血小板膜蛋白受体信号转导通路的研究进展

陆 四(综述)，孟照辉(审校)

(昆明医科大学第一附属医院心内科 分子心血管病研究室，昆明 650032)

当血管受损内皮下胶原暴露时，首先血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)介导糖蛋白(gluco protein，GP)Ⅰb-Ⅴ-Ⅸ与胶原结合，产生黏附，导致快速流动的血小板减速，使GPⅥ易与胶原结合，同时，血小板内容物释放，进一步介导血小板释放、聚集，并使已黏附和聚集的血小板趋于稳定，这个过程是由血小板膜受体经一系列信号转导来实现的[1]。血小板信号转导分为三个过程:①血小板激活剂与血小板膜受体结合，介导早期信号转导；②各信号路径相互协调，最后形成一条由内向外的共同信号通路激活GPⅡb/Ⅲa受体；③GPⅡb/Ⅲa受体激活后介导由外向内的信号通路[2]。目前发现的血小板信号通路主要有：磷脂酶C-β(phospholipase C-β，PLC-β)途径、酪氨酸蛋白激酶途径、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)途径、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)途径、腺苷环磷酸-蛋白激酶A途径、磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)花生四烯酸路径[3]。这些受体及其信号路径也是研究抗血小板药物的作用靶点，该文主要对血小板信号转导途径及抗血小板药物研究予以综述。

1 血小板膜受体分类

血小板膜蛋白受体分整合素和非整合素两类。整合素类有：GPⅠa/Ⅱa、纤维蛋白GPⅠc/Ⅱa、层粘连蛋白GPⅠc/Ⅱa、GPⅡb/Ⅲa、玻璃结合蛋白GPⅤnR。非整合素类有：GPⅠb/Ⅱa、GPⅣ、GPⅥ及凝血酶、血栓素A2(thromboxane A2,TXA2)、肾上腺素、蛋白酶激活受体(protease activated receptors，PAR)、加压素和前列环素2、ADP等受体，且大部分属G蛋白偶联受体[4-5]。

2 血小板膜受体及其信号转导途径

2.1vWF受体 包括GPⅠb-Ⅴ-Ⅸ、GPⅡb/Ⅲa两种。GPⅠb-Ⅴ-Ⅸ由GPⅠbα、GPⅠbβ、GPⅨ和GPⅤ四个亚基组成，通过非共价键以2∶4∶1∶2的比例组成，由于GPⅤ功能尚不明确，因此通常称之为GPⅠb-Ⅸ复合物。免疫球蛋白Fc受体中的γ链的跨膜区与该受体组成受体复合物，γ链中含有免疫受体酪氨酸激活酶基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif，ITAM)，是该受体信号转导部分，当血管受损内皮下胶原暴露时，血浆vWF的A3区与胶原结合，导致vWF构型变化，其A1结构域与GPⅠbα的N端结合[6-7]，使快速流动的血小板减速，并在vWF表面滚动形成不稳定血栓，随后被胶原与其受体更稳定的结合而取代[8]。结合后的受体结构也产生变化，ITAM系列中的酪氨酸被Src家族酪氨酸激酶(the Src family of complex amino acid kinase,SFKs)磷酸化(Src家族中以Lyn蛋白酶磷酸化为主)，导致酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)激活，使下游蛋白酶如活性T细胞连接蛋白(active T cells connected protein,LAT)酶和相对分子质量为76×103的含有2个酪氨酸(spleen tyrosine)同源受体结构域的白细胞磷酸蛋白酶(leukocyte phosphoric acid protease-76)即SLP-76酶磷酸化，催化产生LAT、SLP-76、酪氨酸激酶(Bruton′s tyrosine kinase，Btk)、生长因子结合蛋白2相关衔接蛋白(growth factor binding protein-2 related proteins，Gads)及PLCγ，这些蛋白酶与PLCγ形成复合物。其信号路径为GPⅠb-Ⅴ-Ⅸ→SFKs(以Lyn蛋白酶磷酸化为主)→Syk→LAT/SLP-76/Btk-Gads→PLCγ，PLCγ催化磷脂酰肌醇4,5-二磷酸生成三磷酸肌醇(inositol triphosphate，IP3)和二酰甘油(diacylglycerol，DAG)，两者在Ca2+的参与下分别激活下游蛋白，即PLCγ→IP3+Ca2+→Cal-DAG-GEF1(calcium and DAG-regulated GEF1)→ras基因相关蛋白1b(repressor activator protein 1，Rap1)→MAPKs→PLA2和PLCγ→DAG→Cal-DAG-GEF1→Rap1→RIAM(Rap1-GTP interacing adaptor molecule)→talin/kindlin；PLCγ还可激活PI3K，使PLCγ招募更多活化蛋白而加强PLCγ活性；DAG还介导DAG→蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)→RIAM→talin/kindlin参与共同信号途径[2]。激活的SFKs也可激活PI3K，PI3K激活蛋白激酶(protein kinase,PK)Bα、PKBβ、PKBγ或AKT1、AKT2、AKT3，使内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOs)激活，eNOs激活可溶性鸟苷酸环化酶(soluble guanylyl cyclase,sGC)，催化鸟苷酸为环一磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)，激活下游蛋白PLA2；其信号途径为GPⅠb-Ⅴ-Ⅸ→SFKs(Lyn)→PI3K→PKB→eNOS→sGC→cGMP→PKG→MAPKs→PLA2，介导血小板形态变化、TXA2合成、ADP等内容物释放。MAPKs是否参与信号共同路径还待研究[2]。

