Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1在甲状腺微小乳头状癌中的表达及临床意义

周 元 蒋红钢 陆伯豪 陈治横 陆 宁 李 进

（嘉兴市第一医院，浙江嘉兴 314000）

Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1在甲状腺微小乳头状癌中的表达及临床意义

周 元 蒋红钢 陆伯豪 陈治横 陆 宁 李 进

（嘉兴市第一医院，浙江嘉兴 314000）

目的探讨甲状腺微小乳头状癌中Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测80例甲状腺微小乳头状癌及40例甲状腺良性病变伴乳头状增生中Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1的表达情况。结果甲状腺微小乳头状癌中Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1表达阳性率分别为42.5%、98.8%、95%、71.3%；甲状腺良性病变伴乳头状增生中Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1表达阳性率分别为15%、37.5%、25%、15%。两组间表达差异有统计学意义（P＜0.01）。结论Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1在甲状腺微小乳头状癌中的表达显著高于良性病变，是诊断甲状腺微小乳头状癌的重要标志物，其检测可提高甲状腺微小乳头状癌诊断的准确性。

甲状腺肿瘤；Ki67；CK19；Galectin－3；HBME－1

甲状腺乳头状癌是最常见的甲状腺恶性肿瘤，其中肿瘤长径小于1cm的为甲状腺微小乳头状癌。近年来甲状腺乳头状癌的发病率显著上升，尤以微小乳头状癌上升明显［1］。诊断甲状腺乳头状癌一般情况下不难，但一些肿块较小的甲状腺良性病变伴乳头状增生时与乳头状癌，特别是微小乳头状癌鉴别困难，容易发生误诊或漏诊。本文采用免疫组化方法检测甲状腺微小乳头状癌及甲状腺良性病变伴乳头状增生中Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1的表达情况，以探讨其在诊断中的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集本院2011年10月～2013年6月甲状腺微小乳头状癌手术标本共80例，其中男13例，女67例，年龄26～76岁，平均（47.6±11.9）岁，所有病例均行患侧甲状腺腺叶切除加Ⅵ区淋巴结清扫术。同时收集甲状腺良性病变伴乳头状增生手术标本40例用于对照，其中结节性甲状腺肿21例，甲状腺腺瘤10例，桥本氏甲状腺炎9例，其中男8例，女32例，年龄19～78岁，平均（51.3± 11.8）岁。所有标本均经过组织病理学检查确诊，按WHO肿瘤分类中的诊断标准，依据典型的甲状腺微小乳头状癌病理诊断［2］：（1）不同程度的间质纤维化，瘤体内或瘤体旁间质明显纤维化；（2）突向滤泡腔及囊腔的乳头状突起，乳头中心为纤维血管束，可见同心圆结构的砂粒体；（3）肿瘤细胞核增大，轮廓不规则，出现毛玻璃核、核沟及核内包涵体。

1.2 方法 标本经10%中性福尔马林溶液固定，常规组织处理，石蜡包埋连续切片，HE染色，切片厚度4μm。采用免疫组化EnVision法，按试剂盒说明书进行操作：石蜡切片脱蜡、水化后用磷酸盐缓冲液冲洗3次，每次3分钟；滴加3%过氧化氢，室温下放置10分钟，以阻断内源性过氧化氢酶活性；再用磷酸盐缓冲液冲洗3次，每次3分钟；加入一抗，室温下放置60分钟，再用磷酸盐缓冲液冲洗3次，每次3分钟；然后滴加检测试剂，室温下放置30分钟；再用磷酸盐缓冲液冲洗3次，每次3分钟；然后滴加二氨基联苯胺，显色10分钟；最后苏木精复染，常规脱水，透明，封固。用已知的阳性片作阳性对照，以磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照。结果判定：Ki67以细胞核呈现棕黄色颗粒为阳性，CK19、Galectin－3和HBME－1以细胞质内和（或）细胞膜上出现棕黄色颗粒并且染色强度明显高于背景的非特异性着色者为阳性。根据Beesley分级方法，按阳性细胞所占百分比并参考着色强度分级如下，无阳性细胞或浅黄色为阴性“－”；阳性细胞数＜25%，颗粒棕黄色，为弱阳性“＋”；≥25%且＜50%，颗粒棕黄色，为中度阳性“＋＋”；≥50%，颗粒深棕色，为强阳性“＋＋＋”。所有切片染色结果均采用双人双盲法进行病理证实、组织分型及计数，两人分值不同取平均值。

1.3 统计学处理 采用SPSS17.0统计软件处理，采用χ2检验进行有关分析。

2 结 果

Ki67在甲状腺微小乳头状癌和甲状腺良性病变伴乳头状增生中阳性率分别为42.5%和15%，差异有统计学意义（χ2＝9.075，P＝0.003）。CK19在甲状腺微小乳头状癌和甲状腺良性病变伴乳头状增生中阳性率分别为98.8%和37.5%，差异有统计学意义（χ2＝58.944，P＝0.000）。Galectin－3在甲状腺微小乳头状癌和甲状腺良性病变伴乳头状增生中阳性率分别为95%、25%，差异有统计学意义（χ2＝64.350，P＝0.000）。HBME－1在甲状腺微小乳头状癌和甲状腺良性病变伴乳头状增生中阳性率分别为71.3%、15%，差异有统计学意义（χ2＝33.835，P＝0.000）。见表1，见第457页彩图1～2。

