人类白细胞抗原-G5对移植肾功能延迟恢复的影响

李聪然，肖 漓，石炳毅，李州利，王 爽，詹胜利，蔡 明

解放军第309医院 全军器官移植研究所，北京 100091

人类白细胞抗原-G5对移植肾功能延迟恢复的影响

李聪然，肖 漓，石炳毅，李州利，王 爽，詹胜利，蔡 明

解放军第309医院 全军器官移植研究所，北京 100091

目的观察和比较人类白细胞抗原-G5(human leukocyte antigen G5，HLA-G5)不同表达水平对肾移植术后移植肾功能延迟恢复(delayed graft function，DGF)的影响。方法应用酶联免疫方法(ELISA)检测HLA-G5在肾移植受者体内表达情况，分析对比HLA-G5不同表达组移植肾功能延迟恢复的发生率。结果肾移植术后HLA-G5高表达组无1例发生DGF，而低表达组发生率为57%(P＜0.05)。结论DGF的发生与HLA-G5表达水平密切相关，HLA-G5可能通过减少排斥反应减少DGF的发生。

人类白细胞抗原-G5；肾移植；移植肾功能延迟恢复

人类白细胞抗原-G(human leukocyte antigen G，HLA-G)具有多重免疫调节特性，在正常生理条件下，HLA-G表达于妊娠期的绒毛膜外的细胞滋养层，在诱导和维持母胎耐受机制中发挥十分重要的作用，另外在胸腺髓质间上皮细胞、眼球角膜部分等免疫赦免区也有表达[1-2]。在病理条件下，尤其在肿瘤、器官移植、病毒感染等情况下，HLA-G在血清、血浆中水平明显升高[3-4]，其表现出的免疫调节作用也受到越来越多的关注。HLA-G初始转录物经过选择性剪接产生7种异构体，HLA-G5为其中的一种可溶性抗原，它能直接或间接调节机体免疫细胞的生物学功能。已有研究发现，HLA-G高表达受者急性排斥反应发生率低，且无慢性排斥反应发生[5-6]。在观察和比较肾移植术后HLA-G5表达水平与移植肾功能时，我们发现HLA-G5表达水平与移植肾功能密切相关，而HLA-G5与移植肾功能延迟恢复少有报道。本文旨在回顾我院肾移植术后HLA-G5不同表达水平组间DGF发生率，研究HLA-G5在移植肾功能延迟恢复中的重要作用。

资料和方法

1 研究对象 2008年1月- 2010年12月本院肾移植受者40例，均为初次肾移植受者，且肾移植术后3个月内无明显感染病灶。

2 实验材料 单抗MEM-G/9mb(ALEXIS公司)；抗体Anti-β2-microglobulin HRP(Dako公司)；ELISA包被液为0.05 mol/L碳酸盐缓冲液，洗涤液为磷酸盐吐温缓冲液(phosphate buffered saline with tween，PBST)，封闭液、抗体稀释液为1%牛血清白蛋白的PBST，pH 5.0碳酸盐-柠檬酸盐缓冲液按常规方法配制，底物溶液为邻苯二胺(OPD)-H2O2，终止液为2 mol/L的H2SO4。

3 血清样品的ELISA检测 使用EDTA抗凝采血管抽取外周血5 ml，血样采集时间点为术前应用免疫诱导药物前(d0)、术后1 d、4 d、7 d、14 d、28 d、56 d、84 d。常规MEM-G/9抗体包被，洗涤，加入被检血清。设阴性和阳性对照。加入HRP标记的β2微球蛋白，显色。在490 nm波长下测定各反应孔A值，依据标准曲线查相对含量。

4 分组 根据肾移植后84 d时HLA-G5值分组，＞300 ng/ml为高表达组，＜100 ng/ml为低表达组，余为中表达组。根据HLA-G5不同表达水平组间分析DGF发生率的不同。

5 术后免疫抑制剂的应用 术后采用环孢素软胶囊/他克莫司胶囊(FK506) +吗替麦考酚酯胶囊+醋酸泼尼松片免疫诱导方案；术后免疫抑制药物浓度的早期控制与调整的目标浓度：他克莫司组，术后1个月他克莫司血药谷值浓度维持在10 ～ 15 ng/ml，术后2 ～ 3个月他克莫司血药谷值浓度维持在8 ～12 ng/ml；环孢素软胶囊组，术后1个月环孢素软胶囊血药谷值浓度维持在250 ～ 300 ng/ml，峰浓度1 000 ～ 1 200 ng/ml，术后2 ～ 3个月他克莫司血药谷值浓度维持在200 ～ 250 ng/ml，峰浓度800 ～1 000 ng/ml。