2.2胶原受体GPⅥ及信号转导途径 GPⅥ属免疫球蛋白家族，ITAM是其信号转导部分；近跨膜区富含碱性氨基酸的区域，能与钙调蛋白结合，位于中部的富含脯氨酸基序，可选择性与(SFKs)(主要是Fyn和Lyn)SH3区结合，使ITAM系列Y XXL/I-X6-8 XXL/LI被Lyn和Fyn磷酸化，该系列基本组成是：I(异亮)/V(缬)XY(酪)XXL(亮)，该系列磷酸化后导致Syk激活,后者作用与vWF受体相同，其信号路径为GPVI→SFK(以Lyn)→Syk→PI3K→PKB→eNOS→sGC→PKG→MAPKs→PLA2和GPⅥ→SFK(Lyn)→Syk→LAT/SLP-76/Btk-Gads/PLCγ，PLCγ酶解磷脂酰肌醇二磷酸生成DAG和IP3，两者作用与vWF受体中的DAG和IP3相同，导致TXA2合成，内容物释放及激活α2bβ3受体[1-2,9]。

2.3GPⅠa/Ⅱa受体及信号传递途径 该受体由α2和αβ1两亚基组成，α2与vWF因子的胶原结合区域有同源性，β1亚基有一富含四个半胱氨酸的区域及一个与其他整合素β亚基相似的结构。α2与内皮下Ⅰ型和Ⅳ型胶原直接结合，其结合依赖于Mg2+，而被Ca2+抑制；αβ1起信号转导作用，其信号路径有：GPⅡa→SFK(Lyn)→Syk→LAT/SLP-76/Btk-Gads→PLCγ，PLCγ作用与vWF受体的PLCγ相同，使血小板活化，释放内容物，也参与共同信号路径激活α2bβ3受体。GPⅠa/Ⅱa在血小板与胶原黏附、活化中起关键作用，缺乏则血小板出现黏着力减弱及对胶原诱导的血小板缺乏聚集反应[1-2,10]。

2.4GPⅠb-Ⅴ-Ⅸ与GPⅥ的关系 GPⅠb-Ⅴ-Ⅸ与胶原结合需vWF介导，后者直接与胶原结合。Arthur等[8]报道，低切应力状态下，GPⅥ启动血小板聚集，而GPⅠb-Ⅴ-Ⅸ则引发高切应力下的血小板聚集。但Arthur等[8]研究发现，应用鼠源抗人血小板膜糖蛋白GPⅠbα单克隆抗体，可明显阻断GPⅥ特异性诱聚剂C反应蛋白诱导的血小板聚集，并证实两者血小板表面均存在相互作用。

