宫颈癌中COX—2的表达与HPV16感染的关系

李芳

【摘要】目的： COX-2在宫颈鳞状细胞癌变中的表达及与HPV16感染的关系进行探讨。方法：采用EliVisionTM plus两步法，检测COX-2在42例宫颈鳞状细胞癌、17例正常宫颈鳞状上皮的表达。原位杂交技术检测宫颈鳞状细胞癌、正常宫颈鳞状上皮的表达。 结果：（1）COX-2在宫颈鳞状细胞癌和正常宫颈上皮二者之间的阳性表达率存在明显差异（P<0.01）。（2）HPVl6DNA 在宫颈鳞状细胞癌、正常宫颈鳞状上皮两组存在着较大的差异<0.01）。（3）HPv感染和COX-2蛋白表达在宫颈鳞状细胞癌表达呈正相关，在正常宫颈上皮组织中无相关性。结论： COX-2在正常宫颈上皮和宫颈鳞状细胞癌中表达存在明显差异。与此同时，COX-2的与HPV协同作用和蛋白表达上调对于治疗中晚期宫颈鳞状细胞癌极为有效。

【关键词】宫颈鳞状细胞癌；COX-2；HPV16感染

【中图分类号】R 737. 33 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）03-0105-01

宫颈鳞状细胞癌是一种较为常见的女性恶性肿瘤，其发生发展通常是由多种因素导致。环氧合酶-2（COX-2）在多种肿瘤细胞和肿瘤组织中都被普遍过表达，是一种典型的限速酶，由催化前列腺素合成。Masferrer [1]等发现，COX-2高表达很容易导致癌症发生。从目前来看，HPV（人类乳头瘤状病毒）是高危因素，特别是HPV16/18[3]。本文就COX-2在宫颈鳞状细胞癌中的表达及与HPV16感染的关系进行探讨。

材料与方法

1.材料：选取2011—2012年保定市第二医院医院病理科所保存的59例石蜡包埋标本。其中，42例为宫颈鳞状细胞癌组织，17例非肿瘤患者的正常宫颈鳞状上皮为对照组。标本切片厚度4μm，石蜡包埋， 4%中性甲醛固定。

2.免疫组织化学：采用EliVisionTM plus两步法。福州迈新试剂公司生产的DAB显色试剂盒、EliVisionTM plus检测试剂盒、兔抗人COX-2单克隆抗体。操做步骤主要参照试剂盒说明书进行。

3.原位杂交主要步骤：切片经烤片后脱蜡；微波加热脱水干燥；每张切片滴加25山地高辛标记HPVl6探针，并加盖玻片；95℃变性8 min于37℃湿盒（含杂交增强液）中孵育过夜（<16 h）；加50山抗地高辛抗体，37℃濕盒中孵育30 min后加二抗；DAB显色；苏木精对比染色，中性树胶封片。

4.结果判断：染色结果由两位专业的病理专家进行评估。参照Kim YB[4]等的方法来改进染色结果，半定量的综合计分根据胞浆阳性染色强度和细胞百分比进行，分为2组（-，+）。对阳性细胞百分比进行观察，阳性细胞百分比≥75%计4分，阳性细胞百分比51～75%计3分，阳性细胞百分比26～50%计2分，阳性细胞百分比≤25%计1分，无阳性细胞计0分；染色强度按照所呈现出来的染色计分，3分为深褐色， 2分为棕黄色，1分为淡黄色，0分为无着色；将着色强度+阳性细胞百分比的计分进行相加，≥3分为阳性（+），0～2分为阴性（-）。

5.统计学处理：采用SPSS 14.0统计软件。

结果

1.COX-2的表达：在正常宫颈鳞状上皮中，COX-2为阴性表达（0/17）。宫颈鳞状细胞癌中，COX-2的阳性表达率为57.14%（24/42）。宫颈鳞状细胞癌和正常宫颈上皮二者之间的阳性表达率存在明显差异（P<0.01）。

2.HPVl6DNA的表达：在宫颈鳞状细胞癌、正常宫颈鳞状上皮中，HPV l6DNA的阳性表达率分别为78.57%（33/42）、17.65%（3/17）。两组存在着较大的差异 （P<0.01）。

3.HPV l6DNA和COX-2的相关性：在42例宫颈鳞状细胞癌中，24例共同表达； 17例宫颈低级别上皮内瘤变中，有2例HPVl6DNA和COX-2共同表达。相关分析表明，HPv感染和COX-2蛋白表达在高级别宫颈鳞状细胞癌和上皮内瘤变呈正相关，在正常宫颈上皮组织中无相关性。

讨论

Cox-2在正常组织不表达，但是在受到促瘤剂、细胞因子、生长因子的刺激之后，会出现较大的表达，属于典型的诱导型酶 [5]。我们发现COX-2在正常宫颈鳞状上皮呈阴性表达，而在和宫颈鳞状细胞癌中COX-2阳性表达率明显增高。这表明COX-2在宫颈鳞状细胞癌形成中起到重要作用。同时，原位杂交研究结果显示，在正常宫颈鳞状上皮到宫颈鳞状细胞癌，HPVl6DNA的阳性表达率递增较为明显， HPV感染可以充分发挥出其较为有效的作用。与此同时，COX-2的与HPV协同作用和蛋白表达上调对于治疗中晚期宫颈鳞状细胞癌极为有效。

参考文献

[1]Masferrer JL，et al.Antiangeogenic and anti-tumor activities of COX-2 inhibibrs[J].Cancer Res，2000；60（5）：1306-1311

[2]李宝康，赵纯全.病毒感染与宫颈癌的相关性研究进展[J].重庆医学，2010，36（5）；476-478

[3]薛景，余文菊.宫颈癌和宫颈上皮内瘤变组织中HPV16/18感染与Ki-67、P16表达的关系[J].浙江实用医学，2010，14（2）：89-106

[4] Kim YB， et al. COX-2 expression in squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of the uterine cervix.Int J Radiat Oncol Biol Phys， 2004， 60（3）：822-829

[5]徐萍，荣风年.COX-2、MMP-9在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中表达及临床意义[J].现代肿瘤医学，2008，16（8）；1385-1387

[6] Boyer SN，Wazer DE，Band V. E7 protein of HPV16 induces degration of retinoblastoma protein through the ubiquitin proteasoma pathway.Cancer Res，1996，56（20）：4620-4624