PhoenixTM100直接测定血培养细菌和药敏试验应用评价

李医等

【摘要】目的：为进一步缩短菌血症实验诊断报告时间，评价血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏试验的可行性。方法：100例单一菌阳性血培养标本，包括42例阳性球菌和58例阴性杆菌，进行直接法PhoenixTM 100仪器鉴定和药敏试验，与标准传代培养法比较鉴定和药敏的准确率、符合率。结果：58株阴性杆菌中53株鉴定正确（准确率91.4%），2株鉴定错误（3.4%），3株不能鉴定（5.2%）；42株阳性球菌中，26株鉴定正确（准确率61.9%），12株鉴定错误（28.6%），4株不能鉴定（9.5%）。在药敏试验结果中，阳性球菌的药敏试验结果与标准法比较，符合率达96.6%，其中极重大错误、重大错误、次要错误分别为0.3%、0.0%、3.2%；阴性杆菌试验结果与标准法比较，符合率达98.8%，其中极重大错误、重大错误、次要错误分别为0.1%、0.3%、0.8%。结论：单一革兰阴性菌血培养标本应用自动化仪器PhoenixTM 100系统鉴定和药敏试验结果可靠，而单一革兰阳性菌血培养标本药敏试验结果可靠，但PhoenixTM 100直接鉴定准确率较低（61.9%）。

【关键词】血培养；细菌鉴定；药敏试验；PhoenixTM 100

【中图分类号】TH773 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）03-0090-01

血流感染（Blood stream infections，BSI）及相关的败血症是临床急症，具有较高的发病率和死亡率，是全球面临的重要医学挑战。流行病学研究资料表明，约2%的住院病人和高达75%的重症监护病人可发生败血症，死亡率高达20～50%。住院病人中，血培养阳性病人的死亡率是血培养培养阴性者的12倍。另据报道，从败血症休克发生直到开始靶向治疗，每延误1小时，败血症休克死亡的危险性约增加8%[1]。

因此，加快血流感染的诊断，进而及早进行有针对性的抗菌药物治疗，对于救治病人，降低死亡率有十分重要的意义。血培养检查是诊断血流感染的“金标准”，然而，尽管证据表明快速鉴定和有效的抗菌药物治疗能挽救病人的生命，但当前，临床微生物实验室即使应用先进的自动化血培养仪检测阳性后，还需进行革兰染色，传代培养，生化试验，再进行药物敏感实验，至少耗时2～3天，而对于一些苛养菌或非典型菌则耗时更长，不可避免错失了救治的最佳机会。国内外报道了很多直接从阳性血培养液用各种自动化仪器进行鉴定和药敏试验的方法，为积累经验，减少血培养报告周转时间，我们对连续送检的103例阳性血培养标本进行了直接鉴定和药敏试验，现将结果报告如下：

材料与方法

一、样本

103份革兰染色表明是单一菌血症的血培养标本来自2013年2月至2013年5月间浙江大学医学院附属第一医院的住院和门诊病人，同一病人只计第一次阳性送检样本。其中传代培养以后有两种以上细菌生长的3例（2.9%）标本，将其排除在外。剩下100例单一菌血症血培养经鉴定为阳性球菌的42例，阴性杆菌的58例。42例阳性球菌中以葡萄球菌为主（33株），包括金黄色葡萄球菌10株，

其他凝固酶阴性葡萄球菌23株；肠球菌属5株；链球菌属3株；微球菌属1株。58株阴性杆菌中，肠杆菌科44株，包括大肠埃希菌16株，肺炎克雷伯菌占25株，产酸克雷伯菌1株，奇异变形杆菌1株，产气肠杆菌1株。非发酵菌14株，包括鲍曼不动杆菌9株，铜绿假单胞菌4株，嗜麦芽窄食假单胞菌1株。

二、主要仪器与试剂

美国BD公司BACTEC FX自动血培养仪及其配套BD需氧和厌氧血培养瓶，PhoenixTM 100自动化细菌鉴定仪及其配套的阴性杆菌和阳性球菌的鉴定药敏复合卡。

