峻下逐水中药抗白血病作用研究进展

张 超

(山东中医药大学药学院，山东 济南 250355)

峻下逐水药大多苦寒有毒，药力峻猛，服药后能引起剧烈腹泻，有的兼能利尿，能使体内潴留的水饮通过二便排出体外，消除肿胀。适用于全身水肿，大腹胀满，以及停饮等正气未衰之证。该类药物副作用大，易伤正气，临床应用当“中病即止”，不可久服，使用时常配伍补益药以保护正气，体虚者慎用，孕妇忌用。在当前中医临床中，该类药物的临床实用价值已明显降低，许多功能可用西药和其他处理措施代替。但是近年来，国内外研究人员又分离出一些新的化学成分，并发现了一些令人鼓舞的抗癌活性，其中不乏抗白血病作用的报道。本文对国内外有关该类药物抗白血病作用的文献进行了系统的综述，为更好的开发利用峻下逐水药提供科学依据。

1 狼毒

狼毒为大戟科植物月腺大戟Euphorbia ebracteolata Hayata或狼毒大戟Euphorbia fischeriana Steud.的干燥根。

1.1 狼毒大戟 L615白血病小鼠T细胞转化率显著降低，免疫功能低下，灌胃给予狼毒大戟水浸液后白细胞的无序增殖得到抑制，缓解了症状，延长了存活期，且与剂量有关，推测狼毒大戟通过恢复T细胞的免疫功能，增强其正常免疫应答能力产生抗白血病作用［1，2］。深入研究发现狼毒大戟水提物可显著改善患有L615白血病的小鼠肝中谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活力下降的状况［3］。还可诱导L615白血病小鼠T淋巴细胞的凋亡［4］，这种作用与抑制肿瘤细胞c-myc和ras基因表达有关［5］。此外，对L615白血病小鼠进行的狼毒大戟毒性实验发现狼毒大戟低剂量下无显著性生殖毒性，可以部分阻止或减缓L615白血病细胞对中枢神经的浸润作用［6］。

从狼毒大戟中分离得到的二萜化合物17-羟-岩大戟内酯B和岩大戟内酯B均能显著抑制K562细胞的增殖，其中，17-羟-岩大戟内酯B对癌细胞的增殖抑制浓度与阿霉素相当［7］。岩大戟内酯 B 的 IC50为12.1 μg·mL-1。有人通过测定Caspase-3和Caspase-8的活化程度证实了17-羟-岩大戟内酯B对人白血病K562细胞具有很强的诱导凋亡作用，并呈浓度依赖关系及时间依赖关系［8］。而岩大戟内酯B对K562细胞的诱导凋亡是通过阻断G1期细胞实现的［9］。

1.2 月腺大戟 月腺大戟水提物灌胃给予腹腔接种P388白血病细胞的小鼠，观察细胞凋亡特征，计算凋亡率，检测bcl-2和bax表达，结果高剂量(10g·L-1)组比低剂量(2.5 g·L-1)组诱导细胞凋亡明显，凋亡细胞胞浆中出现凋亡小体，核质松散呈网状等。月腺大戟高剂量组与阳性药物对照组细胞bax表达旺盛，bcl-2表达受到明显抑制，提示高剂量月腺大戟对白血病淋巴细胞凋亡有诱导作用［10］。从月腺大戟根的乙醇提取物的氯仿萃取部位亦分离得到岩大戟内酯B，研究证实其对白血病Jurkat细胞株表现出一定细胞毒活性，IC50为 0.0647μmol·L-1，同时分得的化合物 ent-11β -hydroxyabiera-8(14)，13(15)-dien-16，12β -olide亦表现出显著地抑制活性，IC50为 0.0179μmol·L-1，以上 2种成分均为松香烷内酯型的二萜类化合物，推测月腺大戟中的二萜类成分与其抗白血病的活性相关［11］。

