HPLC法测定红源达胶囊的含量

姜作玲，田红伟，程宏霞，王邵林，赵俊梅

（青岛国风药业股份有限公司，山东青岛266510）

HPLC法测定红源达胶囊的含量

姜作玲，田红伟，程宏霞，王邵林，赵俊梅

（青岛国风药业股份有限公司，山东青岛266510）

目的建立高效液相色谱法测定红源达胶囊含量的方法。方法采用高效液相色谱法对红源达胶囊进行定量测定，流动相为0.15%四丁基氢氧化铵溶液（用甲酸调pH值至3.6）－甲醇（87∶13）；检测波长为256 nm。结果本方法线性关系良好（R2为0.999 9），平均回收率为99.62%（RSD＝1.36%）。结论本方法操作简便准确，重复性好，可用于红源达的含量测定。

红源达胶囊；高效液相色谱法；含量

红源达胶囊是一种优良的抗贫血制剂，为淀粉水解而成的单糖、低聚糖与铁的复合物。此类复合物为完整的分子存在，可被人体迅速吸收，用于治疗单纯性缺铁性贫血，效果显著，安全有效，不良反应轻微，已在国内外临床使用多年，孕妇与哺乳期妇女、儿童均可服用［1～3］。

多糖铁复合物中铁的定量经典方法为滴定分析法（碘量法）［4，5］，但滴定分析法需要将制剂制备成高浓度的溶液，对于低浓度的溶液则不能进行滴定。针对该产品没有紫外吸收，无法直接采用HPLC法进行测定，本文参考了乙二胺四乙酸二钠HPLC测定方法［6～9］，将多糖铁复合物处理后与乙二胺四乙酸二钠形成稳定的络合物，于256 nm处利用HPLC法测定其含量，简便，灵敏，结果准确。

1 仪器与试药

Angilent1260液相色谱仪，Shimadzu UV－2550紫外－可见分光光度计，Mettler Toledo XS205电子天平。红源达胶囊为国风药业股份有限公司提供。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 色谱条件

色谱柱：迪马Diamonsil C18柱（4.6 mm×200 mm，5μm）；流动相：0.15%四丁基氢氧化铵溶液（用甲酸调pH值至3.6）－甲醇（87∶13）；检测波长：256 nm；柱温：30℃。理论板数按乙二胺四乙酸铁钠峰计算应不低于3 000。

3 溶液制备

3.1 对照品溶液 精密称取乙二胺四乙酸铁钠对照品（相当于15 mg铁），置100 mL量瓶中，加水溶解并至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取该对照品贮备液1.0 mL，置10 mL量瓶，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

3.2 供试品溶液 取本品20粒内容物，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于1粒装量），置100 mL量瓶中，加水，超声使溶解，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，置10mL量瓶中，加水至刻度，摇匀；精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加入稀硫酸0.1 mL，置水浴中加热至颜色变浅，取出，放至室温，加入0.4%乙二胺四乙酸二钠溶液0.5 mL，摇匀，放置10 min，加水至刻度，摇匀。微孔滤膜（0.45μm）过滤后取续滤液，即得。

4 方法学考察

4.1 专属性实验 按“3.1”、“3.2”项下方法制备供试品溶液、对照品溶液，并按供试品溶液的制备方法制备不含多糖铁复合物的空白对照溶液。取上述3种溶液按“2”项下色谱条件进行测定。结果见图1。结果表明，空白对照溶液没有影响，供试品溶液分离良好。

图1 供试品溶液HPLC图谱

4.2 线性关系考察 精密称取乙二胺四乙酸铁钠对照品（相当于10 mg铁），置100 mL量瓶中，加水溶解并至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。分别精密量取该对照品贮备液0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.0 mL，置10 mL量瓶，分别加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取上述各溶液，按“2”项下色谱条件，分别测定峰面积。以对照品浓度（μg·mL－1）为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并对测得的数据进行回归分析，回归方程为Y＝227.05X＋324.26，相关系数R2＝0.999 9，结果表明，浓度在5.938 8～19.796 0μg·mL－1范围内与峰面积呈良好的线性关系，结果见表1。

4.3 精密度实验 取对照品溶液，按“2”项下色谱条件，连续进样6次，记录色谱峰面积。结果6次峰面积测定值的平均值为1 259.6，RSD为0.51%。

4.4 重复性实验 精密称取同一样品，按“3.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，并按“2”项下色谱条件进行测定。RSD值为0.89%，表明本法重复性较好。

4.5 稳定性实验 取同一份供试品溶液，分别于0、1、2、4、6、8 h时，按“2”项下色谱条件，分别测定峰面积。结果峰面积测的平均值为1 348.7，RSD为0.62%。表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