6 DGF临床表现与诊断 临床表现以肾移植术后少尿为特征，移植肾超声除外有血管及尿路并发症引起的血肌酐值在肾移植术后1周内不能降至正常(＞400 μmol/L)，并呈进行性上升，而且依赖于透析治疗过渡即可诊断。停止透析标准尿量≥2 000 ml/d，不透析状态下连续监测血肌酐值呈下降趋势。

7 统计学分析 采用SPSS11.0统计学软件处理，计量资料以-±s表示。组间样本采用均数t检验或方差分析，多组间的多个样本均数比较采用Kruskal-Wills检验，双变量相关关系分析采用Pearson χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 ELISA检测HLA-G5表达 肾移植后84 d HLA-G5＞300 ng/ml 9例(高表达组)，HLA-G5 100 ～ 300 ng/ml 24例(中表达组)，HLA-G5＜100 ng/ml 7例(低表达组)。其中高、低表达组的变化趋势见图1。

2 HLA-G不同表达组间DGF发生率 40例肾移植受者中，DGF 10例(25%)，其中9例HLA-G5高表达组无1例发生DGF，7例HLA-G5低表达组有4例发生DGF(57%)，24例HLA-G5中表达组有6例发生DGF(25%)，差异有统计学意义。见表1。

图 1 肾移植术后受者血清ELISA检测HLA-G5高低表达组表达趋势Fig. 1 ELISA showing HLA-G5 expression in serum of renal transplantation recipients

讨 论

DGF是同种异体肾移植术后的一种常见并发症，在除外有血管及尿路并发症引起的血肌酐值在肾移植术后1周内不能降至正常(＞400 μmol/L)，并呈进行性上升，而且依赖于透析治疗过渡，对移植肾的短期和长期存活有着重要的影响，DGF的发生率通常在10% ～ 50%，DGF的发生使肾移植受者的管理更加复杂，与亚临床排斥反应的诊断与鉴别诊断更加困难，使住院时间延长、住院费用增加和移植物存活率降低[7-9]。

影响移植肾功能恢复的因素较多，急性排斥反应、热缺血、冷缺血时间延长、高龄供者、脑死亡供者、尸体供肾者供肾前血流动力学的稳定性、受者的体质量指数、免疫抑制剂肾毒性均对DGF的发生有显著影响[10-13]。本实验结果显示在全部40例肾移植受者中，DGF 10例，发生率25%，在肾移植术后HLA-G5不同表达组间DGF的发生率与HLA-G5表达水平密切相关。Crispim等[14]在研究HLA-G表达与肾移植术后排斥反应关系时发现，未发生急性排斥反应组的HLA-G5表达明显高于发生排斥组(P＜0.000 1)。且相关研究发现HLA-G可能通过两方面机制影响移植病程，一方面HLA-G可同时抑制自然杀伤细胞和CD8+T细胞介导的细胞毒性，另一方面，HLA-G可能抑制了CD4+T细胞的增殖反应，这两方面机制显示HLA-G对排斥反应的作用主要是影响移植排斥反应的主要效应细胞[15-17]。既往研究表明急性排斥反应是临床最常见的排斥反应，是造成移植肾损伤的主要免疫因素，发生率20% ～ 40%。Moore和Qureshi等[18-19]研究发现急性排斥反应可导致DGF的发生以及延长DGF的恢复时间。我们研究结果发现HLA-G高表达组中急性排斥和DGF发生率为0，而HLA-G低表达组中急性排斥发生率为42.85%，DGF发生率为57.14%。急性排斥反应作为影响DGF发生的重要因素，HLA-G5可能通过减少急性排斥反应以减少DGF的发生。

表1 不同HLA-G5表达水平患者临床资料比较Tab. 1 Clinical data about patients with different HLA-G5 expression levels

1 Carosella ED， Rouas-Freiss N， Paul P，et al. HLA-G： a tolerance molecule from the major histocompatibility complex［J］. Immunol Today，1999 ，20（2）：60-62.

