花天胶囊对前列腺增生大鼠超氧化物歧化酶和丙二醛的影响

敖 曼，熊 怡，刘 佳

（1.贵州省贵阳市第一人民医院，贵州 贵阳 550001； 2.贵州省遵义市第二人民医院，贵州 遵义 563000）

良性前列腺增生（BPH）又称前列腺肥大，多发于老年男性，是泌尿系统的常见病。BPH的发病率随男性年龄递增而增加，50岁的男性40%有BPH组织学改变，80岁则高达90%[1]。随着我国步入老龄化社会，BPH发病率的大幅提升，给老年人的健康与生活带来了严重的危害，因此对BPH的研究和治疗显得极为紧迫和重要。中药由于具有安全性高、不良反应少、疗效肯定、适合长期服用等特点，在治疗BPH方面具有一定的优势，有着较好的发展前景[2]。不少BPH患者通过中医辨证论治，收效尚佳。毋庸置疑，中药的诸多优点对于BPH患者整体体质的调节及控制病情的进展将起着重要作用[3]。笔者将花天胶囊用于前列腺增生大鼠，并检测超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量，初步探讨其作用机制。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物与材料

SD大鼠，体重250～300 g，雌雄兼用，贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号为 SCXK（黔）2002－0001。花天胶囊，主药为花粉、天麻，囊内容物为淡黄色粉末，气清香，味微甜，每 g含原生药 0.15 g（上海同济堂药业有限公司，批号为 091006），临用前用蒸馏水配制成所需浓度的混悬液；甲睾酮片（上海信谊康捷药业有限公司，批号为090101）；前列康（商品名普乐安片，浙江康恩贝制药股份有限公司，批号为0810123）。U－2001型紫外扫描分光光度计（日本日立公司）。SOD即用型试剂盒（南京建成生物工程研究所）。MDA即用型试剂盒（南京建成生物工程研究所）。

1.2 方法

1.2.1 建模[4]

雄性SD大鼠61只，体重250～300 g。基础饲养1周适应环境后，随机分为6组：对照组（等量0.9%氯化钠注射液）、模型组（等量 0.9% 氯化钠注射液）、前列康组（1.60 g /kg）、花天胶囊高剂量组（1.08 g /kg）、中剂量组（0.54 g/kg）、低剂量组（0.27 g /kg）。动物均静脉滴注给药，每天上午除对照组大鼠静脉滴注给予等量0.9%氯化钠注射液外，其余组均灌胃给予甲睾酮8 mg/kg，制作前列腺增生模型；每天下午除对照组和模型组大鼠给予等量生理盐水外，其余组均静脉滴注给予相应药物。各组每日给药1次，连续28 d，每隔7 d称重1次，根据体重调整给药剂量。

1.2.2 SOD 活力检测

末次给药后1 h，各鼠称体重后处死，剖开下腹部，仔细分离并摘除前列腺，取相同部位等质量的前列腺组织，加生理盐水研磨制备成10%匀浆，用于SOD检测。按操作步骤完成后，于紫外分光光度计550 nm波长处测定吸光度，计算SOD活力。

组织匀浆中 SOD活力（U/mgprot）＝(对照管吸光度 －测定管吸光度)/对照管吸光度÷50% ×反应液总体积/取样量(mL)÷组织中蛋白含量（mgprot/mL）

操作步骤：对照管依次加入试剂 11.0 mL，蒸馏水 0.1 mL，试剂 20.1 mL，试剂 30.1 mL，试剂 40.1 mL；旋涡混匀器充分混匀，置37℃恒温水浴箱40 min，加显色剂 2 mL，测吸光度。2）测定管依次加入试剂1 1.0 mL，各试验组大鼠前列腺组织上清液0.1 mL，试剂 20.1 mL，试剂 30.1 mL，试剂 40.1 mL；旋涡混匀器充分混匀，置37℃恒温水浴箱40 min，加显色剂2 mL，测吸光度。用考马斯亮蓝法测定前列腺组织蛋白浓度。

1.2.3 MDA 含量检测

取相同部位等质量的前列腺组织，加生理盐水研磨制备成10%匀浆，用于MDA检测。按操作步骤完成后，于紫外分光光度计550 nm波长处测定吸光度，计算MDA含量。

组织MDA含量（nmol/mL）＝[（测定管吸光度 －测定空白管吸光度）/（标准管吸光度 －标准空白管吸光度）]×标准管浓度（10 nmol/mL）×样本测试前稀释倍数

操作步骤：标准管加入10 nmol/mL标准品0.1 mL和试剂 1 0.1 mL混匀试剂，再次加入试剂23 mL和试剂31 mL。标准空白管加入无水乙醇0.1 mL和试剂10.1 mL混匀试剂，再次加入试剂2和试剂31 mL。测定管依次加入各试验组大鼠前列腺组织上清液 0.1 mL和试剂 10.1 mL，混匀，再加入试剂 23 mL和试剂31 mL。测定空白管加入依次加入各试验组大鼠前列腺组织上清液0.1 mL和试剂 10.1 mL，混匀，再加入试剂 23 mL和 60%冰醋酸1 mL。混匀后，置95℃水浴10 min，3 500～4 000转离心10 min，取上清液，测吸光度。

