HPLC法测定痛痹康胶囊中士的宁含量

施 猛，任亚东，肖 艳，刘志强

(扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司，广东 广州 510663)



HPLC法测定痛痹康胶囊中士的宁含量

施 猛，任亚东*，肖 艳，刘志强

(扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司，广东 广州 510663)

目的：建立痛痹康胶囊中士的宁的含量测定方法，为其质量控制提供参考依据。方法：采用高效液相法，色谱柱采用正相硅胶柱(4.6mm×250mm，5μm) ，以正己烷-二氯甲烷-无水甲醇-三乙胺(47.5∶47.5∶5∶0.4)为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为280nm，进样量为10μL。结果：士的宁的回归方程为y=7.108 34x-21.971 91,r=0.999 86，其在31.00～387.40μg/mL浓度范围内与峰面积积分线性关系良好，平均加样回收率为101.8%(n=6)，RSD值为2.15%；样品中士的宁的平均含量为0.19 mg/粒。结论：该方法操作简单,稳定性、重现性好，可用于该制剂中士的宁含量的检测。

痛痹康胶囊；士的宁；含量测定

痛痹康胶囊(原名：仲香胶囊)是在清代《急救应验良方》九分散的基础上加味而成，共由十一味中药材(制马钱子、麻黄、乳香、没药等)组成[1]。痛痹康胶囊为中药六类新药，目前三期临床试验已完成，主要用于治疗腰锥间盘突出症引起的腰腿疼痛、下肢麻木等，其总体有效率可达90%以上。

中药及其制剂的内在稳定性是中药现代化研究的关键点之一。方中的君药为制马钱子，其主要成分为马钱子碱和士的宁，其中士的宁既是有效成分又是毒性成分。为保证临床用药安全、有效，应当合理控制方中士的宁的含量[2]。笔者采用高效液相色谱法(HPLC)对该制剂中的有效成分士的宁进行了含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1260 高效液相色谱仪(Agilent 公司);PDAD光电二极管阵列检测器(Agilent 公司);梅特勒XS205 电子天平(梅特勒公司)。

1.2 试药

样品：痛痹康胶囊(扬子江药业集团广州海瑞药业自制，批号：48120501；48120601；48120602)；对照品：士的宁，含量为97%(中国食品药品检定研究院，批号：110705-200306)；正己烷、二氯甲烷、无水甲醇为色谱纯；三乙胺、三氯甲烷、乙酸乙酯、氢氧化钠、氨水为分析纯。

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱：ECOSIL硅胶柱( 4.6mm × 250mm，5μm) ，流动相：正己烷-二氯甲烷-无水甲醇-三乙胺(47.5∶47.5∶5∶0.4)，检测波长：280nm，流速：1.0mL/min，进样量：10μL。

2.2 对照品溶液制备

精密称取士的宁(五氧化二磷减压干燥12h)对照品约40mg，置于100mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。再精密量取对照品储备液5mL，置于25mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备方法

取痛痹康胶囊颗粒约5.0g，精密称定，加氢氧化钠溶液15mL使之溶解，放置30min，精密加入三氯甲烷50mL，称定重量，超声60min(每10min振摇1次)，放冷，用三氯甲烷补足减失的重量，分取三氯甲烷层，滤过。精密量取续滤液20mL，置于水浴中蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解，转移并定容至10mL，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 测定方法

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，用外标法计算士的宁含量。

3 结果

3.1 系统适应性试验和专属性试验

参照痛痹康胶囊处方制备不含马钱子的阴性样品，研细，按照“2.3”项所述方法处理，制备阴性对照溶液。取流动相用0.45μm微孔滤膜过滤作为空白样品。精密量取空白样品、阴性对照样品、供试品溶液及对照品溶液各10μL，按上述色谱条件测定，记录色谱，见图1。

结果表明，空白样品和阴性样品在士的宁对照品保留时间处无干扰，样品色谱中士的宁与相邻杂质峰的分离度大于1.5，士的宁的理论塔板数为14 159，均符合要求，该方法具有检测士的宁的专属性。

3.2 精密度

精密量取对照品溶液10μL，连续进样6次，测定样品峰面积。结果表明其平均峰面积为1 074.296，RSD为0.25%，表明仪器精密度良好。

3.3 线性关系考察

精密量取上述对照品储备液2、3、5、10、20mL，分别置于25mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，得到质量浓度分别为31.00、46.50、77.50、155.00、310.00μg/mL的系列溶液。分别精密量取上述对照品系列浓度的溶液及对照品储备液各10μL，按照“2.1”所述色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标(y)，士的宁质量浓度(x，μg/mL)为横坐标，进行线性回归，得到回归方程为y=7.108 34x-21.971 91，r=0.999 86。实验结果表明，士的宁在31.00～387.40μg/mL浓度范围内与峰面积线性关系良好。

3.4 重复性试验

分别取同一批号的痛痹康胶囊样品6份，精密称定，按照供试品溶液制备方法处理，并按照“2.1”所述的士的宁含量测定方法测定，计算含量。结果表明，样品中士的宁平均含量为0.546mg/g，RSD为2.0%，该方法重复性良好。

