丹参酮ⅡA固体脂质纳米粒的制备及质量评价*

瞿继兰，刘志东，郭秀君，庞晓晨，韩真真

（1．天津中医药大学，现代中药发现与制剂技术教育部工程研究中心，天津 300193；2．天津中医药大学，天津市现代中药重点实验室，天津 300193）

丹参酮ⅡA固体脂质纳米粒的制备及质量评价*

瞿继兰，刘志东，郭秀君，庞晓晨，韩真真

（1．天津中医药大学，现代中药发现与制剂技术教育部工程研究中心，天津 300193；2．天津中医药大学，天津市现代中药重点实验室，天津 300193）

[目的]以山嵛酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯为载体材料制备丹参酮IIA固体脂质纳米粒(TA-SLN)并评价其质量。[方法]采用乳化固化法制备TA-SLN，以包封率为指标，通过单因素考察法对处方进行优化，激光粒径测定仪测定其粒径、电位，并用差示扫描量热仪（DSC）表征其性质。[结果]制备的TA-SLN平均粒径为(110±4)nm，Zeta电位为-34.4 mV，包封率为79.08%。DSC表明其理化性质稳定可靠。[结论]采用乳化固化法制备的TA-SLN粒径和包封率较适宜,理化性质稳定,为开发其新制剂奠定了实验基础。

丹参酮ⅡA；固体脂质纳米粒；质量评价

丹参为唇形科植物丹参（SalviamiltiorrhizaBunge）的干燥根及根茎，丹参酮ⅡA（TA）为丹参的主要有效成分之一[1]，具有改善心脑血管疾病，抗炎，保肝，且对多种肿瘤细胞具有杀伤、诱导分化、凋亡和抑制侵袭作用[2-6]。因TA为小分子脂溶性成分,半衰期短，普通制剂口服生物利用度低，直接影响其临床疗效。而作为新型载药系统的固体脂质纳米粒,可提高药物的生物利用度，增加被包裹药物的稳定性，且具有良好的靶向作用[1，7]。而山嵛酸甘油酯及单硬脂酸甘油脂均为在体内可降解，生物相容性好，毒性低的脂质载体，故为提高TA的生物利用度[8-11]，本实验采用乳化固化法制备了丹参酮ⅡA固体脂质纳米粒（TA-SLN），并对其粒径，电位，包封率进行了测定，并用差示扫描量热法（DSC）表征其性质。

1 仪器与试药

1.1 仪器 TK-20A型透皮扩散试验仪﹙上海锴凯科技贸易有限公司﹚；激光粒径测定仪（马尔文，英国）；AX205电子天平（Mettler Toledo，瑞士）；Milli－Q超纯水系统（Millipore，美国）；XS20S型电子天平（十万分之一，Mettler-Toledo，瑞士）。

1.2 试药 丹参酮IIA（南京泽朗医药，≥98%）；卵磷脂（Lipoid，美国）；单硬脂酸甘油酯（天津市北方天医化学试剂厂）；Myrj52（南京威尔化工有限公司）；山嵛酸甘油酯ATO888（Gattefosse，法国）；超滤离心管（Millipore，美国）；三氯甲烷，乙醇，甲醇（天津康科德科技有限公司）；三氯甲烷，乙醇均为分析纯，甲醇为色谱纯；

2 方法与结果

2.1 丹参酮IIA固体脂质纳米粒制备工艺 称取Myrj52 600 mg，加入超纯水10 mL，水浴75℃使溶解作为水相。另称取TA 1 mg、卵磷脂200 mg、单硬脂酸甘油酯70 mg及山嵛酸甘油酯30 mg溶于5 mL无水乙醇，加热使溶解构成有机相。将有机相缓慢注入600 r/min搅拌的水相中，继续搅拌至有机溶剂挥发完全至5 mL。经微孔滤膜过滤后，即得TASLN[10，12-13]。

2.2 粒径及Zeta电位测定 取适量最优处方制备的TA-SLN，用水稀释10倍，分别测定粒径和Zeta电位。粒径为（110±4）nm，Zeta电位为-34.4 mV，见图1。

2.3 包封率及载药量的测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：DIKMA ODS C1（8200 mm× 4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（90∶10）；检测波长：269 nm；流速：1 mL/min；柱温：30℃；进样量：20 μL。

2.3.2 标准曲线的制备 精密称取TA适量，甲醇依次精密稀释得到浓度为4.36，8.72，12.5，43.6，204 μg/mL的系列对照品溶液。进样20 μL分析，以峰面积Y=97.434X+ 117.87，r2=0.999 4。结果表明TA在4.36~204 μg/mL范围内线性关系良好。