2 商陆

商陆为商陆科植物商陆Phytolacca acinosa Roxb.或垂序商陆Phytolacca americana L.的干燥根。

中国商陆皂苷能诱生γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)和淋巴毒素(LT)，推测其为一种T淋巴细胞分裂原，其诱生的混合淋巴因子对人的Molt-4细胞(T淋巴细胞白血病细胞株)和Jurkat细胞均有不同程度的细胞毒性作用，而对正常细胞-羊膜细胞(WISH细胞株)无毒性作用，可见其诱生因子具有一定的临床应用价值［12］。美洲商陆别名垂序商陆，在体外亦能诱导正常外伤脾和病人脾细胞产生IFN-γ。垂序商陆根所含有丝分裂原(PWM)可抑制骨髓瘤细胞DNA的合成，但不抑制淋巴瘤细胞的合成。垂序商陆抗病毒蛋白(PAP)与有高度特异性的单克隆抗体(抗人T细胞单克隆抗体Wu71)连接而制备的免疫毒素，除了能预防白血病细胞在体内的生长外，还能有效杀伤靶细胞［13］。从商陆根水提液中分离的一种酸性咋多糖商陆多糖Ⅰ(PAP-Ⅰ)以80～160mg·kg-1剂量相隔4 d腹腔注射给小鼠2次，结果使腹腔巨噬细胞(Mф)对L929和S180肿瘤细胞的免疫细胞毒作用增强，使脂多糖辅助诱生TNF和IL-1的能力增加，提示PAP-Ⅰ增强Mф细胞毒作用与TNF和IL-1的诱生相关［14］。亦有类似报道证实了PAP-Ⅰ连续腹腔注射7 d使脂多糖辅助诱生TNF，在5～20mg·kg-1呈剂量依赖关系［15］;PAP-Ⅰ10～20mg·kg-1腹腔注射能显著促进脾脏增生，提高T淋巴细胞和IL-2的产生能力，可显著抑制S180的生长［16］。商陆皂苷H(EH)除了有较高的诱生干扰素效价外，还可诱导Mф释放TNF，而且其诱生释放TNF的动力学模型不同于脂多糖，释放达峰时间可持续至24 h［17］。刘接卿［18］进一步对商陆总皂苷采用层析分离等手段得到5个单体化合物，利用MTT法和XTT法初步筛选出对HL60细胞的增殖有较强的抑制作用的化合物3-O-β-D-吡喃木糖 -2- 羟基商陆酸 -30- 甲酯，IC50为 25.9 μg·mL-1，构效关系研究表明商陆皂苷中的糖链对细胞毒作用的影响。

3 千金子

千金子为大戟科植物续随子Euphorbia lathyris L.的干燥成熟种子。

黄晓桃等［19］用MTT法体外检测证实了千金子甲醇提取物对人宫颈癌细胞(Hela)、人肝癌细胞(HepG2)、人红白血病细胞(K562)、人单核细胞性白血病细胞(U937)、人急性淋巴细胞性白血病细胞(HL60)的抑制作用，其IC50值分别为15.5、29.6、13.1、10.5、17.5 μg·mL-1，抑制作用与给药剂量呈正相关，对白血病细胞的抑制作用强于其他肿瘤细胞;用小鼠移植性肿瘤考察了千金子甲醇提取物在体抗瘤活性，结果表明其不同剂量(100、150、200mg·kg-1)对S180的抑瘤强度与5-氟尿嘧啶(25mg·kg-1)相近或稍强。这些作用可能与千金子水提取物在体外对MMP-16的抑制作用有关［20］。MMP-16是一种膜型基质金属蛋白酶，在肿瘤侵袭转移中起关键性作用，千金子水溶液对MMP-16的抑制效果与其浓度呈正相关，IC50=0.47 μg·mL-1，也可能与大剂量时的细胞毒作用有关。杨珺等［21］观察了千金子提取液对细胞的毒性作用，结果提取液在低浓度时(15.625、7.813mg·L-1)对细胞无毒性作用，在高浓度(125、62.5、31.25mg·L-1)时细胞毒性明显，且浓度越高，细胞毒性增加越显著。Appendino G等［22］发现千金子素L10给予对柔红霉素耐药的白血病肿瘤细胞K562/R7(P-gP过度表达)后，细胞内柔红霉素的相对浓度增加了1倍，提示千金子素L10对P-gP具有显著的抑制作用，该作用稍强于阳性对照药环胞霉素A，证实了千金子相关成分抗肿瘤的多药耐药性。

