高尔基体蛋白73定量测定对肝细胞癌的诊断价值

张红娟，宁树成，王 菁，张 洁，张雪丽

(1河北联合大学，河北唐山063000;2秦皇岛市第一医院)

肝癌是一种恶性程度高、进展快、预后差的恶性肿瘤，我国因肝癌死亡人数约占全球肝癌死亡人数的45% ～50%［1］，其中肝细胞癌(HCC)占90%以上。高尔基体蛋白73(GP73)是新发现的一种HCC相关蛋白，其主要分布于胆管上皮细胞中，健康肝脏细胞中含量很低，而在患有病毒性或非病毒性肝脏疾病患者的肝细胞内表达显著上调［2］。研究表明，GP73对诊断肝癌的敏感度和特异度均较AFP高。本研究通过检测HCC、良性肝病、其他恶性肿瘤及健康人群的血清GP73水平，探讨其在HCC诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2012年8月～2013年12月秦皇岛市第一人民医院收治的肝病患者273例，其中HCC患者145例(HCC组)，男87例、女58例，年龄31～78(50±14.5)岁，均符合《原发性肝癌诊疗规范(2011年版)》中的诊断标准;肝炎及肝硬化患者128例(良性肝病组)，男77例、女51例，年龄31～70(48±13.5)岁。另择同期住院的其他消化系统恶性肿瘤患者87例(肿瘤对照组)，男52例、女35例，年龄34～83(57±12.3)岁，其中结直肠癌35例、食管癌13例、胃癌35例、壶腹周围癌4例;同期健康体检者99例(健康对照组)，男59例、女40例，年龄24～78(53±9.8)岁。各组性别、年龄具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 采集受试者空腹静脉血5 mL，置于未加抗凝剂的试管中，室温静置1 h后，离心分离血清。使用罗氏E170电化学发光分析系统及配套试剂检测血清甲胎蛋白(AFP)，双抗体夹心ELISA法定量检测GP73。对HCC组行手术切除治疗，于术后2周后进行复查，比较治疗前后血清GP73的变化。

1.2.2 统计学方法 应用GraphPad Prism5.0软件进行统计分析，血清GP73用中位数表示，组间比较采用t检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清GP73检测结果 HCC组、良性肝病组、肿瘤对照组、健康对照组的血清GP73平均浓度分别为201、66、58、38 ng/mL，HCC 组显著高于其他三组(P 均 ＜0.01)。

2.2 GP73与AFP检测对HCC诊断的敏感度、特异度比较 AFP、GP73分别以400、150 ng/mL作为诊断临界值，比较二者在HCC患者与非HCC患者中的表达。145例HCC患者中，GP73阳性53例，AFP阳性17例，GP73与AFP均阳性50例，AFP阳性或GP73阳性120例，占82.8%;AFP阴性78例中，50例GP73阳性，占64.1%。非HCC患者314例中，GP73阴性268例，AFP阴性252例，GP73与AFP均阴性246例，占78.3%。血清GP73诊断HCC的敏感性和特异性分别为71.0%、85.4%，AFP分别为46.2%和80.3%;二者联合检测的敏感性和特异性分别为82.8%和78.3%。

2.3 HCC患者治疗前后血清GP73比较 HCC患者治疗前后血清GP73平均浓度分别为219、78 ng/mL，治疗前后比较，P＜0.05。其中24例患者因复发再次入院，入院时的血清GP73平均浓度为156 ng/mL，与其术后2周的GP73平均浓度93 ng/mL比较，P ＜0.01。

3 讨论

AFP作为早期肝癌的监测指标，其敏感度为40% ～65%，特异度为76% ～96%，近1/3的肝癌患者AFP为阴性［3］。本研究中AFP诊断HCC的阳性率不足50%，与文献报道相符。而急性病毒性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化活动期以及睾丸癌或卵巢癌等非肝癌疾病也常出现AFP升高［4］，因此AFP作为肝癌早期诊断的手段尚不够理想，2010版美国肝病研究学会指南已不再将AFP作为筛查指标［5］。