2.3.3 回收率试验 按处方比例制备空白固体脂质纳米粒，各取500μL，精密加入204、43.6、4.36μg/mL的TA对照品溶液适量，用甲醇定容。过滤，分别取续滤液20 μL进样，根据测得的药物量和加入的药物量来计算回收率。结果平均回收率为（98．4±2．3）%（n＝3）。

图1 TA-SLN粒径（左）及zeta电位（右）分布图Fig.1 Size(left)and zeta potential(right)distribution of TA-SLN

2.3.4 精密度试验 取质量浓度为204，43.6，4.36 μg/mL的TA甲醇溶液，分别于1 d内测定5次，计算日内精密度；每天测定1次，连续测定5 d，计算日间精密度。结果日内RSD为0.29%，日间RSD为0.86%。2.3.5 载药量和包封率测定 运用离心超滤法分离纳米粒和游离药物。取TA-SLN 0.2 mL，甲醇10倍破乳，超声30 min，4 000 rpm离心20 min，取上清，过0.45 μm滤膜，HPLC法测定TA的含量，即为总药物含量W总。取TA-SLN0.5mL，超纯水稀释至2.5mL，置于超滤离心管内（30 K），4 000 min离心20 min后取下层溶液，HPLC测定TA含量，即为游离药物含量W游，包封率（EE%）=（1－W游/W总）×100%，载药量（LC%）＝W包封的纳米粒/W脂质材料×100%。式中W游：纳米粒中游离药物的质量；W总：纳米粒中总药物的质量；W包封的纳米粒：包在纳米粒中的TA质量；W脂质材料：脂质材料质量。此方法能很好的分离纳米粒和游离药物，且简单易行，重现性好，故采用超滤法测定TASLN的包封率。

2.4 处方筛选 以包封率、粒径及稳定性为综合考察指标，对脂质材料、表面活性剂的种类和用量及制备工艺进行筛选，最终确定以山嵛酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯为脂质材料，以Myrj52和卵磷脂复配作为表面活性剂（水相中Myrj52和有机相中卵磷脂的比例为3∶1），有机相和水相的体积比为1∶2，乳化温度为（75±2）℃，转速为600 r/min。在此条件下制备的TA-SLN粒径较小且包封率和稳定性高。

2.5 重复性试验 按最优处方制备3批TA-SLN包封率分别为77%、79%、82%，表明重复性较好。

2.6 TA-SLN的理化性质分析 DSC分析取TA及冻干的空白纳米粒，TA-SLN及TA与空白固体脂质纳米粒物理混合物（2∶1）5.6 mg，以10℃/min的速度从0℃到300℃程序升温，结果见图2。

图2 差示扫描量热仪（DSC）图谱Fig.2 DSC spectrum

本文采用乳化固化法，以山嵛酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯为载体材料制备的TA-SLN平均粒径为（110±4）nm，Zeta电位为－34.4 mV，包封率为79.08%。DSC表明其理化性质稳定可靠，为开发其新制剂提供了实验依据。

3 讨论

在处方筛选过程中，单独用山嵛酸甘油酯作为脂质材料发现药物的稳定性差，2 d后药物沉淀，之后通过查阅文献[14]以及摸索条件，最终确定以山嵛酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯共同为载体材料制备的固体脂质纳米粒稳定性以及粒径，电位，包封率均较好，故选用山嵛酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯为脂质载体。

在优化处方过程中，刚开始暂定Myrj52的量为200 mg，卵磷脂的量为90 mg，可是发现制剂浑浊，且搅拌时间较长，粒径大于250nm，单因素考察Myrj52和卵磷脂的量，两者的量均不能减少，只能增加，待Myrj52的量为600 mg，卵磷脂的量为200 mg时，固体脂质纳米粒的包封率和粒径较适宜，故选此为较优处方。

在DSC评价药物及载药的固体脂质纳米粒的结晶度时[11]，TA以43.73 J/g的能量在220℃出现尖锐的吸热峰，相对应于TA的熔点，表明其为结晶态；空白纳米粒与纳米粒出现钝峰，未出现尖锐的吸热峰，可能是由于药物被包裹，药物的形态发生变化，由结晶态变成了无定形态，失去其结晶态，而在物理混合物中又出现了TA尖锐的吸热峰，只不过以更低的能量26.12 J/g转化为低熔点204℃，这可能是由于纯物质与空白SLN相混合所引起的作用，特别是混合的冻干保护剂之间的作用，这导致了TA结晶部分以较低的熔化焓转换成它的无定形形式和多种无定形的混合物。

[1]杨雪鸥，王小云，开国银，等.丹参酮IIA抗肿瘤作用及其新剂型的研究进展[J].中成药，2011,33(8)：1389-1391.

