绿原酸对佐剂性关节炎模型大鼠抗炎作用及机制研究

徐英辉，申 茹，刘彦彦

（1.惠州卫生职业技术学院，广东惠州，516025；2.铜仁职业技术学院，贵州铜仁554300）

绿原酸对佐剂性关节炎模型大鼠抗炎作用及机制研究

徐英辉1，申 茹1，刘彦彦2

（1.惠州卫生职业技术学院，广东惠州，516025；2.铜仁职业技术学院，贵州铜仁554300）

目的探讨绿原酸对佐剂性关节炎模型动物抗炎作用及机制。方法采用大鼠足跖注射Freund′s完全佐剂形成佐剂性关节炎（AA），随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组（尼美舒利）、绿原酸低剂量组（25 mg· kg－1）、中剂量组（50 mg·kg－1）和高剂量组（100 mg·kg－1）。观察绿原酸对佐剂性关节炎模型大鼠超敏反应与左右足跖宽度、血清肿瘤坏死因子（TNF－α）、白细胞介素－2（IL－2）、循环免疫复合物（CIC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）和丙二醛（MDA）的含量。结果绿原酸中剂量组（50 mg·kg－1）、高剂量组（100 mg·kg－1）能够降低含量，升高SOD和GSH－Px水平，比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论绿原酸具有抗佐剂性关节炎（AA）的作用，并通过降低TNF－α、IL－2、CIC和MDA含量及提高抗氧化能力发挥作用。

绿原酸；佐剂性关节炎；血清肿瘤坏死因子；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化物酶

绿原酸（CHA）是一种多酚类化合物，是由咖啡酸与奎尼酸形成的缩酚酸，存在于多种植物中，具有多种生物学活性［1］。本文对绿原酸抗佐剂性关节炎的作用进行实验研究，为其临床治疗关节炎提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物及主要试剂 绿原酸购自中国药品生物制品检定所，血清肿瘤坏死因子（TNF－α）、白细胞介素－2（IL－2）、循环免疫复合物（CIC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）和丙二醛（MDA）试剂盒均购自北京鼎国生物技术有限责任公司。

1.1.2 实验动物 SPF级SD雄性大鼠60只，体重（200±20）g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，动物合格证号：SCSK（京）2010－0008。在符合清洁标准的实验室（温度：22～25℃，湿度：50%～70%）喂养。

1.1.3 仪器 电子数量卡尺（上海量具刀具厂）；722型光栅分光光度计（上海第三分析仪器出品）；全自动酶联免疫分析仪（瑞士Tecan公司生产）。

1.2 方法

1.2.1 AA大鼠动物模型制备及分组体重（200± 20）g SD大鼠60只，随机分为6组：空白对照组、模型组、阳性对照组（尼美舒利）、绿原酸低、中、高剂量组。按参考文献方法［2，3］，取冻干卡介苗（BCG）1支（75mg）80℃1 h灭活后，混入灭菌石蜡油、羊毛脂（1∶1），乳化成Freund’s完全佐剂（含BCG 10 mg·mL－1）。除空白对照组，其他各组每鼠右后足跖注射Freund’s完全佐剂0.1 mL进行致炎，在致炎8～12 d后产生超敏反应性炎症，即继发性免疫性关节炎形成。造模成功后，阳性对照组给予尼美舒利80 mg·kg－1，绿原酸低、中、高剂量组分别给予浓度25、50和100 mg·kg－1绿原酸，空白对照组和模型组给予等量生理盐水，每天一次，连续灌胃15 d。

1.2.2 实验指标测定 分组并造模成功后用电子数量卡尺测量每组各鼠左、右足跖厚度，以此作为评价抗炎作用强度的基数，然后进行灌胃给药。给药后第14 d分别测量大鼠左、右后足跖厚度差值为肿胀度。眼球取血，分离血清，处死大鼠后摘取胸腺、脾脏称重，并计算胸腺指数和脾脏指数；按照试剂盒说明书方法［4，5］测定血清TNF－α、IL－2、CIC、MDA的含量及SOD和GSH－Px活性的变化。

1.2.3 统计学分析 应用SPSS 15.0统计软件对数据进行分析，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，P＜0.05表示有显著性差异。

2 结果

与模型组比较，绿原酸组AA大鼠炎性足肿胀明显，胸腺指数和脾脏指数明显升高，其血清中TNF－α、IL－2、CIC、MDA的含量明显降低（P＜0.05），同时，SOD和GSH－Px活性显著升高（P＜0.05），结果见表1、2。

表1 绿原酸治疗前后各组大鼠左、右足跖肿胀厚度（mm）（±s，n＝10）

表1 绿原酸治疗前后各组大鼠左、右足跖肿胀厚度（mm）（±s，n＝10）

注：与模型组比较，*P＜0.05，与空白对照组比较，△P＜0.05

0.18±0.14 0.14±0.13模型组 0.97±0.26△ 1.19±0.32△阴性对照组 0.64±0.20* 0.55±0.21*绿原酸（低） 0.73±0.19 0.68±0.18绿原酸（中） 0.47±0.29* 0.39±0.18*绿原酸（高） 0.43±0.33* 0.40±0.21组别 左 右空白对照组*

