方剂配伍增加中药方剂活性——一项来自毒理学的实验研究*

史鹏程，沈洪昇，胡人杰，姚 嫱

（1．天津市医药科学研究所肿瘤药物研发中心，天津 300020；2天津市人民医院，天津 300121）

方剂配伍增加中药方剂活性
——一项来自毒理学的实验研究*

史鹏程1，沈洪昇1，胡人杰1，姚 嫱2

（1．天津市医药科学研究所肿瘤药物研发中心，天津 300020；2天津市人民医院，天津 300121）

[目的]比较不同制备方法对清热解毒方水煎剂毒性的影响。[方法]清热解毒方中各味药材分别制备成不同待测样品：合煎样品、分煎样品及单味药给药样品，采用简化机率法测定各样品对小鼠灌胃给药的半数致死量（LD50），并比较测定结果。[结果]所测得合煎样品和分煎样品的LD50分别为（91．26±7．92）g/kg和（111．47±9．12）g/kg，与合煎样品比较，分煎样品的毒性显著降低（P＜0．05），且动物死亡时间及死前表现不同。单味药样品给药后多未出现明显毒性反应。[结论]与单味中药比较，复方配伍确能提高中药的生物活性。

清热解毒方；合煎；分煎；LD50

中药是中国传统文化的瑰宝，是中医学极其重要的传承，拥有广阔的市场前景和极大的社会价值。除少数中药单味使用外，方剂是中医治疗疾病的主要用药形式，也是祖先留给中华民族的重要宝藏[1]。在对方剂配伍的研究中发现许多方剂中具有明确生物活性的成分含量会随方剂中各药物的配伍变化而出现明显的变化，其药理活性也会随之发生变化[2]。中药成分复杂，复方药物合煎时，各化学成分间可能会相互影响、相互作用从而导致药物成分及溶解度、药效学、临床疗效等多方面的变化[3]。本实验室在对清热解毒方（白花蛇舌草、半枝莲、生地、蒲公英、鱼腥草）的毒理学研究中发现，由此五味中药组成方剂的水煎剂，动物灌胃给药显示出相当的毒性，即能够测定出半数致死量（LD50），这在以往的实验室实践中很少见到。为此，笔者对其做了进一步的探讨。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 KM小鼠，雌雄兼用，体质量19～21 g，购自中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所动物实验中心。生产许可证号：SCXK（军）2009—003。2级实验动物，屏障系统环境，饲喂普通颗粒饲料。

1.1.2 药材与处方 清热解毒方系临床自拟方，由白花蛇舌草（Oldenlandia diffusa Willd．Roxb．）、半枝莲（Scutellaria barbata mongdicum D．Don）、生地（Rehmannia glutinasa Libosch．）、蒲公英（Taraxacum Hand．－Mazz．）、鱼腥草（Thunb．）组成（比例为3∶3∶2∶1∶2），均为市售药材。药材由天津市医药科学研究所药物制剂中心朱永智鉴定，于天津市医药科学研究所肿瘤药物研发中心实验室保存。

1.2 实验方法

1.2.1 药物制备 分别制备3种给药样品，合煎样品：取5种中药饮片置煎煮容器内，加药材量8倍冷水浸泡过夜，文火煮沸30 min，过滤，滤渣加6倍量水继续煎煮，文火煮沸20 min，过滤。合并2次煎出液，于水浴上浓缩至适当浓度，得到合煎样品。分煎样品：分别取5种中药饮片置容器内，按上述方法单独进行煎煮，浓缩。将浓缩物按处方中各药材比例混合，并配制成与合煎药物相同浓度，得到分煎样品。单煎样品：各味药物单独煎制，各自浓缩后得到单煎样品[4]。

1.2.2 实验方法 采用简化机率法测定样品的LD50[5]，依据预实验结果设计给药剂量，k值取0．8，灌胃给药，给药后连续观察14 d，记录死亡情况。

1.3 数据处理 急性毒性实验采用简化机率法计算，组间比较，采用两独立样本t检验，P＞0．05为差异有显著性。

2 结果

2.1 合煎及分煎样品急性毒性实验 按1．2．所述方法制备样品并给药，给药后观察并记录动物死亡情况（表1），分别计算合煎样品及分煎样品LD50。两组的LD50分别为（91．26±7．92）、（111．47±9．12）g/kg，合煎样品的毒性明显高于分煎样品的毒性（P＜0．05）。