2.5GPⅠa/Ⅱa与GPⅥ的关系 Mazzucato等[11]、Miura等[12]和Kato等[13]发现，缺乏FcRγ链或GPⅥ基因剔除的小鼠或加入自身抗体的血小板对胶原刺激无反应，但无明显出血倾向。Jung等[14]和Siljander等[15]认为，GPⅥ介导与胶原最初结合，导致α2β1和α2bβ3活化，后者介导胶原的稳定结合并加强GPⅥ的信号转导。Arthur等[8]报道，GPⅥ与胶原初期黏附介导的信号能提高α2β1与胶原结合的亲合力，抑制GPⅥ可显著抑制胶原诱导的血小板黏附、聚集。Sarratt等[16]则认为两者在血小板与胶原结合中发挥同等重要作用，它们通过各自的信号路径激活血小板，且两者相互协调。

2.6嘌呤受体 该受体有P2Y1、P2Y12和P2X1三种。前两种是ADP受体，为G蛋白偶联受体，两者任何一种受体缺陷都导致血小板不能活化；后一种为ATP受体，是配体门控离子通道。ADP不能使洗净血小板聚集，若加入纤维蛋白原，则可引起血小板聚集，说明ADP主要通过信号传递引起内源性纤维蛋白原释放而发挥作用[15,17-18]。

2.6.1P2Y12受体 该受体与G蛋白α亚基的i类蛋白，即Gαi偶联，激活后启动两条信号转导途径。①由G蛋白α亚基的s类蛋白，即Gαs介导的抑制腺苷酸环化酶(AC)使环一磷酸腺苷减少；②由Gαi介导，即Gαi-SFK(Lyn)→Syk→PI3K→AKT→eNOS→sGC→PKG。PKG使血小板释放，也激活MAPKs而致PLA2激活，使TXA2合成；PI3K和Src也可催化PKB(又称AKT或Rac)、ERK(extracellular signal regulated kinase)、Rap1b等酶磷酸化。其中Rap1b参与Rap→MAPKs→PLA2和Rap1→RIAM→talin/kindlin途径。P2Y12主要介导延迟而持续的Rap1激活，既能直接激活GPⅡb/Ⅲa受体，也介导TXA2合成，加强TXA2及低剂量凝血酶受体信号途径，对Cal-DAG-GEF1介导的快速、可逆Rap1信号路径起补充作用[2,17,19]。

2.6.2受体P2Y1 其与Gαq相偶联，有两条信号途径。①Gq→SFK(Lyn)→Syk→PI3K→AKT→eNOS→sGC→PKG。PKG、PI3K与P2Y12的作用相同。②Gq→SFK(cSrc)→PI3K→LAT/SLP-76/Btk-Gads→PLCβ。PLCβ与vWF受体的PLCγ相同。此途径是ADP受体诱导血小板变形的主要途径，若Gq缺乏，血小板对ADP、TXA2、凝血酶甚至胶原受体介导的血小板释放、聚集均明显降低。Gq几乎是所有血小板G蛋白偶联受体激动剂所必需的，但它不能使ADP受体介导的血小板充分聚集，且在TXA2和低剂量凝血酶介导血小板活化中也不是最佳的，只是使α2bβ3依赖性血小板短暂、不完全聚集；其形成的Cal-DAG-GEFI也可对P2Y12受体信号途径中的Rap1b、AKT等蛋白酶信号起补充作用[2,17,19-20]。

2.7PAR 人体PAR有PAR1、PAR4，与Gq、G13偶联。PAR1被凝血酶在R41和S42之间裂解后，暴露出一条新肽链，后者为配体再与自身一段肽链结合，使受体激活，激活的G13活化鸟苷酸结合因子(guaninenucleotide exchanging factors，GEFs)如p115RhoGEF，使小G蛋白RhoA变为GTP-RhoA活化形式，激活Rho激酶，Rho激酶磷酸化肌球蛋白轻链并抑制肌球蛋白轻链磷酸酶，加强依赖肌球蛋白轻链的相关收缩，导致血小形状改变及释放反应，之后GTP-RhoA转变为RhoA-GDP而失活；G13缺损的血小板黏附力、释放及血栓形成均缺陷。Gq途径产生信号路径与P1Y2的Gq路径相同,但产生的PKC以PKCδ/θ为主。PAR是否与Gi偶联尚不确定。在血小板聚集过程中，若用腺苷阻断内源性ADP释放或用腺苷三磷酸双磷酸酶破坏ADP，则凝血酶不能使血小板聚集，说明凝血酶的作用可能是与受体结合后，引起内源ADP释放而引起血小板聚集[2,15,20]。