2 Blanco-García RM， López-Álvarez MR， Garrido IP， et al. Posttransplant increase in soluble human leukocyte antigen-G associated with non-severe cardiac allograft vasculopathy［J］. Human Immunology， 2013， 74（3）： 318-324.

3 Zarkhin V， Bezchinsky M， Li L， et al. Soluble human leukocyte antigen-G in pediatric renal transplantation［J］. Transplantation，2011， 92（1）： e1-e2.

4 Menier C， Rouas-Freiss N， Favier B， et al. Recent advances on the non-classical major histocompatibility complex class I HLA-G molecule［J］. Tissue Antigens，2010，75（3）：201-206.

5 González A， Rebmann V， LeMaoult J， et al. The immunosuppressive molecule HLA-G and its clinical implications［J］. Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences， 2012， 49（3）： 63-84.

6 Deschaseaux F， Delgado D， Pistoia V， et al. HLA-G in organ transplantation： towards clinical applications［J］. Cellular and Molecular Life Sciences ： CMLS， 2011， 68（3）： 397-404.

7 Jushinskis J， Trushkov S， Bicans J， et al. Risk factors for the development of delayed graft function in deceased donor renal transplants［J］. Transplantation Proceedings， 2009， 41（2）：746-748.

8 Sola R， Alarcón A， Jiménez C， et al. The influence of delayed graft function［J］. Nephrol Dial Transplant，2004，19（Suppl 3）：iii32-iii37.

9 Moore J， Tan K， Cockwell P，et al. Risk factors for acute rejection in renal transplant recipients experiencing delayed graft function［J］. Clin Transplant，2008，22（5）：634-638.

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11 Cooper JE， Wiseman AC. Acute kidney injury in kidney transplantation［J］.Curr Opin Nephrol Hypertens，2013，22（6）：698-703.

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13 Lauzurica R， Pastor MC， Bayés B， et al. Pretransplant inflammation： a risk factor for delayed graft function?［J］. Journal of Nephrology， 2008， 21（2）： 221-228.

14 Crispim JC， Duarte RA， Soares CP，et al. Human leukocyte antigen-G expression after kidney transplantation is associated with a reduced incidence of rejection［J］. Transpl Immunol，2008 ，18（4）：361-367.

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17 Carosella ED， Moreau P， Le Maoult J， et al. HLA-G molecules：from maternal-fetal tolerance to tissue acceptance［J］. Advances in Immunology， 2003， 81（81）： 199-252.

18 Moore J， Tan K， Cockwell P，et al. Risk factors for acute rejection in renal transplant recipients experiencing delayed graft function［J］. Clin Transplant，2008，22（5）：634-638.

19 Qureshi F， Rabb H， Kasiske BL. Silent acute rejection during prolonged delayed graft function reduces kidney allograft survival［J］. Transplantation， 2002， 74（10）： 1400-1404.

Effect of HLA-G5 on delayed graft function of kidneys

LI Cong-ran, XIAO Li, SHI Bing-yi, LI Zhou-li, WANG Shuang, ZHAN Sheng-li, CAI Ming
Organ Transplantation Center, Chinese PLA 309 Hospital, Beijing 100091, China

CAI Ming． Email: caiming309@gmail．com

ObjectiveTo study the effect of HLA-G5 expression levels on delayed graft function (DGF) of kidneys． Methods Expression levels of HLA-G5 in kidney transplantation recipients were measured by ELISA． Effects of HLA-G5 expression levels on DGF of kidneys were comparatively analyzed． Results DGF did not occur in any kidney transplantation recipient with a high HLA-G5 expression level． However, the incidence of DGF was 57% in those with a low HLA-G5 expression level (P＜0．05)． Conclusion DGF is closely related with HLA-G5 expression level in kidney transplantation recipients． HLA-G5 can reduce the incidence of DGF by decreasing the reject reaction．

human leukocyte antigen G5; kidney transplantation; delayed graft function

R 692

A

2095-5227(2014)01-0046-03

10.3969/j.issn.2095-5227.2014.01.015

时间：2013-11-19 09:17

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20131119.0917.001.html

2013-03-20

李聪然，男，主治医师。研究方向：器官移植与移植免疫。Email: licongran711@gmail.com

蔡明。Email: caiming309@gmail.com