表2 绿原酸对AA大鼠胸腺指数、脾脏指数、TNF－α、IL－2、CIC、MDA、SOD和GSH－Px的影响（±s，n＝10）

表2 绿原酸对AA大鼠胸腺指数、脾脏指数、TNF－α、IL－2、CIC、MDA、SOD和GSH－Px的影响（±s，n＝10）

注：与模型组比较，*P＜0.05，与空白对照组比较，△P＜0.05

组别 胸腺指数 脾脏指数 TNF－α（pg·mL－1）IL－2（ng·mL－1） CIC（浊度值） MDA（nmol·mg－1）SOD（U·mg－1） GSH－Px（U·mg－1）6±1.2 1.68±0.46 129.38±22.62 55.23±11.12模型组 0.31±0.11△ 0.07±0.02△ 224.6±12.5△ 1.88±0.01△ 18.2±1.8△ 5.16±0.88△ 68.74±15.29△ 26.73±8.33△阳性对照组 0.57±0.02* 0.16±0.05* 186.2±15.4* 1.21±0.06* 10.5±2.3* 3.15±0.73* 98.44±23.52* 36.84±10.28*绿原酸（低） 0.42±0.03 0.11±0.03 201.7±21.6 1.65±0.12 15.7±2.4 4.96±0.83 78.69±19.97 48.05±7.90绿原酸（中） 0.55±0.04* 0.15±0.01* 169.3±17.8* 1.19±0.08* 9.6±1.5* 2.99±0.62* 117.38±19.25* 39.36±8.29*绿原酸（高） 0.58±0.12* 0.17±0.04* 160.9±22.5* 1.16±0.04* 9.3±2.7* 2.87±0.98* 118.14±13.79* 37.32±8.02空白对照组 0.68±0.09 0.18±0.01 144.2±18.2 1.08±0.02 8.*

3 结论

3.1 类风湿关节炎（RA）是一种以关节滑膜炎为特征的慢性全身性自身免疫性疾病［6］，常伴关节腔滑膜组织炎症、渗液、细胞增殖、肉芽形成以及软骨、骨组织破坏等症状。早期表现为滑膜红肿，关节明显肿胀，多侵犯小关节如手、足和腕，常为对称性［7］。完全弗氏佐剂诱导的AA大鼠模型在临床表现、病理改变和血清学特点等方面与人类RA非常相似，是研究和筛选治疗RA药物常用的模型之一［8］。本研究结果表明，AA大鼠模型组关节肿胀明显，绿原酸能够显著减轻AA大鼠足趾肿胀。

3.2 白细胞介素－2（IL－2）是体内最强的T细胞生长因子，通过提高T细胞的数量和功能可增强机体的免疫功能，同时还可促进B细胞生长和分化，促进抗体的生成。TNF－α在RA发病和病程进展中起重要的作用，其拮抗剂或减少TNF－α的药物对RA有显著疗效［9］。SOD是机体中主要的抗氧化酶之一，可以有效清除体内过多的自由基。丙二醛（MDA）是脂质过氧化产物，在对过氧化物定量的实验中常以MDA含量和水平为评价标准。GSH是细胞内主要的氧化还原缓冲物质，通过维持细胞内的氧化还原平衡发挥清除ROS的作用。AA炎症发生过程中自由基大量产生，清楚过多的自由基在抗炎过程中发挥的重要的作用［10］。

本文研究结果表明，绿原酸具有抗佐剂性关节炎（AA）并通过降低TNF－α、IL－2、CIC和MDA含量及提高抗氧化能力发挥作用。

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Anti－inflammatory effect of chlorogenic acid on adjuvant arthritis rats

XU Ying-hui1，SHEN Ru1，LIU Yan-yan2
（1.Huizhou Health Vocational College，Huizhou 516025，China；2.Tongren Polytechnic College，Tongren 554300，China）

ObjectiveTo investigate the effects of the anti－inflammatory effectof chlorogenic acid on adjuvantarthritis rats.MethodsTreated with various concentrations of chlorogenic acid on adjuvantarthritis（AA），then divided into six groups as control group，model group，positive control group（nimesulide），low dose（25 mg·kg－1），medium dose（50 mg· kg－1）and high dose（100 mg·kg－1）of chlorogenic acid to observe the effect of chlorogenic acid on adjuvant arthritis model rats with left and right foot plantar width，serum tumor necrosis factor（TNF－alpha），interleukin 2（IL－2），the amount of circulating immune complex（CIC），superoxide dismutase（SOD），glutathione peroxidase（GSH－Px）andmalondialdehyde（MDA）content.ResultsThe results demonstrated that chlorogenic acid（25 mg·kg－1and 100 mg·kg－1）can inhibit rat ear swelling caused by dimethylbenzene and foot swelling caused by freund′s adjuvant.Chlorogenic acid in medium dose group（50 mg·kg－1）and high dose group（100 mg·kg－1）could reduce the content of increase SOD and GSH－Px level，compare the differencewas statistically significant（P＜0.05）.ConclusionThe results demonstrated that chlorogenic acid had anti－inflammatory effect on adjuvant arthritis（AA）and by reducing the TNF－α，IL－2，CIC and MDA content and increasing antioxidant capacity.

Chlorogenic acid；Adjuvant arthritis；TNF－α；SOD；GSH－Px

R965

A

2095－5375（2014）09－0505－003

徐英辉，女，讲师，研究方向：中药成分分析及药理研究，E－mail：asrblove＠126.com