2.8由内向外的共同信号通路 各受体激活后，通过ITAM、Gq和Gi途径分别产生PLCγ/β，使磷脂酰肌醇4,5-二磷酸水解为IP3和DAG,通过IP3/DAG→IP3R→Ca2+→Cal-DAG-GEF1→Rap1→RIAM→talin/kindlin途径及DAG→PKC→RIAM→talin/kindlin途径激活α2bβ3受体。信号中的Cal-DAG-GEF1通过改变Rap1使许多Ras家族蛋白酶激活，再作用于RIAM使talin或kindlin激活。Li等[2]和Moser等[21]报道，激活α2bβ3需talin和kindlin蛋白参与，kindlins与α2bβ3受体C端NXXY区结合，调控talin与α2bβ3连接，并与talin一起作用于α2bβ3，从而实现信号由内向外转导；Talin蛋白与β3的NPLY区结合，使α2b和β3结构发生变化，导致受体胞外区结构变化。但Cal-DAG-GEF1只起辅助作用,其缺乏时，依赖α2bβ3受体聚集的血小板仅有部分缺失，表明还存在其他信号途径，如DAG→PKC途径及ADP受体P2Y12通过Gai信号路径中的蛋白酶如PKB、PI3K等均可直接激活Rap1而介导GPⅡb/Ⅲa受体激活，后者既与Fg结合成为“桥链”使相邻血小板聚集形成血栓，也介导由外向内的信号传递，起信号放大作用[22]。

2.9由外向内的信号通路─纤维蛋白原受体 GPⅡb/Ⅲa激活后与纤维蛋白原、vWF结合，形成新配体诱导结合点[22]，并触发2条由外向内的信号。①经G13/GPCRs路径介导RhA激活，其路径与凝血酶的相同；②G13与α2bβ3的β3连接激活SFKs，SFKs介导由外向内的信号机制有:①SFKs介导β3胞质区NXXY样结构磷酸化，在其Y759位磷酸化促进β3与钙蛋白连接，在Y474位磷酸化则干扰Talin蛋白的连接。β3酪氨酸的磷酸化可使β3激活胞内信号分子，如肌球蛋白重链、衔接蛋白SHC、Src及Syk。②Src磷酸化后，使小G蛋白RhoA-GTP磷酸酶激活，使RhoA变为RhoA-GDP而被短暂抑制，介导血小板早期在纤维蛋白原上铺展；之后，β3被钙蛋白酶水解，Src与β3的相互作用即消失，使Src对RhoA的抑制作用解除，使RhoA被激活，导致血栓收缩反应。③SFKs通过激活Syk，Syk与Src一起使FcγRⅡA磷酸化，Syk也通过与β3胞质区相互作用，促进SLP-76/LAT/Btk/Vav复合物活化并与PLCγ2聚集，其作用与GPVI介导ITAM信号途径相似。这两条路径互相协调以调节Rho的活性，调控血小板形态改变、内容物释放、血凝块收缩等反应[2,19-20,22]。

由上述信号转导途径可知，干扰或阻断血小板活化过程的每一条信号路径，都能对血小板活化起抑制作用，这是临床研究抗血小板药物的理论基础。

3 抗血小板药物

目前临床上应用的三类抗血小板药物有：①环氧化酶抑制剂，如阿司匹林；②ADP受体拮抗剂，如氯吡格雷；③GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂，如替罗非班。这三类抗血小板药物显著降低了心血管疾病患者的发病率及病死率，但它们均存在一定不良反应，如10%～20%患者5年内仍可复发血栓性事件，5%～60%的患者有药物抵抗现象，还有出血、过敏、哮喘加重等不良反应[23-26]；而15%～30%患者对氯吡格雷抵抗,且该类药可引起贫血、出血及纤维蛋白原降低等不良反应[24-25]；GPⅡb/Ⅲa药物治疗窗狭窄，具有出血、血小板减少等并发症[4,26-27]。