GP73是一种高尔基Ⅱ型跨膜蛋白，主要表达于正常组织上皮细胞中，肝实质细胞表达较少或不表达。Marrero等［6］报道，健康对照者、非HCC肝硬化患者和HCC患者血清中均有GP73表达，肝硬化和HCC患者较无肝病对照者明显升高;在慢性肝病患者中，HCC患者的血清GP73水平显著高于肝硬化患者。Kladney等［7，8］报道，GP73 在急性肝炎和进行性肝硬化患者中呈高表达，认为GP73与肝脏疾病有重要关系。其在急性及慢性肝病中的表达模式提示有两种调节机制存在，一种在急性肝细胞损伤时触发，另一种在慢性组织改变及纤维化发生时触发。Block等［9］应用糖蛋白组学技术发现，GP73是一个岩藻糖基化蛋白，而岩藻糖基化与HCC的发生密切相关，通过构建土拨鼠肝癌模型显示，GP73与肝癌密切相关，在肝癌土拨鼠血清中，GP73显著高于非肝癌土拨鼠。

国内外学者对GP73的临床应用价值进行了大量研究。Witjes等［10］的一项荟萃研究显示，GP73是一种新的肝癌血清标志物，其价值优于AFP，可用于肝癌诊断和筛查。汤绍辉等［11］的荟萃分析纳入HCC患者2 075例，非HCC患者3 204例，结果显示GP73和AFP的汇总敏感度分别为78%和55%，汇总特异度分别为84%和80%，表明血清GP73对HCC有较高的诊断价值，可作为替代血清AFP的重要参考指标。

本研究显示，HCC组的血清GP73含量明显高于肝良性病变组、肿瘤对照组和健康对照组，表明GP73能够很好地鉴别HCC。单项检测血清GP73的敏感性和特异性分别为71.0%和85.4%，均优于AFP，提示其可作为肝癌诊断的独立指标之一。同时GP73和AFP联合检测的敏感性和特异性分别为82.8%和78.3%，进一步提高了HCC的诊断效能。此外，HCC治疗前的血清GP73水平显著高于治疗后，肝癌复发患者的血清GP73水平明显升高，提示GP73可作为辅助监测肝癌疗效和复发的指标。

综上所述，GP73对HCC有较好的诊断性能，有望成为HCC诊断的有效标志物。鉴于目前AFP仍然作为一项应用最广泛的肿瘤标志物，难以在短时间内完全替代，GP73可成为AFP的有效补充，二者联合检测可提高HCC的早期诊断率。

［1］Jemal A，Siegel R，Ward E，et al.Cancer statistics［J］.CA cancer J Clin，2008，58(2):71-96.

［2］Kladney RD，Cui X，Bulla GA，et al.Expression of GP73，a resident Golgi membrane protein，in viral and nonviral liver disease［J］.Hepatology，2002，35(6):1431-1440.

［3］徐海峰，杨华瑜，张宏冰，等.改变肝癌早期诊断和治疗现状的心肝癌血清标志物［J］.基础医学与临床，2008，28(1):104-108.

［4］Yoshida S，Kurokohchi K，Anma K，et al.Clinical significance of lens culinaris agglutinin reactive fraction of serum alpha fetoprotein in patients with hepatocellular carcinoma［J］.Int J Oncol，2002，20(2):305-309.

［5］中华人民共和国卫生部.原发性肝癌诊疗规范(2011版)［J］.临床肝胆病杂志，2011，27(11):1141-1159.

［6］Marrero JA，Romano PR，Nikolaeva O，et al.GP73，a resident Golgi glycoprotein，is a novel serum marker for hepatocellular carcinoma［J］.J Hepatol，2005，43(6):1007-1012.

［7］Kladney RD，Bulla GA，Guo L，et al.GP73，a novel Golgi-localized protein upregulated by viral infection［J］.Gene，2000，249(1-2):53-65.

［8］Iftikhar R，Kladney RD，Havlioglu N，et al.Disease-and cellspecific expression of GP73 in human liver disease［J］.Am J Gastroenterol，2004，99(6):1087-1095.

［9］Block TM，Comunale MA，Lowman M，et al.Use of targeted glycoproteomics to identify serum glycoproteins that correlated with liver cancer in woodchucks and humans［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2005，102(3):779-784.

［10］Witjes C，Aalten S，Steyerberg E，et al.Recently introduced biomarkers for screening of hepatocellular carcinoma:a systematic review and meta-analysis［J］.Hepatol Int，2013，7(1):59-64.

［11］汤绍辉，吴胜兰，林正昌，等.血清GP73与AFP对肝细胞癌诊断价值的Meta分析［J］.解放军医学杂志，2013，38(9):747-752.