Cx43在骨肉瘤组织中的表达及临床意义

高 飞，李 伟,于明克

(中国人民解放军第251医院 1急诊科， 2病理科，河北 张家口 075000)

细胞的存活与功能的发挥是靠细胞与细胞之间的间隙连接来实现的，这种连接通过神经、激素等信号构成正负反馈系统，进而有序精确地调控生长发育、新陈代谢等活动。资料显示，多种恶性肿瘤组织中，细胞间隙连接蛋白43(connexin 43，Cx43)普遍存在低表达或不表达，如胰腺癌、肺癌、胃癌等[1-3]。但Cx43在骨肉瘤组织中的相关研究未见报道，本研究采用免疫组织化学(EnVisionTM)法检测骨肉瘤组织中Cx43表达的情况，并探讨其发病机制及对生物学行为的影响。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择中国人民解放军第251医院2007年2月至2013年2月收治的骨肉瘤患者70例，并经临床病理诊断为骨肉瘤，且仅收集发生在长骨的骨肉瘤标本，因为发生在其他部位(如颌骨、骨盆、脊柱等)的肿瘤无法完全切除会影响实验的合理性。骨肉瘤患者中男38例、女32例，年龄10～39(20±2)岁，≥20岁者14例，<20岁者56例；肿瘤直径≥7 cm者36例，<7 cm者34例；骨肉瘤组织学类型[4]：成骨型、成软骨型、成纤维型，分别为55例、10例和5例。分期根据国际分期标准执行：Ⅰ期与Ⅱ期共34例，Ⅲ期与Ⅳ期共36例。肺组织转移者28例，无远处转移者42例。癌细胞增值指数(Ki-67)≥75%者51例，<75%者19例。所有患者均为首次住院治疗。同时随机取距骨肉瘤0.3 cm处组织30例作为对照组。

1.2主要试剂与方法 Cx43即用型兔抗人单克隆抗体及其配套试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。免疫组织化学采用EnVisionTM两步法：石蜡标本制成4 μm切片,60 ℃烤片1 h；常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化；微波-枸橼酸抗原修复；3% H2O2作用10 min灭活内源性过氧化物酶；非免疫动物血清封闭液室温孵育10 min，阻断非特异性着色；滴加Cx43抗体，室温下孵育2 h； 室温下二抗聚合物增强剂孵育30 min；室温下三抗酶标抗鼠/兔聚合物孵育30 min；DAB显色；苏木素复染，二甲苯透明，中性树胶封片。阳性对照为已知阳性切片，阴性对照用PBS代替一抗。

1.3结果判断 Cx43以细胞质或细胞膜出现棕黄色、棕褐色或淡黄色染色为阳性。根据在5个以上高倍镜视野下，阳性细胞所占比例计数：1分为5%～25%，2分为26%～50%，3分为51%～75%，4分为>75%。染色强度：淡黄色为1分，黄或深黄色为2分，褐或棕褐色为3分。两者计分相乘>1分为阳性[5]。

1.4统计学方法 应用SPSS 17.0软件进行统计分析，计数资料用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1Cx43在骨肉瘤、骨肉瘤旁组织中的表达 Cx43在骨肉瘤细胞着色以胞质为主，骨肉瘤旁细胞着色以胞膜为主；骨肉瘤组织和骨肉瘤旁组织的阳性率比较差异有统计学意义(χ2=47.75，P<0.01)(表1)。

表1 Cx43在骨肉瘤、骨肉瘤旁组织中表达的比较

2.2Cx43的表达与骨肉瘤临床病理因素的关系 在骨肉瘤临床病理因素中，Cx43的表达与肿瘤大小、临床分期、肺转移、增殖指数(Ki-67)有关，差异均有统计学意义(P<0.05)，但与年龄、性别、组织学类型无关，差异无统计学意义(P>0.05)(表2)。

表2 Cx43的表达与骨肉瘤临床病理因素的关系

3 讨 论

细胞之间的连接包括紧密连接、桥粒、间隙连接，而间隙连接由间隙连接蛋白所构成[6]，并通过细胞间隙连接通讯进行细胞间的信息和能量物质交换，进而调控细胞的增殖和分化、内环境稳定、新陈代谢等生理过程。Cx43是Cx家族中重要的间隙连接蛋白，因其编码相对分子质量为43×103的单肽而得名。资料显示，Cx43在心肌组织、卵巢颗粒细胞、上皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞等多种组织表达[7]，而在恶性肿瘤组织中呈现表达缺失或低表达[2-3,7-8]。本研究结果显示，Cx43在骨肉瘤组织中的表达远远低于骨肉瘤旁组织，可见Cx43的低表达参与了骨肉瘤的发生。进一步分析发现，Cx43在骨肉瘤组织中的表达与性别、组织学类型无关，差异无统计学意义，但与年龄、肿瘤大小、临床分期、肺转移及增殖活性(Ki-67)有关，表明Cx43在骨肉瘤中表达越低，其转移性越大，临床分期越高，因而，其可间接反映患者的病情状态。增殖指数Ki-67是衡量细胞增生活性的重要指标，其在正常组织中无表达或低表达，而在恶性肿瘤组织中则强表达，且其表达越强，瘤细胞浸润、转移的概率越大[9]。本研究显示，在增殖指数Ki-67高表达组中Cx43呈现低表达，两者表达趋势不一致，因而推测Cx43的高表达有可能会抑制肿瘤细胞的增殖活性，进而影响瘤细胞浸润转移。资料显示，转染Cx43基因的腺细胞通过提高其Cx43基因及蛋白表达水平，改善细胞间隙连接通讯功能，进而引起其侵袭性及增殖活性降低[10]。孙志华等[11]研究Cx43在卵巢癌中的表达时发现，卵巢癌细胞Cx43的表达量均显著少于正常卵巢细胞，且耐药组显著少于敏感组，差异有统计学意义。

总之，Cx43在骨肉瘤组织中呈现低或无表达，其表达水平在一定程度上影响瘤细胞的生物学特性，因而临床有必要检测其在组织中的状态，以利于综合判断病情及指导临床用药等。然而，如何提高患者Cx43的表达水平及其安全性还需进一步探讨。

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