表1 合煎样品及分煎样品急性毒性实验结果Tab.1 The results of acute toxicity test of mixed-decoction and single-decoction

其中接受合煎样品死亡的动物，大多死亡于给药后2 h，个别动物死亡时间稍晚，但死亡时间不超过给药后4 h。其中132．00 g/kg剂量组（最高给药剂量组）动物给药后2 h内死亡10只（其中多在15 min内死亡），4 h后其余两只先后死亡。死亡迅速（15 min内）的动物死前均表现出跳跃、抽搐等神经兴奋症状。死亡延迟的动物（主要为给药剂量较低者）则主要表现出安静少动、反应迟钝、行动迟缓等神经功能抑制的表现。而且，表现为神经兴奋度增高的动物百分之百死亡，表现为神经兴奋度减低的动物部分死亡，部分可以存活，存活的动物给药后24～48 h恢复常态。接受分煎样品死亡的动物与接受合煎样品的动物相比较，动物死亡前仅表现出神经系统抑制症状，未见出现相应的神经系统兴奋性表现，且动物死亡速度亦较合煎样品给药组稍缓，142．47 g/kg剂量组给药后2 h内动物死亡10只（大多死于给药后30 min左右），4 h后死亡1只，另外一只则一直存活到实验结束。出现神经系统症状的小鼠部分死亡、部分可存活，且在给药后8 h可恢复常态。另外发现，91．18 g/kg剂量组中1只存活的雌性小鼠在接受给药后1．5 h出现一过性腹泻，其余动物未见异常表现。

2.2 单煎样品急性毒性实验 依据清热解毒方中5味药材在方剂中所占比例（3∶3∶2∶1∶2）进行拆分，分别按照单味药物在处方中所占比例剂量（LD50）给药。给药后观察并记录动物的死亡情况，各味药物给药剂量及动物死亡情况详见表2。表2显示给药后15 min，仅半枝莲组有1只动物死亡，除此之外，其余各给药组动物均全部存活，亦未见任何异常表现。

表2 单味药急性毒性实验结果Tab.2 The results of acute toxicity test of single-drugdecoction

3 讨论

方剂在中医药物治疗中具有极其重要的意义，根据组方内的每一味中药的性味归经及其功效，按照君、臣、佐、使的原则进行组方，其最终目的是发挥组方内每一味中药之间的协同和相加作用增加药效，或发挥拮抗作用降低毒性，即达到“增效减毒”的治疗目的。笔者在对几个治则不同的抗肿瘤方剂进行急性毒性的实验观察中发现，其中1个由性味均属无毒的中药组成的方剂，经水煎制备后产生了明显的致死性毒性（相比较其余方剂均未出现明显的毒性），这一现象确属少见，为此，笔者对其做了进一步的探讨。

该方剂系治则为清热解毒的临床自拟方，主要用于证属湿热聚毒的肿瘤患者，方中五味中药性味均属无毒[6-7]（单味药物煎剂给药的实验数据亦显示，按照组方剂量给药，除半枝莲出现1只动物死亡外，其余药物确实没有毒性反应）。但将5味中药组方后水煎样品（合煎样品）对小鼠灌胃给药显示出了致死性的毒性LD50=（91．26±7．92）g/kg。将5味药物单独煎制，将单独煎制的样品混匀后再次进行急性毒性实验，该分煎混合的给药样品（分煎样品），同样可以对小鼠产生致死性毒性，但是与前述煎剂相比较，毒性明显降低，LD50=（111．47±9．12）g/kg。经统计学分析，两次测定结果存在显著性差异（P＜0．05）。最后，按照分煎样品的LD50剂量与各味药物在方剂中所占比重，将5味药分别单独煎制的样品（单煎样品）分别给小鼠灌胃，观察其毒性反应，其结果显示，除了半枝莲组出现了1只动物死亡外，未见其它动物死亡，亦未见异常表现。为什么合煎样品、分煎样品、单煎样品表现出不同的毒性（或生物活性呢）？笔者推测其原因大致主要来自2个方面。其一，药物在煎制过程中其各自所含有的化合物之间产生了某些化学反应，产生了新的活性物质，或使原活性物质的煎出量发生了变化，最终导致其毒性发生变化。其二，药物活性之间的相加或协同作用。其中，合煎样品毒性增强的主要原因更可能归结于“化学反应”，由于在合煎过程中加热的条件下，可能对反应起到了催化的作用，从而使得合煎样品的“化学反应”比分煎样品更加充分，因此毒性更大。合煎样品给药后动物死亡前表现出的状态与分煎样品不同，呈现出神经兴奋性表现，分煎样品各组别则呈现出静卧少动等神经功能抑制的表现。这一现象显示出合煎样品及分煎样品中活性物质的含量有所差异或二者中所含的活性物质种类不尽相同。此外，以上实验结果也证明了该组方的合理性，即组方后增强了药物的活性，且合煎活性更强。中药成分复杂，复方中药在不同条件下会发生不同的反应，使得其各成分含量发生变化或生成新物质，从而影响其药效和毒性等。其他学者的研究[8-12]也从不同方面证明了这一现象。文章仅介绍了对清热解毒方毒性研究中发现的一些现象，对于其发生的原理和过程以及涉及到的具体物质现正在进一步研究和探讨中。