表1 线性关系考察试验数据

4.6 加样回收实验 采用加样回收法，精密称取已知含量的红源达胶囊样品9份（含铁41.38%），各加入乙二胺四乙酸铁钠对照品，按“3.2”项下方法平行制备9份供试品溶液，并按“2”项下色谱条件进行测定，计算回收率。平均回收率为99.62%，RSD为1.36%，小于2%，表明其方法稳定，准确性好，结果见表2。

表2 回收率试验

5 样品测定

取红源达胶囊样品，按“3.2”项下方法制备供试品溶液，并按“2”项下色谱条件进行测定，按外标法以峰面积计算含量，结果见表3。

表3 红源达胶囊样品含量测定结果

6 讨论

6.1 因红源达胶囊是单糖、低聚糖与铁的复合物，没有紫外吸收，不能直接利用HPLC法测定。通过酸处理，将红源达胶囊中的有机铁转化为三价铁，三价铁与乙二胺四乙酸二钠可以定量反应形成稳定的络合物，该络合物在256 nm波长处具有紫外吸收。本方法通过HPLC测定乙二胺四乙酸铁钠的含量从而实现了对铁的定量，用于红源达胶囊含量测定。

6.2 检测波长的选择。据文献报导［6，7］，乙二胺四乙酸铁钠在254 nm处有最大吸收。本实验于200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，发现在256 nm处有最大吸收，因此选测256 nm为本方法的检测波长，且在此波长下，乙二胺四乙酸铁钠的分离效果良好。

6.3 本法与原质量标准方法的测定结果一致。但碘量法需要样品浓度较高，考虑到溶出度等质量检查项目，供试品溶液浓度较低，HPLC法完全能够满足需求。本法为建立溶出度检查等质量标准提高工作做好了准备。

本实验的方法学研究结果表明，本法结果准确、重复性好，能够有效测定红源达胶囊的含量。

［1］陈仲英.多糖铁胶囊治疗孕妇缺铁性贫血的临床观察［J］.海峡药学，2011，23（5）：228－229.

［2］吕荣君，刘馨，刘巍，等.多糖铁胶囊治疗妊娠合并缺铁性贫血的临床疗效及不良反应观察［J］.中国妇幼保健，2014，29（2）：183－184.

［3］卿蕊.多糖铁复合物治疗76例儿童缺铁性贫血疗效分析［J］.中国现代药物应用，2010，4（3）：111－112.

［4］孙伟，马霖，刘雅丽.多糖铁胶囊的人体生物等效性研究［J］.中国药房，2004，15（3）：167－169.

［5］戴立泉，王凯平，张玉.当归多糖铁的定性鉴别及其铁含量的初步研究［J］.中国药师，2005，8（7）：608－610.

［6］魏峰，李文仙，黄建，等.反相离子对高效液相色谱法测定铁强化酱油中的乙二胺四乙酸铁钠［J］.色谱，2006，24（1）：58－61.

［7］韩继永，张秋香，袁玉，等.反相高效液相色谱法测定注射用奥美拉唑钠中乙二胺四乙酸二钠含量［J］.医药导报，2009，29（11）：1493－1495.

［8］吕晓华，文红，许红琴.高效液相色谱法测定板栗罐头中乙二胺四乙酸二钠的含量［J］.中国卫生检验杂志，2009，19（3）：517－518.

［9］袁伟，赵庆，徐康康.RP－HPLC法测定注射用奥美拉唑钠中乙二胺四乙酸二钠的含量［J］.安徽医药，2010，14（5）：537－538.

Determ ination of Hongyuanda Capsules by HPLC

JIANG Zuo-ling，TIAN Hong-wei，CHENG Hong-xia，WANG Shao-lin，ZHAO Jun-mei
（Qingdao Growful Pharmaceutical Co.，Ltd.，Qingdao 266510，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of Hongyuanda Capsules.MethodsThe mobile phase consisted of 0.15%tetrabutyl ammonium hydroxide solution（with formic acid pH value to 3.6）－methanol（87∶13），the determination wavelength was256 nm.ResultsThe linearity was good（R2＝0.999 9），the average recoverieswas 99.62%（RSD＝1.36%）.ConclusionThe method was simple，accurate with good reproducibility and can be used for the determination of Hongyuanda Capsules.

Hongyuanda Capsules；HPLC；Determination

R927.2

A

2095－5375（2014）09－0516－003

姜作玲，女，高级工程师，研究方向：药物研发，E－mail：jzlqd＠126.com

田红伟，女，高级工程师，研究方向：药物分析，Tel：0532－86058846，E－mail：red1215＠sohu.com