鉴于上述药物不良反应及抵抗现象，新型抗血小板药物的研究成为必要。

4 新型抗血小板药物

4.1GPⅠb与vWF因子拮抗剂 6B4-Fab是识别GPⅠb受体α链的单克隆抗体，在狒狒股动脉狭窄模型实验中证明其能明显控制循环血量下降，抑制血小板在Ⅰ型胶原上沉积，而无出血时间延长。还有基因工程产生的人源化的抗vWF-A1嵌合Fab抗体，即AJW200和82D6A3，AJW200是人源化的抗vWF-A1嵌合Fab抗体，可阻断vWF与GPⅠ结合，抑制高剪切力诱导的血小板黏附、聚集及凝血酶的产生，而不影响其他部位血流及出血时间；82D6A3是抗vWF-A3区单抗，能阻断A3与胶原结合，抑制血小板黏附和聚集。两者也是较理想的新型抗血小板药物靶标[28-29]。

4.2GPⅥ拮抗剂 GPⅥ是血小板活化的主要胶原受体，在血小板黏附及GPⅡb/Ⅲa受体激活中有重要作用，GPⅥ缺乏的小鼠血小板黏附及血小板血栓形成减弱，但生理性止血功能正常。其抗小鼠GPⅥ单克隆抗体JAQ1能使GPⅥ受体下调，具有很强的抗栓作用，仅有轻微的出血时间延长，提示其可作为抗血小板研制的一个理想靶点[29-30]。

4.3新开发的ADP受体拮抗剂 包括噻吩并吡啶P2Y12拮抗剂普拉格雷及非噻吩并吡啶P2Y12受体拮抗剂坎格雷洛(cangrelor)和ticagrelor(AZD6140)。普拉格雷与其他不可逆的噻吩并吡啶P2Y12拮抗剂的不同点是在活性巯基附近有一酯团，其中一个氯原子被氟原子代替。Montalescot等[23]试验显示，与氯吡格雷相比，普拉格雷的心源性死亡、心肌梗死或脑卒中发生率更低，药物抵抗者更少，但其出血风险高于氯吡格雷组。TRITON-TIMI38(trial to assess improvement in therapeutic outcomes by optimizing platelet inhibition with prasugrel)，一项随机、双盲、双模拟、平行对照，以比较冠状动脉介入治疗后普拉格雷与氯吡格雷作用效果的试验，该试验分析研究显示，急性冠状动脉综合征支架手术患者应用普拉格雷，支架血栓发生率降低52%。目前该药已获得FDA审批，是最有希望代替氯吡格雷的新型口服抗血小板药物。坎格雷洛(cangrelor)是一种作用快、可逆的抗血小板静脉制剂，无需代谢成治疗活性物。Flierl等[31]研究显示急性心肌梗死溶栓治疗中辅助应用坎格雷洛是安全有效的。而ticagrelor (AZD6140)则是起效快可逆的ADP受体拮抗剂，也无需代谢成治疗活性物，但该药体内代谢后转变为腺苷，会使部分患者出现轻度呼吸困难和心动过缓[23,27,31]。

4.4PAR拮抗剂 PAR拮抗剂有喜巴辛衍生物SCH530348(Atopaxar)和E5555(Vorapaxar)两种，口服生物利用度较好，Jennings等[26]公布了Ⅱ期、随机、双盲、安慰剂对照试验，对1030例经冠状动脉介入术或冠状动脉旁路移植术患者随机分组，在接受标准冠心病二级预防基础上，加用SCH530348(Atopaxar)组的不良事件发生率更低而不增加出血风险，其目前处于临床Ⅲ期研究。E5555(Vorapaxar)拮抗剂体外实验证实其能抑制凝血酶诱导的血小板聚集，抑制血管内膜及平滑肌细胞增生，而无出血时间延长，有可能成为未来急性冠状动脉综合征的重要药物，目前处于临床Ⅱ期研究中[26,32]。