[1]年 莉,李慧平,王亚萍，等．对方剂配伍规律研究的几点认识[J]．天津中医药大学学报,2013,32(3):129-131．

[2]胡人杰．中药方剂配伍的实验研究[J]．中华中医药学刊,2009,27（1):117-119．

[3]邓轶渊,高文远,陈海霞，等．中药复方合煎与分煎的差异性研究进展[J]．中草药，2005,36（12):1909-1911．

[4]李仪奎．中药药理实验方法学[M]．第2版．上海:上海科学技术出版社,2006：119．

[5]徐叔云,卞如濂,陈 修．药理实验方法学[M]．北京:人民卫生出版社,1982:400-404．

[6]国家药典委员会．中华人民共和国药典2010年版（一部）[S]．北京:中国医药科技出版社，2010．

[7]宋立人,洪 恂,丁绪亮，等．现代中药学大辞典[S]．北京:人民卫生出版社,2001．

[8]周思思,马增春,梁乾德,等．人参附子不同比例配伍对小鼠急性毒性的影响[J]．天津中医药,2013,30（1):43-46．

[9]吴 娇,李 进,陈 涛,等．葛根—石膏药对不同配伍比例中有效成分含量变化研究[J]．天津中医药,2013,30(9):557-560．

[10]钟正灵,梁光义,张丽艳，等．当归六黄汤分煎与合煎样品中阿魏酸含量的比较[J]．时珍国医国药,2008,19(6):1291-1292．

[11]崔景朝,赵自明．中药配方颗粒研究进展（II）——中药单煎与合煎对比研究概况[J]．中国实验方剂学杂志,2011,17(4):240-245．

[12]李德顺,李亚清．定喘汤及其拆方治疗哮喘药理作用实验研究[J]．天津中医药大学学报,2003,22(1):16-18．

Prescription compatibility can raise activity of Chinese medicine-An experimental research from toxicology

SHI Peng-cheng1，SHEN Hong-sheng1，HU Ren-jie1*，YAO Qiang2
（1.Anti tumor drugs R&D Centre,Tianjin Institute of Medical and Pharmaceutical Science,Tianjin 300020,China;2.Tianjin People's Hospital,Tianjin 300121,China）

[Objective]To compare the effect of toxicity of Qingre Jiedu(clearing heat and detoxification)prescription in different preparation method．[Methods]The drugs contained in Qingre Jiedu prescription were prepared to different samples:single-decoction,mixeddecoction,and single-drug-decoction．The LD50of each sample after intragastric administration was determined in mice by simplified probit method,and the results were compared．[Results]The LD50of mixed-decoction and single-decoction samples were(91．26±7．92)g/kg and（111．47±9．12）g/kg respectively．Compared with the mixed-decoction samples,the toxicity of single-decoction samples was decreased significantly(P＜0．05)．Different death time and different behaviors before death were fund in animals．Single-drug-decoction samples showed no toxic reaction in most animals after administration．[Conclusion]Compared with single-decoction sample and single-drugdecoction sample,compatible prescription has a certain effect of raising the bioactivity of Chinese medicine．

Qingre Jiedu prescription;mixed-decoction;single-decoction;LD50

R223．11

A

1672-1519（2014）09-0567-03

2014-03-25）

（本文编辑：高 杉，张震之）

10．11656/j．issn．1672-1519．2014．09．17

天津市卫生局中医、中西医结合课题项目（07038）。作者简介：史鹏程（1986-），男，研究实习员，主要从事中药药理学和肿瘤药理学研究工作。

胡人杰，E-mail:renjiehu@163．com。