[2] 罗彩莲.丹参的药理作用与临床应用[J].中国当代医药，2012,19 (12):11-12.

[3] 张伟伟，陆 茵.丹参抗肿瘤活性成分研究新进展[J].中国中药杂志，2010,35(3):389-392.

[4]王羽伦，李 康，侯连兵,等.丹参酮ⅡA的临床应用与配伍禁忌[J].医药导报，2011,30(12):1657-1659.

[5] 张 欣,张蒲蓉,陈 洁,等.丹参酮ⅡA对乳腺癌抑制作用的体内实验研究[J].四川大学学报（医学版），2010,41(1)：62-67.

[6]张萌涛，钱亦华，唐安琪.丹参酮ⅡA药理作用的研究进展[J].医学综述，2010，16(17)：2661-2664.

[7]姚 佳.固体脂质纳米粒技术及其应用[J].临床合理用药,2012,5 (11):149-150.

[8]安 芸，苗 方，尹祥敏，等.丹参酮ⅡA固体脂质纳米粒的制备[J].医学理论与实践，2009，22(7)：869-870.

[9]杜志永，刘建平，朱家壁，等.丹参酮IIA固体脂质纳米粒的制备及大鼠在体肠吸收研究[J].中国药学杂志，2004，39(8)：611-613.

[10]李佳玮，赵海南，郭秀君，等.盐酸小檗碱眼用固体脂质纳米粒的研究[J].天津中医药大学学报,2012,31(3)：157-159.

[11]Li SW,Guo XJ,Zhidong Liu ZD,et al.Preparation and evaluation of charged solid lipid nanoparticles of tetrandrine for ocular drug delivery system:pharmacokinetics,cytotoxicity and cellular uptake studies[J].Drug Development and Industrial Pharmacy,DOI:2013,79 (5):58.

[12]饶卫兵，郝存江，魏 丽，等.薄膜-超声分散法制备川芎嗪固体脂质纳米粒[J].天津中医药，2009,26(6):503-505.

[13]王婧雯,汤海峰,沈 敏，等.齐墩果酸固体脂质纳米粒的制备与质量评价[J].第四军医大学学报,2007,28(5):472-474.

[14]张先洲,陈晓清,潘细贵，等.青藤碱固体脂质纳米粒的制备[J].中国医院药学杂志，2008,28(24)：2081-2084.

Preparation and quality evaluation of tanshinonesⅡA solid lipid nanoparticles

QU Ji-lan,LIU Zhi-dong,GUO Xiu-jun,PANG Xiao-chen,HAN Zhen-zhen
（1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Engineering Research Center of Modern Chinese Medicine Discovery and Preparation Technique,Ministry of Education,Tianjin,300193,China;2.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin Modern Chinese Medicine Key Laboratory,Tianjin 300193,China）

[Objective]To prepare tanshinonesⅡA-loaded solid lipid nanoparticles with docosanoic acid glyceride and glyceryl monostearate as its lipid matrix and investigate its quality.[Methods]TanshinonesⅡA-loaded solid lipid nanoparticles were prepared by emulsion evaporation-solidification.With encapsulation efficiency as index,through the single factor the formulation was optimized,using laser particle size analyzer its particle size was measured,Using potential and use DSC its properties was characterized.[Results]The obtained solid lipid nanoparticles had an average size of(110±4)nm,zeta potential was-38.5 mV and the entrapment efficiency was 79.08%.DSC showed that its physical and chemical properties were stable and reliable.[Conclusion]The solid lipid nanoparticles prepared by the emulsion evaporation-solidification have an appropriate size,the encapsulation efficiency and stable physical and chemical properties have provided an experimental foundation for the development of the new formulation.

TanshinonesⅡA;solid lipid nanoparticles;quality evaluation

R285.5

A

1672-1519（2014）09-0564-03

2014-04-30）

（本文编辑：高 杉，张震之）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.09.16

教育部新世纪优秀人才支持计划（NCET-12-1068）。作者简介：瞿继兰（1988-），女，硕士研究生，主要从事缓控释制剂及靶向制剂的研究

刘志东，E-mail:lonerliuzd@163.com。