食管鳞状细胞癌中VEGF 、P53及Ki-67的表达及临床意义

刘汉忠 杨继洲 肖 兰 何慧华 王 岚

本研究采用免疫组化SP法对43例食管鳞状细胞癌和20例食管癌旁组织中VEGF、P53和Ki-67的表达进行检测，现探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2010年1月-2012年12月活检食管鳞状细胞癌资料完整标本43例，其中男性34例，女性9例；患者年龄30～78岁，平均62.5岁。肿瘤分为Ⅰ级(高分化)5例，Ⅱ级(中分化)18例，Ⅲ级(低分化)20例。对照组为食管癌旁组织20例，其中男性15例，女性5例。所有标本均用10%中性福尔马林固定，常规脱水、石蜡包埋，切片厚度为4 μm，行HE染色，光镜诊断。

1.2 免疫组织化学染色方法

采用SP法。VEGF、P53和Ki-67工作稀释度为1∶100，均采用0.01 mol/L枸橼酸钠缓冲液(pH6.0)高压锅热修复方法进行抗原修复，过氧化氢(H2O2)封闭后滴加一抗，4 ℃过夜，滴加二抗37 ℃孵育30 min，最后DAB显色、苏木精复染、封片。用已知阳性标本作为阳性对照，PBS代替一抗为空白对照。SP试剂盒及VEGF、P53和Ki-67单克隆抗体均购自福州迈新生物技术有限公司。

1.3 结果判定

VEGF以胞质呈棕黄色为阳性。P53蛋白及Ki-67蛋白均定位于细胞核。阳性染色指显微镜下观察细胞内具有清晰可见定位准确的黄色、棕黄色或棕褐色颗粒，而且背景清晰。由3位病理医生对免疫组化染色进行评价，在400倍视野下任意选择5个视野，每个视野计数200个细胞，共计数1 000个细胞，计算每张切片阳性细胞百分率。按阳性细胞占肿瘤细胞的比例，分为阴性(-)、弱阳性(+)，中度阳性(++)、弱阳性(+++)。

1.4 统计学方法

采用SPSS 13.0统计软件，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 VEGF、P53及Ki-67在食管组织中的表达

VEGF、P53及Ki-67在食管癌中的阳性表达率分别为：90.7%(39/43)、88.4%(38/43)、100.0%(43/43)，VEGF、P53及Ki-67在癌旁组织中的表达阳性率分别为：20.0%(4/20)、15.0%(3/20)、5.0%(1/20)，两者比较差异均有显著性(χ2=31.49、32.34、58.49，P均<0.01)。

2.2 VEGF、P53及Ki-67表达强弱与癌组织分化程度的关系

VEGF在食管癌中的阳性表达中(+)3例、(++)17例、(+++)19例，经统计学分析发现VEGF表达强弱与癌组织分化程度(γ=0.945，P<0.05)呈正相关。P53在食管癌中的阳性表达中(+)4例、(++)13例、(+++)21例，经统计学分析发现P53表达强弱与癌组织分化程度(γ=0.963，P<0.05)呈正相关。Ki-67在食管癌中的阳性表达率为100.0%，其中(+)5例、(++)16例、(+++)22例，经统计学分析发现Ki-67 表达强弱与癌组织分化程度(γ=0.986，P<0.01)呈正相关。

3 讨论

血管内皮细胞生长因子(VEGF)是目前已知的活性最强、专属性最高的血管生成因子，在肿瘤血管形成中处于核心地位，其表达与多种肿瘤的临床病理特征和预后密切相关。本研究观察组VEGF阳性表达率显著高于对照组，且癌组织的分化程度越低，其表达强度越高，提示VEGF在食管鳞状细胞癌的血管生成中起重要作用。

肿瘤抑制基因P53 与人类恶性肿瘤相关性很高。已经发现[1]，相当高比例的食管癌P53突变和(或)过表达，从而认为在食管癌的发生过程中，P53异常是一种常见的遗传事件，同时也是因为P53异常出现在早期和癌前病变。本研究发现在癌旁组织中有3例有表达，细胞存在异型性，表达组织与癌组织接近，因此P53检测可以发现早期癌和癌前病变。

Ki-67是细胞核内与细胞分裂及增殖相关的核蛋白，其表达与细胞增殖状态高度相关，是反映细胞增殖活性的敏感指标，细胞增殖是肿瘤生长的前提,肿瘤细胞增生是否活跃直接影响着临床治疗与预后[2]。本研究食管癌中Ki-67阳性表达率为100.0%，明显高于癌旁组织，而且癌组织分化程度越低，其表达强度越高，提示Ki-67蛋白标记可作为判断食管鳞状细胞癌的分化程度依据，并为评估其预后提供参考。

有学者研究发现P53蛋白和Ki-67在结直肠癌中的表达明显升高,可作为判断结直肠癌恶性程度及预后的重要参考指标[3]，脑胶质瘤中Ki-67及P53的阳性表达率与其恶性度相关,均可作为判断胶质瘤恶性程度的指标[4]。本研究发现P53和Ki-67的阳性表达与食管鳞状细胞癌的分化程度相关，可作为判断食管癌恶性程度的指标，并为评估其预后提供参考。关于不同病理分化程度的食管鳞状细胞癌组织中VEGF、P53和Ki-67阳性表达率有无相关性，由于本研究组组病例过少，未进行统计学分析，有待积累病例进一步探讨。总之，VEGF、P53、Ki-67在食管鳞状细胞癌的发生、发展及转移中扮演着重要角色。

[1] Rosai J著，回允中主译.ROSAI&ACKERMAN外科病理学〔M〕.第9版.北京：北京大学医学出版社，2006：627.

[2] 常 英，刘贵生，张 军,等.组织芯片研究胃食管黏膜病变中Ki-67和C-erbB-2的表达及意义〔J〕.世界华人消化杂志，2008，15(11)：1184-1189.

[3] 叶 斌,王西川,雷 蕾，等.p53和Ki67在结直肠癌中的表达及其临床意义〔J〕.实用癌症杂志，2013，28(1)：42-44.

[4] 周开甲，张 鸣，刘伯伟，等.Ki-67、p53在脑胶质瘤中的表达及意义〔J〕.实用癌症杂志，2012，27(6)：572-573.