4.5一氧化氮供体 一氧化氮(NO)能提高sGC活性，使cGMP水平升高，增加血流量，抑制血小板聚集，使聚集的血小板解聚等作用。给予NO底物L-精氨酸和其供体如硝酸酯类均可减轻组织器官缺血和再灌注损伤，抑制血小板黏附和聚集，并与溶栓药物有协调作用而改善预后。有研究将NO供体基团通过酯键连接在阿司匹林母体上合成出一种新型的、体内缓慢释放NO的一氧化氮阿司匹林(NO-Aspirin)，如2-(乙酰氧基)苯甲酸3-(硝氧甲基)苯酯(NCX-4016,5)和(+/-)(E)乙基-2-[(E)羟亚氨基]-5-硝基-3-己烯酰胺(FK409)，该药能抑制多种诱导剂引起的血小板聚集和血栓形成，对胃肠道无明显不良反应。临床口服NCX-4016,5一周后可产生同阿司匹林等效的抗血小板聚集作用，且未发现胃肠道损伤。FK409具有抗心绞痛、扩张冠状动脉及抑制血小板聚集作用，作用机制与在体内释放NO有关，已用于急性心肌缺血和动脉成形术后狭窄的实验治疗，目前正进行Ⅱ期临床研究[29,33-34]。

5 结 语

血小板发挥其止血等作用，都是通过其表面膜蛋白受体激活，产生一系列信号传递路径来实现的，随着生物化学、细胞生物学与分子生物学的迅速发展，人们对血小板活化的过程和机制，特别是信号传递在血小板活化中的作用有了一定认识，但对血小板信号转导作用机制仍然缺乏全面清晰的了解。尽管目前已有的抗血小板药物的积极应用，但心脑血管病事件的发生率仍然很高，所以，进一步研究血小板活化及信号转导机制，对于阐明血小板的病理生理变化、血栓性疾病防治具有重要意义，也为开发新型抗血小板药物等提供理论指导。

[1] Stegner D,Nieswandt B.Platelet receptor signaling in thrombus formation[J].J Mol Med (Berl),2011,89(2):109-121.

[2] Li Z,Delaney MK,O′Brien KA,etal.Signaling during platelet adhesion and activation[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2010,30(12):2341-2349.

[3] 裴海云,韩颖.信号转导与血小板激活[J].中国实验血液学杂志,2004,12(5):704-707.

[4] 许俊唐,胡大一.血小板膜蛋白受体拮抗剂在冠状动脉疾病应用的进展[J].新乡医学院学报,2012,2(1)44-46.

[5] Dowal L,Flaumenhaft R.Targeting platelet G-protein coupled receptors (GPCRs):looking beyond conventional GPCR antagonism[J].Curr Vasc Pharmacol,2010,8(2):140-154.

[6] Kasirer-Friede A,Cozzi MR,Mazzucato M,etal.Signaling through GPⅠb-Ⅸ-Ⅴactivates αⅡbβ3independently of other receptors[J].Blood,2004,103(9):3403-3411.

[7] Nuyttens BP,Thijs T,Deckmyn H,etal.Platelet adhesion to collagen[J].Thromb Res,2011,127:s26-s29.

[8] Arthur JF,Gardiner EE,Matzaris M,etal.Glycoprotein Ⅵ is associated with GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ on the membrane of resting and activated platelets[J].Thromb Haemost,2005,93(4):716-723.

[9] Best D,Senis YA,Jarvis GE,etal.GPⅥ levels in platelets:relationship to platelet function at high shear[J].Blood,2003,102(8):2811-2818.

[10] Leitinger B.Transmembrane collagen receptors[J].Annu Rev Cell Dev Biol,2011,27:265-290.

[11] Mazzucato M,Cozzi MR,Battiston M,etal.Distinct spatio-temporal Ca2+signaling elicited by integrin α2β1and glycoprotein Ⅵ under flow[J].Blood,2009,114(13):2793-2801.

[12] Miura Y,Takahashi T,Jung SM,etal.Analysis of the interaction of platelet collagen receptor glycoprotein Ⅵ(GPⅥ) with collagen.A dimeric form of GPⅥ,but not the monomeric form,shows affinity to fibrous collagen[J].Biol Chem,2002,277(29):46197-46204.

