HPLC法测定荷叶与莲房中荷叶碱的含量

杨 鹏

（福建中医药大学药学院，福建福州350122）

HPLC法测定荷叶与莲房中荷叶碱的含量

杨 鹏

（福建中医药大学药学院，福建福州350122）

目的建立高效液相色谱法测定荷叶与莲房中荷叶碱含量的方法。方法采用Agilent Eclipse XDBC18（4.6 mm×250 mm，5μm），以乙腈－水－三乙胺－冰醋酸（27∶70.6∶1.6∶0.8）为流动相；流速：1.0 mL·min－1；柱温：25℃；检测波长：270 nm。结果荷叶碱在3.01～48.16μg·mL－1范围内线性良好（r＝0.999 0），平均回收率为96.97%，RSD＝0.99%（n＝6）。结论该方法准确、简便、灵敏度高、重现性好，可用于荷叶与莲房中荷叶碱含量的测定。

荷叶；莲房；荷叶碱；高效液相色谱法；含量测定

荷叶是睡莲科植物莲（Nelumbo nucifera Gaertn.）的叶片，在中国大部分地区均有分布。传统医学认为，荷叶具有清暑利湿、升发清阳、清心去热、止血利水的作用［1］。1991年11月中华人民共和国卫生部卫监发（1991）第45号文件中，荷叶被列入第二批“既是食品又是药品”的名单［2］。据文献记载，荷叶中主要生理活性物质为生物碱和黄酮类物质［3］，其生物碱具有抑制高胆固醇血症和动脉粥样硬化作用，其中荷叶碱被证实为荷叶中具有降脂减肥作用的活性成分［4］，因此越来越受到重视。为了控制荷叶的质量，往往把荷叶碱作为荷叶的指标性成分，对其进行含量测定。查找文献［5］可知，主要采用高效液相色谱法测定含量，本文也建立了高效液相色谱法测定荷叶和莲房中荷叶碱含量的方法。实验结果表明，该法准确度高，重现性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1100液相色谱仪：Agilent E-clipse XDB－C18（4.6 mm×250 mm，5μm）色谱柱；分析天平（Sartorius AGCP225D）；KQ－500B超声清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；紫外分析仪（UV－1750）。

1.2 试药 荷叶碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111566－200703）；荷叶和莲房药材由康美药业股份有限公司提供。乙腈、三乙胺、冰乙酸、甲醇为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent Eclipse XDB－C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈－水－三乙胺－冰乙酸（27∶70.6∶1.6∶0.8）；流速：1.0 mL·min－1；柱温：25℃；检测波长：270 nm；进样量：20μL。在此条件下，荷叶碱的保留时间为12.5 min左右，样品中荷叶碱与相邻组分达到基线分离，分离度大于1.5，对照品与样品色谱图见图1。

图1 HPLC色谱图

2.2 对照品溶液的制备 取荷叶碱对照品适量，精密称定，加适量甲醇溶解，并制成1mL含有0.120 4 mg的对照品储备液，精密吸取储备液5 mL至20 mL容量瓶，加甲醇稀释至刻度，即得对照品溶液（荷叶碱浓度为30.1μg·mL－1）。

2.3 供试品溶液的制备 精密称定粉碎的荷叶粗粉0.5 g，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流2.5 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置10 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，滤液为供试品溶液Ⅰ。另取粉碎的莲蓬0.5 g，回流提取，方法和操作同上所述，得供试品溶液Ⅱ。

2.4 线性关系考察 精密吸取荷叶碱对照品储备液（0.120 4 mg·mL－1）0.25、0.5、1、2、3、4 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件，分别精密吸取20μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以对照品的浓度（μg·mL－1）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：Y＝61 793X－7.764 6，r＝0.999 0表明荷叶碱在3.01～48.16μg·mL－1范围内具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液（0.022 08 mg·mL－1）20μL，按上述色谱条件，重复进样5次，测得荷叶碱峰面积平均值为1 276.04，计算RSD为0.11%。

2.6 重复性试验 精密称取荷叶供试品5份，按上述方法进行测定，考察方法的重复性，RSD为1.28%，表明该法重复性好。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h，按上述色谱条件测定，荷叶碱峰面积的平均值为1 200.06，RSD为0.31%，表明在24 h内基本稳定。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量（0.415 4%）的同批荷叶6份，每份约0.5 g。分别加入100%量的荷叶碱对照品后，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述的色谱条件测定，记录峰面积，计算荷叶碱的平均回收率和RSD分别为96.97%、0.99%，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）

2.9 样品含量测定 按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取对照溶液及供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测得 3批荷叶（批号：121111861、1304097611、31103871）中荷叶碱的含量分别为0.401 2%、0.421 1%、0.415 4%；3批莲房（批号130409621、130709721、131111831）中荷叶碱的含量分别为0.037 48%、0.038 91%、0.038 65%。

3 讨论

3.1 样品提取方法与提取时间的选择 根据荷叶碱易溶于有机溶剂的性质，本实验分别用甲醇、乙醇、乙腈作为提取溶剂，回流2.5 h，结果表明，甲醇提取效果较好。

3.2 流动相的选择 在实验过程中，用乙腈－水－三乙胺－冰醋酸（27∶70.6∶1.6∶0.8）做流动相，保留时间短，分离效果好，达到了对样品检测的要求。

3.3 波长的选择 经紫外分析仪测定，荷叶碱在270 nm处有最大吸收，因此本实验选择270 nm波长为检测波长，从而保证了检测灵敏度。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010.

［2］范继善.实用食品添加剂［M］.天津：天津科学技术出版社，1993：10.

［3］程青正，彭红，胡庆梅.正交试验法优化荷花提取工艺［J］.药学研究，2013，32（11）：632－633.

［4］涂长春，李晓字，杨军平，等.荷叶生物总碱对肥胖高脂血症大鼠减肥作用的实验研究［J］.江西中医学院学报，2001，13（3）：120－121.

［5］柴金玲，李伟，谷学新.高效液相色谱法测定荷叶中荷叶碱的含量［J］.药物分析杂志，2005，25（8）：932－934.

Determ ination of nuciferine in lotus leaf and seed pod by HPLC

YANG Peng
（School of Pharmacy，Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of nuciferine in lotus leaf and seed pod.M ethodsAn Agilent Eclipse XDB－C18（4.6 mm×250 mm，5μm）was used with acetonitrile－water－triethylamglacial acetic acid（27：70.6：1.6：0.8）mixture as amobile phase，the flow ratewas1.0mL·min－1and the column temperature was25℃，the detection wavelength was270 nm.ResultsThe linear range of nuciferine was3.01～48.16μg·mL－1，r＝0.999 0，the average recovery was 96.97%，RSD＝0.99%（n＝6）.ConclusionThemethod was simple，accurate and better repeatable.It can be used for determining the quantitative of nuciferine.

Lotus leaf；Seed pod；Nuciferine；HPLC；Determination

R927.2

A

2095－5375（2014）04－0208－002

杨鹏，男，研究方向：药物分析，E－mail：840569168＠qq.com