZOL 1 ml的EP管中，匀浆后至-80℃冰箱中备用。另取部分用于ELISA的实验。

1.4 免疫比浊法

按试剂盒说明书检测各组血清中TNF-α蛋白的含量。

1.5 RT-PCR扩增目的基因

3.1 TNF-α与肝纤维化的关系

TNF-α是由单核巨噬细胞产生，对肝纤维化的发生有着促进的作用，当其过度表达时，可对组织产生损伤，使组织纤维化[3]。另外，TNF的表达水平与肝组织的炎症程度相一致，提示其可作为炎症介质而参与了肝纤维化的形成。陈晓红等[4]对慢性病毒性肝炎及肝硬化患者肝穿取得的肝组织中发现，患者血清中TNF-α升高，且与肝纤维化程度成正相关。裴豪等[5]在对急、慢性肝病血清TNF-α表达水平的研究中发现，TNF-α的表达而抑制HSC的活化和FN的分泌集聚，最终保护了受损的肝组织[6]。由此可见，在肝纤维化的过程中，TNF-α起着中心的作用，不仅可促进炎症反应的产生，还可使间质细胞增殖分化和ECM的合成增强，进而使肝组织损伤得以修复[7]。本实验研究发现，在NDMA组中TNF-α的表达逐渐升高，且各时间点的表达也高于相应时间点对照组的表达。

3.2 三七皂苷R1液可通过降低TNF-α的表达来减慢肝纤维化的进程

三七（Panax notoginseng（Burk）F.H.Chen）为五加科植物，干燥的根入药。味甘、微苦，性温，归肝、胃、心、小肠经，具有止血、散瘀、消肿、止痛、补虚、强壮等功效，含量最高的为三七总皂苷（PNS）即人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1[8]。研究表明，PNS不仅能抑制I、Ⅲ型胶原合成，还对炎症产生的细胞因子、成纤维细胞、肝星状细胞增殖有明显的抑制作用[9]。三七皂苷R1具有改善机体微循环、保护肝细胞、促进肝细胞再生等功能，还能明显降低肝纤维化大鼠血清中PC-III、HA、LN的含量，抑制肝纤维化大鼠转氨酶的升高，减轻肝纤维化程度[10]。PNS可显著降低肝纤维化小鼠血清中转氨酶及NO水平，增加肝脏白蛋白的合成，减轻肝纤维化程度[11]。

本实验结果显示，三七皂苷R1可降低肝组织中的TNF-α的含量，说明三七皂苷R1可以起到治疗肝病及防治肝纤维化有明显效果。本实验仅对三七皂苷R1对肝纤维化大鼠肝组织中TNF-α基因的表达及变化进行了研究，表明TNF-α可能是三七抗肝纤维化的因子之一，仍待进一步的研究。