4 巴豆、甘遂、芫花、京大戟

巴豆为大戟科植物巴豆Croton tiglium L.的干燥成熟果实。早期临床验证含有巴豆的中药复方“抗白丹”单用对急性白血病有一定效果［23］。徐建国等［24］、田艳伟［25］分别使用巴豆水提液处理白血病细胞HL60进行诱导分化研究，结果表明巴豆水提液能抑制HL60细胞增生，提高HL60NBT还原能力，增强HL60吞嗞能力，因此说明巴豆水提液能够诱导白血病细胞HL60向正常方向分化。

甘遂为大戟科植物生遂 Euphorbia kansui T.N.Liou ex T.P.Wang的干燥块根。甘遂提取物对在体P388白血病细胞小鼠有抑制作用，从中分离得到的两个巨大戟二萜醇型二萜酯甘遂素甲、乙(Kansuiporin A，B)，对(HL60、K567、H322)等多种癌细胞表现出明显的细胞毒性［26］。

芫花为瑞香科植物芫花Daphne genkwa Sieb.et Zucc.的干燥花蕾。1981年，Kasai等［27］从芫花中分出抗白血病有效成分芫花烯，在对小鼠进行体内抑制P388淋巴细胞白血病的生物实验中，低剂量芫花烯即有显著的抗白血病活性。1982年Hall等［28］研究了芫花烯和芫花酯甲的抗肿瘤活性，二者的抗白血病的主要机理是影响DNA和蛋白质的合成。近年来关于芫花中二萜成分的抗肿瘤作用又有新报道:genkwanines D、genkwanines H、genkwaines J、yuanhuacin、yuanhuadine通过抑制DNA拓扑异构酶Ⅰ实现抗肿瘤作用［29］。

京大戟为大戟科植物大戟Euphorbia pekinensis Rupr.的干燥根。以大戟注射液为实验用药，对KY821细胞株进行体外药物实验，并应用流式细胞仪检测细胞的DNA含量，观察KY821细胞株的细胞动力学。结果发现大戟注射液明显阻断了S期细胞，说明大戟注射液具有抑制癌细胞DNA合成作用［30］。

5 小结

综合国内外相关研究，峻下逐水药抗白血病作用亦表现在3个方面，但大多数药物表现为细胞毒性作用，要么通过抑制DNA、RNA合成，要么抑制白血病细胞分裂增殖。也有部分药物通过提高机体免疫力来达到杀灭肿瘤细胞的目的，如商陆皂苷对淋巴因子的诱生;还有部分药物对白血病细胞有诱导分化作用，如巴豆对HL60细胞的诱导分化。峻下逐水药对白血病的作用研究还处于实验筛选阶段，对其作用机制缺乏深入系统的研究，与临床应用还有很大的距离。需要从广度和深度入手，拓展筛选范围，进一步加强机理探讨，以期取得峻下逐水药抗白血病的突破。

目前，峻下逐水药用于白血病治疗，已有临床报道，大多采用复方，但其机制在分子水平还没有彻底阐明(难度很大)。若能从单味中药及单一成分着手，筛选出其中的有效成分，那么，将有利于峻下逐水药的进一步开发和推广应用。研究中将体外实验、动物在体实验和临床实验相结合，阐明单一有效成分的作用机制及其靶点，既为治疗白血病的药物研究开辟新的途径，又为峻下逐水药的开发利用提供科学依据。

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