三、标准方法鉴定和药敏

将已取好病人血样的血培养瓶置于BACTEC FX血培养仪中孵育，仪器阳性报警后，取少量阳性血培养瓶中的液体涂片革兰染色，同时接种于血琼脂平板，置37℃，5% CO2孵箱中孵育过夜，挑取单个菌落调整至0.5～0.6麦氏浊度，根据细菌菌落的生长特征来区分是阳性菌还是阴性菌，分别选用阳性球菌或阴性杆菌鉴定药敏卡用PhoenixTM 100自動化鉴定仪鉴定和药敏。

四、PhoenixTM 100直接鉴定和药敏

从阳性血培养瓶中抽取少量液体涂片革兰染色，根据染色结果区分阳性菌和阴性菌。然后抽取6ml液体注入带有分离胶的真空采血管中，3500rpm/min，离心5min后，细菌就沉降在分离胶的表面，用灭菌枪头吸出上清液，留取0.1ml液体，轻轻混匀至底部细菌悬浮于液体中，将浓缩的菌液调至0.5～0.6麦氏浊度，之后的鉴定和药敏过程参考标准方法。

五、数据分析

以标准方法为对照，根据是否正确鉴定至细菌种的水平，将直接法鉴定结果分为三类：正确鉴定，不能鉴定和错误鉴定；将药敏不符的结果分为三类：极重大错误（标准法是R，直接法是S）、重大错误（标准法是S，直接法是R）、次要错误（标准法是I，直接法S/R；标准法是S/R，直接法是I）。

讨论

菌血症有较高的发病率和死亡率，早期给予病人合适的抗生素治疗对于病人的生存是至关重要的，同时可以减少各种广谱抗生素滥用给病人带来的副作用并减轻病人的经济负担，减少不必要的浪费。之前国内外有较多阳性血培养用各种不同鉴定仪器直接鉴定和药敏试验的报道，我们与之前的研究结果都表明直接法的鉴定和药敏试验对于革兰阴性杆菌有很高的符合率和准确率，但对于阳性球菌的鉴定结果可信度不高[2]。有研究表明在用PhoenixTM 100鉴定前，在阳性血培养液内加皂素后，直接法对革兰阳性球菌的鉴定和药敏结果与标准法比较符合率可达82%和97%，大大提高了直接法鉴定结果的准确性。

本次研究，只针对单一菌血症的病人，所以阳性血培养涂片与革兰染色非常重要，对血涂片结果是单一细菌，血琼脂平板上生长多种细菌的病例也排除在外，以减少实验误差。本次研究也只针对革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌，对于血液中的酵母菌引起的单一菌血症也排除在外。

对于鉴定错误的阳性球菌，我们发现大都被鉴定为片球菌属和库克菌属，因此对于此类菌的鉴定结果，需借助其他补充试验确认。库克菌是皮肤和口腔常居菌，很少引起菌血症，有研究表明，表型变异可能是将葡萄球菌错误鉴定为库克菌属的原因。

尽管革兰阳性球菌的鉴定准确率较低，但其药敏符合率却高达96.6%，并且有12株（47.8%）菌株的药敏结果与标准法完全一致；阴性杆菌的药敏符合率也高达98.8%，其中45株（77.6%）的药敏结果与标准法完全一致。本次实验中，只有苯唑西林和四环素发生了极重大错误。重要的是，直接药敏法（比标准法快24h）克服了常规方法用转种的菌落做细菌鉴定和药敏试验费时的缺点，充分发挥了全自动血培养和全自动微生物鉴定仪的作用，可以及时为临床提供较为准确的药敏结果，使病人能够早期合理运用抗生素，减少不必要的广谱抗生素的使用，降低菌血症病人的死亡率。

参考文献

[1]Byran CS： Clinical implications of positive blood cultures. Clin Microbiol Rev 1989；2：329-53.

[2]Martin GS， Mannino DM， Eaton S， and Moss M. The epidemiology of sepsis in the US from 1979 through 2000. N Engl J Med .2003； 348：1546–1554.