液相色谱串联质谱法同时测定白酒中

吴宏萍 魏云 杨红文

摘要：建立了同时测定白酒中四种甜味剂（安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜）的液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）分析方法，采用Poroshell 120 EC-C18柱，以含0.1%甲酸的水-甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速0.4mL/min，在电喷雾电离（ESI）负离子模式下，采用多重反应监测模式进行检测，线性范围均在5～100?g /L；安赛蜜检出限为1?g /L，糖精钠检出限为 1?g /L，甜蜜素检出限为1?g /L，阿斯巴甜检出限为1?g /L。四种成分的加标回收率为89～102%，相对标准偏差均不大于2.5%。该法快捷、准确、重现性好。

关键词：液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）；白酒；安赛蜜；糖精钠；甜蜜素；阿斯巴甜

中图分类号：Q81 文献标识码：A 文章编号：1672-4437（2014）02-0060-04

中国白酒历史悠久，它与威士忌、伏特加、白兰地、朗姆酒、金酒并称为世界六大蒸馏酒。中国白酒以粮谷为主要原料，以大曲、小曲等为糖化发酵剂，经蒸煮、糖化、发酵、蒸馏而制成[1]。其工艺精良、风味独特，深受广大消费者喜爱。甜味对白酒的风味起着很大的作用。现代研究表明，优质发酵生产白酒之所以具有醇甜感，是由于白酒本身含有一定的多元醇或酮等甜味物质，如2，3-丁二醇、丙三醇、双乙酞等。保持适度甜味的白酒，可以给人以甘醇、绵甜的愉悦感。近年来为适应新的消费需求，增加白酒的甜味、回甜感 ，添加甜味剂成为了众多白酒企业竞相研究的课题。甜味剂是一类重要的食品添加剂，它赋予食品以甜味，可以改善食品口感，提高食品的品质。目前，广泛应用的人工合成甜味剂主要包括甜蜜素、阿斯巴甜、糖精钠、安赛蜜等。我国只允许在配制酒中添加少量甜蜜素、三氯蔗糖、糖精钠等甜味剂，研究表明，摄入高剂量的甜味剂会对人体的肝脏和神经系统造成伤害，甚至引发癌症，因此人工合成甜味剂的合理使用不仅关系到产品的品质，更关系到消费者的健康、安全。我国强制性国家标准规定，禁止在发酵酒中添加甜味剂。各香型白酒国家标准中也规定，优级、一级、二级均不得加入非自身发酵物质。

目前，已建立的测定甜味剂的方法很多，包括高效液相色谱法-紫外检测法、毛细管气相色谱法、超高压液相色谱-蒸发光散射检测法、紫外分光光度法，但这些方法都不适合白酒中多种甜味剂的检测，这些方法存在着检出限不能满足检测要求 、易出现假阳性等问题，不能满足白酒中甜味剂的检测要求。

本研究运用LC-MS-MS方法对白酒中安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜同时进行测定，可对白酒中多种痕量甜味剂含量进行监控，有利于提高白酒整体质量控制水平，保障白酒的食品质量和安全。

1 实验部分

1.1仪器与试剂

Agilent 1260 Infinity LC System， Agilent 6460 Triple Quad LC/MS（美国，Agilent 公司）；Milli-Q超纯水装置（美国，Millipore公司）；AL204电子天平（上海梅特勒错误！未找到引用源。SK2200HP型数控超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）

甲醇（色谱纯，Fisher公司）；甜蜜素、安赛蜜、糖精钠、阿斯巴甜均购自德国Dr.Ehrenstorfer 公司，实验室用水为超纯水。

1.2 溶液配制

标准储备液：精确称取四种标准品各0.1g，分别用超纯水溶解并定容至100mL容量瓶中，配成质量浓度为1000mg/L的各标准品单标储备液，于0～4℃下保存。

标准工作液：准确移取一定体积的安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜的单标储备液混合于容量瓶中，用PH4.3的水（用乙酸调节PH为4.3）定容，逐级稀释成质量浓度范围为5～100?g /L系列的混合标准工作溶液。

1.3 样品前处理

准确吸取白酒样品2mL，过0.22?m滤膜，供液相色谱-串联质谱仪分析

1.4 色谱条件

采用Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱（50mmx3.0mm，2.7?m）；以0.1%甲酸的水（A）-甲醇（B）为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱程序：0～2min，10%B～60%B；2～5min，60%B～10%B；流速为0.4mL/min；进样量为5?L。

1.5 质谱条件

离子源为电喷雾电离源（ESI），采用负离子检测模式。干燥气：N2，温度为325℃，流速为8L/min；雾化气：N2，雾化器压力为3.1x105Pa，毛细管电压为4000V。采用多重反应监测模式，四种目标组分的其他质谱分析参数见表1。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的优化

对常用流动相水-甲醇和水.-乙腈进行了考察，实验结果表明使用水-甲醇体系作流动相时灵敏度高于水-乙腈体系，色谱峰形对称，且分离效果更好。

2.2 质谱条件的优化

实验条件下采用负离子模式检测各物质，采用MRM模式，以不同的碰撞能量将待测物的准分子离子打碎，以子离子响应最强时的参数来确定碰撞能量和裂解电压。

2.3 色谱与质谱行为

在选定的色谱—质谱条件下，被测组分间可获得良好的分离，色谱图见图1.根据峰的保留时间及质谱信息进行定性。

2.4线性关系及检出限

取各标准品储备液，精确配置一系列不同质量浓度的混合标准液，于优化后的条件下分别进样测定，重复3次，以各物质特征碎片离子（定量离子）峰面积的平均值（Y）对被测组分的质量浓度（X，?g /L）进行线性回归，得到回归方程、相关系数和线性范围；以信噪比（S/N）为3确定4种待测组分的检出限；结果为表2。

2.5精密度和回收率实验

取不含4种人工合成甜味剂的白酒样品6份，分别向其中添加50?g/L、100?g/L、200?g /L的3种不同浓度水平的混合标准溶液，按照以上实验条件进行测定，每个添加水平进行6次重复实验，分别计算4种物质的回收率，结果见表3。本方法在3个浓度添加水平下，4种成分的加标回收率在89%～102%，RSD均小于或等于2.5%，能满足测定要求。

2.6 样品分析

按照上述优化好的条件对市售的8种白酒进行检测，检测结果见表4。实验结果表明，该方法能满足白酒中四种甜味剂的同时检测。

3. 结论

本文研究了高效液相色谱-串联质谱法同时测定白酒中安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜四种甜味剂含量的方法。实验结果表明，该方法具有简便、快捷、准确、灵敏和定性能力强的特点

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参考文献：

[1] 国家质量监督检验检疫总局CCJF103.1-2010产品质量监督抽查实施规范 白酒[S]. 北京：中国标准出版社，2011.

[2] 张小芳.白酒中甜味剂测定方法的研究进展[J].四川化工，2011（5）：32-34

[3] SN/T 1948-2007.进出口食品中环己基氨基磺酸钠的检测方法液相色谱-质谱/质谱法[S].

[4] GB/T5009.97-2003.食品中环己基氨基磺酸钠的测定[S].

[5] GB/T5009.28-2003.食品中糖精钠的测定[S].

[6] 王俊.食品发酵与工业[J].HPLC/MS测定白酒中的微量甜味剂，2007，33（10）：152-153.