3.5 稳定性试验

取“2.3”项下的供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h测定士的宁峰面积，结果表明，供试品溶液在24h内基本稳定，平均峰面积为721.068，RSD为1.52%，样品在24h内无明显变化。

3.6 加样回收率试验

精密称取痛痹康胶囊样品6份，约2.5g，分别精密加入等量对照品，按照供试品溶液制备方法处理，并按照“2.1”所述色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。结果表明，该方法测得的加样回收率在95%～105%之间，RSD为2.15%，回收率符合要求。

3.7 样品含量测定

取痛痹康胶囊样品3批，按供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件依次测定,计算士的宁含量，结果见表2。测得痛痹康胶囊中士的宁的平均含量为0.19mg/粒，符合规定。

表2 样品中士的宁含量测定结果

表1 加样回收率实验结果 (n=6)

4 讨论

笔者参考了《中国药典》2010年版[3]马钱子药材中士的宁的含量测定方法及相关文献。针对该制剂的特点，主要对含量测定方法中液相色谱的流动相组成和供试品溶液制备方法进行了筛选和优化。

笔者将士的宁对照品溶液在250～320nm范围内进行光谱扫描，发现士的宁在280nm处有最大吸收，故确定检测波长为280nm。药典中测定士的宁含量使用的流动相为乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调 pH 至2.8)。考虑到庚烷磺酸钠为离子对试剂且价格昂贵，且液相平衡时间较长，色谱洗脱步骤繁琐。文献[4-5]报道，当在流动相中加入三乙胺后，色谱峰峰形和分离度均得到了明显改善。王亚静[6]采用C8柱，以甲醇-水-冰醋酸( 100∶480∶35，用三乙胺调pH3.2) 为流动相时，能使样品中的士的宁与马钱子碱分离开来，说明采用三乙胺调pH值也是一种有效的方法，其他文献也有类似报道[7]。因此，参考上述文献，经过多次实验，选择了正相硅胶柱，以正己烷-二氯甲烷-无水甲醇-三乙胺(47.5∶47.5∶5∶0.4)为流动相，可使士的宁的峰形和分离度都较好。

图1 痛痹康胶囊高效液相色谱

此外，笔者还考察了供试品溶液制备方法中不同超声提取时间对士的宁含量的影响，发现考察的四种提取时间的士的宁含量分别为0.277mg/mL、0.354mg/mL、0.344mg/mL、0.277mg/mL，说明超声提取时间对士的宁的含量有一定影响，故选择士的宁含量最高的60min。

综上所述，该方法精密度好，操作简单，准确可靠，可用于痛痹康胶囊中士的宁的含量测定及该制剂的质量控制。

[1] 张锡玮,李国信,卢春玲,等.仲香胶囊Ⅰ期临床耐受性研究[J].中国新药杂志,2009,18(5):424-426.

[2] 房丹,刘维,刘晓亚,等.马钱子药理学研究进展[J].辽宁中医杂志,2007,34(7):1018-1020.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:48.

[4] 孙凌,李永吉,王艳宏,等.高效液相色谱法测定接骨挫胶囊中士的宁含量[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(16):98-99.

[5] 周玲,孙汉斌,邓旭坤,等.高效液相色谱法测定3种马钱属药材中士的宁和马钱子碱的含量[J].中国医院药学杂志,2012,32(16):1301-1302.

[6] 王亚静.HPLC同时测定腰痛宁贴片中的士的宁和马钱子碱[J].华西药学杂志,2001,26(1):73-74.

[7] 张丹,王之梅,颜学伟,等.HPLC法测定偏瘫康复液中士的宁和马钱子碱的含量[J].中国新药与临床药理,2012,23(3):335-338.

(责任编辑：尹晨茹)

Content Determination of Strychnine in TongBikang Capsule by HPLC

Shi Meng,Ren Yandong*,Xiao Yan,Liu Zhiqiang

(Yangze River Pharmaceutical Group ,Guangzhou Hairui pharmaceutical Co.,Ltd.,Guangzhou 510663, china)

Objective:To establish a method for the determination of strychnine in TongBikang capsule, thus to provide a scientific basis for its quality control.Methods:HPLC method was adopted. These separation was performed on Ecosil HPLC column with mobile phase consisted of Hexane-dichloromethane-anhydrous methanol-triethylamine (47.5∶47.5∶5∶0.4) at the flow rate of 1.0mL/min. The detection wavelength was set at 280nm and the injection volume was 10μL.Results:The linear range of strychnine was 31.00～387.40μg/mL (r=0.999 86) with an average recovery of 101.8% (RSD=2.15%, n=6) . The average concentration of strychnine was 0.19mg/tables.Conclusion:The method is simple, stable, reproducible, and can be used for the preparation of quality control.Key Words: TongBikang Capsule;Strychnine;Content Determination

2014-04-02

施猛(1976-)，男，硕士，扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司工程师，研究方向为药品研发。

任亚东(1978-)，男，硕士，扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司执业药师，研究方向为药品生产质量管理。

R284.1

A

1673-2197(2014)12-0022-03