[13] Kato K,Kanaji T,Russell S,etal.The contribution of glycoprotein Ⅵ to stable platelet adhesion and thrombus formation illustrated by targeted gene deletion[J].Blood,2003,102(5):1701-1707.

[14] Jung SM,Moroi M.Signal-transducing mechanisms involved in activation of the platelet collagen receptor integrin α2β1[J].J Biol Chem,2000,275(11):8016-8026.

[15] Siljander PR,Munnix IC,Smethurst PA,etal.Platelet receptor interplay regulates collagen-induced thrombus formation in flowing human blood[J].Blood,2004,103(4):1333-1341.

[16] Sarratt KL,Chen H,Zutter MM,etal.GPVI and α2β1play independent critical roles during platelet adhesion and aggregate formation to collagen under flow[J].Blood,2005,106(4):1268-1277.

[17] Murugappa S,Kunapuli SP.The role of ADP receptors in platelet function[J].Front Biosci,2006,11:1977-1986.

[18] Rivera J,Lozano ML,Navarro-Núez L,etal.Platelet receptors and signaling in the dynamics of thrombus formation[J].Haematologica,2009,94(5):700-711.

[19] Kim S,Kunapuli SP.P2Y12 receptor in platelet activation[J].Platelets,2011,22(1):56-60.

[20] Hechler B,Gachet C.P2 receptors and platelet function[J].Purinergic Signal,2011,7(3):293-303.

[21] Moser M,Legate KR,Zent R,etal.The tail of integrins,talin,and kindlins[J].Science,2009,324(5929):895-899.

[22] Stalker TJ,Newman DK,Ma P,etal.Platelet signaling[J].Handb Exp Pharmacol,2012(210):59-85.

[23] Montalescot G,Wiviott SD,Braunwald E,etal.Prasugrel compared with clopidogrel in patients undergoing percutaneous coronary intervention for ST-elevation myocardial infarction (TRITON-TIMI 38):double-blind,randomised controlled trial[J].Lancet,2009,373(9665):723-731.

[24] Cattaneo M.Resistance to antiplatelet drugs:molecular mechanisms and laboratory detection[J].J Thromb Haemost,2007,5 Suppl 1:230-237.

[25] Coccheri S.Antiplatelet drugs—Do we need new options with a reappraisal of direct thromboxane inhibitors[J].Drugs,2010,70(7):887-908.

[26] Jennings LK.Mechanisms of platelet activation:need for new strategies to protect against platelet-mediated atherothrombosis[J].Thromb Haemost,2009,102(2):248-257.

[27] Kei AA,Florentin M,Mikhailidis DP,etal.Review:antiplatelet drugs:what comes next?[J].Clin Appl Thromb Hemost,2011,17(1):9-26.

[28] Firbas C,Siller-Matula JM,Jilma B.Targeting von Willebrand factor and platelet glycoprotein Ib receptor[J].Expert Rev Cardiovasc Ther,2010,8(12):1689-1701.

[29] De Meyer SF,Vanhoorelbeke K,Broos K,etal.Antiplatelet drugs[J].Br J Haematol,2008,142(4):515-528.

[30] Schulte V,Rabie T,Prostredna M,etal.Targeting of the collagen-binding site on glycoprotein VI is not essential for in vivo depletion of the receptor[J].Blood,2003,101(10):3948-3952.

[31] Flierl U,Schöpp C,Jaitner J,etal.The novel P2Y12 antagonist AZD6140 rapidly and reversibly reduces platelet activation in diabetic rats[J].Thromb Res,2010,125(3):e93-e99.

[32] Eisai Medical Research Inc.Safety and tolerability of E5555 and its effects on markers of intravascular inflammation in subjects with acute coronary syndrome[EB/OL].(2013-05-21)[2013-07-15].http://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00548587.

[33] Dangel O,Mergia E,Karlisch K,etal.Nitric oxide-sensitive guanylyl cyclase is the only nitric oxide receptor mediating platelet inhibition[J].J Thromb Haemost,2010,8(6):1343-1352.

[34] Williams JL,Ji P,Ouyang N,etal.Protein nitration and nitrosylation by NO-donating aspirin in colon cancer cells:Relevance to its mechanism of action[J].Exp Cell Res,2011,317(10):1359-1367.