差异浅析ELISA法与胶体金试纸条检测HbsAg

唐兴华

【摘要】目的：采取差异式的方法探究胶体金试纸条与ELISA法检测HBsAg的I临床应用价值及优点和特点，为临床积累宝贵资料。

【关键词】 ELISA法 胶体金试纸条检测HBsAg 差异分析

【中图分类号】R446.6 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）03-0349-02

我国是世界公认的乙肝大国，乙肝病毒人群携带率约10% ，乙型肝炎是目前流行最广泛、危害最严重的病毒性肝炎诊部从2009年主动来检测乙肝五项指标的4183人中，对未感染者实施预防接种，以降低人群发病率；对406阳性标本进行了胶体金试纸条与ELISA法进行比较，分析二者在结果上的差异性，并将强阳性的20份标本做倍比稀释分析二者的灵敏度。

1 ELISA法特点

1.1灵敏性高

该测定法的灵敏度来自作为报告集团的酶。众所周知， 酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可诱导大量的催化反应 ，产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。ELISA实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。

1.2特异性强

其特异性来自抗体或抗原的选择性。抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原抗体反应具有高度的特异性。

胶体金试纸条诊断技术

2胶体金试纸

胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层 析技术研制而成，该技术是90 90年代初在免疫 析技术研制而成，该技术是90年代初在免疫 渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免 疫学检测技术， 疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激 HCG） 素 （ HCG） 的測定和乙型肝炎病毒表面抗原 HBsAg）等检测。 （HBsAg）等检测。gold） 胶 体 金 （ Colloidal gold） 是 氯 金 酸 的水溶胶， （HAuCl4）的水溶胶，氯金酸在还原剂的作 用下，聚合成特定大小的金颗粒， 用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静 电作用成为一种稳定的胶体状态。 电作用成为一种稳定的胶体状态。

3胶体金的质量判定标准

质量好的胶体金：溶液呈红色， 质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球 大小均一，无棱角。 形，大小均一，无棱角。 质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一， 质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状 各异。 各异。

4胶体金标记的原理：

胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷， 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。 吸引而形成牢固结合。 胶 体 金 标 记 技 术 （ Immunogold labeling technique） technique） 是以胶体金作为示踪标记物应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。

6胶体金试纸条诊断技术的原理

以硝酸纤维素膜为载体， 以硝酸纤维素膜为载体 ， 利用了微孔膜 的毛细血管作用， 的毛细血管作用 ， 滴加在膜条一端的液体慢 慢向另一端渗移， 通过抗原抗体结合， 慢向另一端渗移 ， 通过抗原抗体结合 ， 并利 用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/ 用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/ 抗体。 抗体。

7资料与方法

试纸条为英科新创（厦门）科技有限公司乙肝病毒表面抗原（HBsAg）胶体金法诊断试剂，酶联免疫吸附试验试剂为3v生物工程集团有限公司乙肝病毒表面抗原诊断试剂，所有试剂均在有效期内。标本来源：2009年门诊部检测的4183人中，将用ELISA法筛查出的406例乙肝阳性标本，再行胶体金试纸法检测，并取HBsAg强阳性标本20例，用生理盐水做倍比稀释（原液1：2、1：4～1：512）。

8方法：

两种方法均严格按照试剂说明书进行操作。结果判断：①胶体金试纸条：按说明书判断结果。②ELISA法：样品A值s/C.O≥1.0者HBsAg为阳性。

9结果

用ELISA法检测出的406份HBsAg条检测HBsAg，仅有3份标本未检出，检出率99.01%。将倍比稀释后的标本再行胶体金试纸条检测HBsAg，结果一致。

10讨论

ELISA法具有灵敏度较高、特异性强、重复性好、可进行定量和半定量测定等优点，可以在酶免疫分析仪上做批量检测，是目前实验室最常用的检测HBsAg的方法，但是该方法易受加样、反应温度、反应时问、洗涤彻底性等诸多因素的影响，而且操作步骤较多，整个试验过程至少需要2小时左右，因此不适用于急诊及无偿献血现场筛查。胶体金试纸条法是在ELISA法基础上发展起来的一种快速检测技术，具有操作简便、快捷、可单份检测、便于保存、不需特殊设备等优点，也广泛应用于临床对HBsAg进行初筛，对急诊及无偿献血的现场的筛查有其实用价值，可避免无效采血所造成的浪费，节省了大量的人力、物力。目前，国产的HBsAg胶体金试纸条检测灵敏度已达到1ng/ml。但是胶体金试纸条在HBsAg检测中也有一定的欠缺。由于胶体金显色需要较高浓度的标记物，故其灵敏度会受到一定限制，在HBsAg浓度较低时易出现假阴性。因此，尽管该操作简便、快速、无需特殊设备，肉眼可以直接观察结果，但对于低滴度HBsAg感染者极易造成漏检。为避免假阴性的产生，最好用ELISA法进行HBsAg测定，另外溶血标本也会影响到试纸条的检测结果。ELISA法与胶体金试纸条法各自具有一定的优缺点，在临床检验工作中，可根据具体情况进行选择。

从以上结果可以看出，与ELISA法相比，存在一定的漏检率，不能完全代替ELISA法，ELISA法仍是临床免疫学诊断的主要依据[2]。造成胶体金试纸条法漏检的原因主要有原理及方法学上的差异、试剂本身的灵敏度较ELISA法低、个别标本可能存在HBsAg亚型以及温度、观测结果的时间短等[1]。笔者建议在使用胶体金试纸条检测HBsAg观察结果时，若阴性，应适当延长反应时间再观察结果，以60 min为宜，以免造成HBsAg弱阳性的漏检。

11结论

综合性医院一般不宜使用胶体金试纸条法检测患者的HBsAg，对于胶体金试纸条法筛查阴性的临床标本，建议用ELISA复检，以防漏检造成人为差错而延误诊断甚至引起医患矛盾或医疗纠纷。

参考文献

[1]红.ELISA法与胶体金试纸条检测Hb—sAg差异分析.公企医刊，2010：O1.

[2]陈向阳.胶体金免疫层析法与ELISA检测HbsAg的比较.上海医学检验杂志，2001：05.

[3] 杨静.抗乙型肝炎病毒药物靶标的筛选和验证.中国人民解放军军事医学科学院，2005.经