表1 两组Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1的表达情况比较

3 讨 论

甲状腺微小乳头状癌是乳头状癌的亚型，有年轻化的发展趋势。男女发病比例报道不一，大多在1∶3左右，有的高达1∶9，本组男女之比约为1∶5，与多数文献报道一致。好发年龄一般在40～50岁，本组平均年龄（47.6±11.9）岁。肿瘤体积一般较小，本组最小的肿瘤长径仅0.1cm。因为体积小，容易漏诊，通常是由于其他原因切除甲状腺或尸检中的偶然发现。这提示对于在看似良性甲状腺病变的标本，特别是年轻女性的标本，取材中要仔细检查，常规行书页状切开，多处取材，尤其应注意钙化结节，以免漏诊。尽管甲状腺微小乳头状癌可以出现乳头状癌的特征，如毛玻璃状核、核内假包涵体和核沟等，但具备这些特征的典型甲状腺微小乳头状癌并不多见。而在一些甲状腺良性病变伴乳头状增生病变中，虽然没有上述乳头状癌的典型特征，但当出现细胞核增大、淡染等不典型性改变，或乳头状结构不明显，细胞核呈空泡状、出现核沟等情况下，就难与乳头状癌鉴别。因此需要一些辅助方法来进一步明确诊断，免疫组化法对甲状腺微小乳头状癌的鉴别诊断有很大帮助。作者采用免疫组化方法检测Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1的表达情况，探讨其对诊断的临床价值。

Ki67即细胞核相关抗原，是一种与细胞增殖周期有关，参与DNA合成的蛋白质。在细胞周期的G1开始出现，在S期和G2期逐渐升高，M期达到高峰，在细胞分裂晚期很快消失。在G0期中无表达，目前，Ki67已成为检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标，其阳性表达者预示预后较差［3］。本文中Ki67在甲状腺微小乳头状癌中的阳性率为42.5%，在甲状腺良性病变中的阳性率为15%，差异有统计学意义，与Aiad等［4］的结论基本一致。

CK19存在于各种上皮和正常上皮来源的肿瘤中，是一种低分子量的细胞角蛋白。研究表明［5］CK19在甲状腺乳头状癌中呈阳性表达，正常甲状腺不表达或局灶弱阳性表达，在良性乳头状增生性病变中部分病例有局部弱至中度阳性表达。Laco等［6］研究提示，22例甲状腺微小乳头状癌中有13例CK19阳性，阳性率为59%。本文中CK19在甲状腺微小乳头状癌中的阳性率为98.8%，在良性病变中的阳性率为37.5%，差异有统计学意义。因而，CK19是诊断甲状腺微小乳头状癌的一个非常有用的标志物。

Calectin－3是凝集素蛋白家族的一员，是一种与β－半乳糖苷具有高度亲和力的糖类结合蛋白，具有抗凋亡的性质。Galectin－3具有多种生物学特性，包括细胞生长调控、细胞黏附、炎性介质反应、细胞凋亡等。被认为是区分甲状腺良恶性肿瘤最有价值的分子标志物之一。Calectin－3在甲状腺乳头状癌中高度表达，而在结节性甲状腺肿和腺瘤中不表达或较弱表达。Laco等［6］研究显示，22例甲状腺微小乳头状癌中19例Galectin－3阳性。本文结果显示，80例甲状腺微小乳头状癌中76例呈阳性表达。两组研究结果基本一致。提示Galectin－3在鉴别甲状腺良、恶性病变中具有较好的参考价值。

HBME－1是间皮细胞微绒毛表面特异性标志物，是间皮瘤相关抗体，在肿瘤血管的形成、生长及转移等方面发挥重要作用。早期学者发现它也在滤泡起源的甲状腺癌中表达，尤其是甲状腺乳头状癌。Paunovic等［7］发现HBME－1在乳头状癌中呈高表达，而在良性病变中为阴性或部分表达。本文中HBME－1在甲状腺微小乳头状癌中的阳性率为71.3%，而在良性病变中为15%，在区别良恶性病变时有一定价值。

综上所述，当单凭形态学诊断甲状腺微小乳头状癌有一定困难时，应用Ki67、CK19、Galectin－3及HBME－1检测对鉴别甲状腺良恶性病变具有较高价值，可以在实践中采用，提高甲状腺微小乳头状癌诊断的正确性。

［1］Hughes D T，Haymart M R，Miller B S，et al．The most commonly occurring papillary thyroid cancer in the United States is now a microcarcinoma in a patient older than 45 years．Thyroid，2011，21（3）：231

［2］陈勇，叶人裴，龙汉安，等．37例甲状腺乳头状微小癌临床病理特点分析．泸州医学院学报，2014，37（3）：280

［3］Klintman M，Bendahl P O，Grabau D，et al．The prognostic value of Ki67 is dependent on estrogen receptor status and histological grade in premenopausal patients with node－negative breast cancer．ModPathol，2010，23（2）：251

［4］Aiad H A，Bashandy M A，Abdou A G，et al．Significance of AgNORs and ki67 proliferative markers in differential diagnosis of thyroid lesions．Pthol Oncol Res，2013，19（2）：167

［5］Saleh H A，Jin B，Barnwell J，et al．Utility of immunohistochemical markers in differentiating benign from malignant follicular－derived thyroid nodules．Diagn Pathol，2010，26（5）：9

［6］Laco J，Ryska A，cap J，et al．Expression of galectin－3，cytokeratinl9，neural cell adhesion molecule and E－cadherin in certain variants of papillary thyroid carcinoma．Cesk Patol，2008，44（4）：103

［7］Paunovic I，Isic T，Havelka M，et al．Combined immunohistochemistry for thyroid peroxidase，galectin－3，CK19 and HBME－1 in differential diagnosis of thyroid tumors．APMIS ，2012，120（5）：368