1.3 统计学处理

2 结果

结果见表1。

表1 各组大鼠前列腺组织SOD活力及MDA含量比较(±s)

表1 各组大鼠前列腺组织SOD活力及MDA含量比较(±s)

注：与对照组比较，＃P ＜0.01；与模型组比较，*P ＜0.05，△P ＜0.01。NS为0.9%氯化钠注射液。

MD A含量(n m o L/m g)8 7.9 9 ± 6 5.3 2 155.0 6 ± 2 5.7 9＃1 0 8.9 7 ± 4 3.0 8△1 1 2.2 2 ± 3 2.7 5△1 2 3.7 3 ±59.1 3 1 3 5.9 4 ± 6 6.2 9组别对照组（n＝1 0）模型组（n＝1 1）前列康组（n＝1 0）花天高剂量组（n＝1 1）花天中剂量组（n＝9）花天低剂量组（n＝1 0）剂量（g/k g）等量N S等量N S 1.6 0 1.0 8 0.5 4 0.2 7 S O D活力(U/m g p o r t)1 2 7.9 7 ± 1 4.8 0 7 8.2 4 ± 2 6.6 2＃1 2 7.6 9 ± 3 3.1 6*1 1 0.5 8 ± 3 1.8 7*1 1 5.7 0 ± 4 5.7 6*1 0 4.4 4 ± 3 8.7 9

3 讨论

大量研究证明，体内过量的自由基会损伤蛋白质、细胞膜，促使细胞组织DNA突变，从而诱发或加速人体多种疾患的产生与恶化。在辐射损伤、炎症和应急反应、肿瘤病变、再灌注损伤、衰老等多种情况下，多伴随自由基异常剧增。SOD是体内自由基－超氧阴离子自由基重要的清除剂。

SOD是一类广泛分布于组织细胞内的金属酶，可催化超氧阴离子自由基发生歧化反应[5]，对于平衡机体氧化与抗氧化系统、免除自由基损伤起着至关重要的作用。Ripple等[6]研究表明，氧化损伤具有诱导前列腺细胞增生和致癌变的潜在作用。SOD可清除自由基，减少细胞膜过氧化损伤，保护细胞膜的稳定性和细胞的通透性，从而保持前列腺正常的生理功能[7]。MDA是膜脂质过氧化的重要产物。机体在多种情况下遭受的伤害，其中伤害因子之一就是活性氧积累诱发的膜脂质过氧化。在前列腺细胞膜损害或前列腺增生时，伴随有MDA的含量增多[8]。

慢性细菌性前列腺炎患者的氧化应激和氧化损伤作用明显增强，表现为一氧化氮（NO）、MDA增加，SOD等降低，并与疾病的进程密切相关。刘小平等[9]发现，慢性细菌性前列腺炎和慢性非细菌性前列腺炎患者血清中MDA水平增高，而SOD活力水平降低，认为这与前列腺炎的长期慢性炎症刺激有关。

本试验结果表明，花天胶囊可明显增加大鼠前列腺组织中SOD的活力，明显降低前列腺组织中MDA的含量，提示其可能通过对SOD及MDA的作用，发挥抗前列腺增生效果，可能是其抗前列腺增生的作用机制之一，但尚需进一步研究。

参考文献：

[1]马 跃，张唯力.良性前列腺增生合并慢性前列腺炎的研究进展[J].中华男科学杂志，2010(7):25－27.

[2]张江磊，侯建全.组织学前列腺炎与良性BPH临床进展的关系[J].江苏医药，2010，2(4):36.

[3]吴学杰，杨罗艳，张选志.良性前列腺增生合并慢性前列腺炎的临床分析[J].中华男科学杂志，2008（14）:527 －529.

[4]周建衡，洪振丰.前列宁颗粒对大鼠前列腺增生的影响[J].福建中医院学报，2008，18(5)：45 －47.

[5]黎瑞珍，杨庆建.超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定及其应用研究[J].琼州大学学报，2004，11(5):34.

[6]Ripple MO，Henry WF，Rago RP，et al.Prooxidant－ antioxdant shift induced by androgen treatm ent of human prostate carcinomacells[J].J Natl Cancer lnst，1997，89:40－48.

[7]Kolasa A，Marchlewicz M，Adler G，et al.Expression ofE.Sod，GPX5 mRNAs and immunoexpression of Cu/ZnSOD in epididymal epithelialcells of finasteride－treated rats[J].Andrologia，2008，40(5):303－311.

[8]罗文峰.非那雄胺对前列腺增生症患者头发、SOD和MDA的影响[J].临床医学工程，2011，18(3):397 －398.

[9]刘小平，邓 岩.氧自由基在前列腺炎发病中的作用[J].中国男科学杂志，2001，15(4):264 －265.