适于液体菌种生产的杏鲍菇优良菌株筛选*

王 涛 李 玉 周 峰 李正鹏 郭力刚 鲍大鹏 谭 琦



适于液体菌种生产的杏鲍菇优良菌株筛选*

王 涛 李 玉 周 峰 李正鹏 郭力刚 鲍大鹏 谭 琦**

（国家食用菌工程技术研究中心，农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室，上海市农业遗传育种重点开放实验室，上海市农业科学院食用菌研究所，上海 201403）

以液体菌种菌丝量、菌球密度、直径、发菌周期、出菇周期和产量等为指标，对XH、BX、GR、U5-125、U5-150 五个杏鲍菇菌株进行筛选。对五个菌株液体菌种的菌丝量、菌球密度、直径变化曲线分析表明，BX生长过程中菌丝量最大，在接种期为0.93 g/mL，其次是XH；BX菌球密度最大，菌球直径较小。栽培试验表明，XH产量最高，为209.2 g。BX发菌周期与出菇周期都较短，分别为18.1天和12.1天。

杏鲍菇；液体菌种；菌丝量；产量

杏鲍菇因菇肉肥厚，口感脆嫩，具有杏仁味与鲍鱼味，深受人们的喜爱，是一种广泛进行工厂化栽培的珍稀食药用菌。

现在使用液体菌种的食用菌已有50余种[1]，而在我国工厂化生产中，金针菇使用液体菌种最多，其次是杏鲍菇。乐涛等[2]以液体菌种菌丝量为指标，从6个香菇菌株选育出1个适合袋栽的液体菌种。闫静等[3]也对秀珍菇液体菌种的选育进行过报道。马立芝等报道用液体菌种生产杏鲍菇生物学效益可达80%～100%，总产量提高4.25%[1]。相对于固体菌种而言，液体菌种有工艺简便、周期短、菌种纯、成本低等特点[4]。本研究采用摇瓶试验和出菇试验，从5个杏鲍菇菌株中筛选适合应用于生产的液体菌株。

1 材料与方法

1.1 供试菌株 5个供试菌株分别为XH、BX、GR、U5-125、U5-150，来源于上海市农业科学院食用菌研究所。

1.2 PDA母种制备 PDA斜面配方为：去皮马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂15～20 g，水1 000 mL，pH自然。

1.3 一级液体母种 培养基配方为白砂糖20 g/L，豆粕粉3 g/L，酵母浸粉2 g/L，磷酸二氢钾0.8 g/L，硫酸镁0.7 g/L。其中，豆粕粉由豆粕经粉碎机粉碎后过100目筛。装瓶量150 mL/250 mL，即250 mL摇瓶装液量150 mL。

每摇瓶接种4～5块0.5 cm2大小的PDA母种培养基。培养温度22 ℃，摇床转速140 r/min，培养7天。

1.4 液体摇瓶培养 液体摇瓶培养基配方同一级液体母种。装瓶量150 mL/250 mL，接种量为300 μL。

1.5 培养与出菇 培养料配方为木屑45%，玉米芯20%，麸皮15%，米糠15%，玉米粉5%，含水量65%～67%。栽培瓶为1 100 mL塑料瓶，装瓶量为750 g，每个处理32瓶。121 ℃灭菌2 h，冷却至25 ℃以下接种。液体菌种摇瓶培养7天，培养液中除菌球外颜色澄清，以接种量20～25 mL接入栽培瓶。栽培瓶转入培养室发菌，控制温度20～23 ℃，空气相对湿度75%，CO2浓度2 000～3 000 mL/m3（ppm，下同）。待菌丝发满整个栽培瓶5天后进行搔菌，经搔菌的栽培瓶置于温度16 ℃，空气相对湿度85%～97%，CO2浓度1000～1500 mL/m3的栽培房内倒扣培养8天出菇（栽培房的环境调控系统为荷兰AEM公司产品）。之后翻转栽培瓶，继续培养，环境条件不变。使用SPSS 19.0和Excel 2013对所获得的数据进行处理。

1.6 测定方法

（1）菌丝量生长曲线测定。液体摇瓶培养基从开始培养至出现少量菌球时（一般为第3天或第4天），每隔24 h测定一次菌丝量。测定方法为，取100 mL菌液，使用80目的无纺布过滤，反复洗涤后置于65 ℃下烘干至恒重，称重量。每次测3瓶，取平均值。

（2）菌球密度与菌球直径生长曲线的测定。吸取菌液1 mL至干净培养皿中，加适量水稀释，放入菌落计数器中，读取菌球个数与每个菌球直径，计算平均值。液体摇瓶培养基从第3天或第4天起，每隔24 h测定一次。每次测3瓶，取平均值。

（3）菌液pH变化的测定。使用赛多利斯PB-10型pH计测定菌液的pH。每隔24 h测定一次，每次测3瓶，取平均值。

（4）各个菌株发菌周期与栽培性状测定。从菌液接入栽培瓶开始，至菌丝发满整个栽培瓶，计算发满瓶所需时间。待出菇时，记录出菇时间；子实体长至菌盖伸展而边缘尚内卷时，记录子实体个数，测量并记录单菇重，单瓶产量，子实体长度，菌柄长度，菌盖直径，菌柄直径。

2 结果与分析

2.1 菌丝量生长曲线 5个菌株菌丝量生长曲线如图1所示。

微生物发酵过程中，对数期菌丝生长平衡，代谢旺盛，代时稳定，是扩大接种的最佳时期[5]，5个菌株XH、BX、GR、U5-125、U5-150对数期的时间分别是5～10天，4～8天，5～10天，5～13天，6～12天，而在对数期相同时间菌丝量从大到小依次是BX、XH、GR、U5-125、U5-150。在本试验摇瓶接种后第7天，5个菌株菌丝量分别为BX 0.93 g/mL，XH 0.58 g/mL，GR 0.4 g/mL，U5-125 0.43 g/mL，U-150 0.38 g/mL。因此，菌株BX较早进入最佳接种期，其次为XH。

2.2 菌球密度的变化 5个菌株菌球密度的变化如图2所示。

图1 五个菌株液体菌种的菌丝量生长曲线

从图2可知，菌株BX菌球密度始终较大，第7天为42 g/mL；其次是GR和XH；U5-125、U-150菌球密度较小，在第7天均为10 g/mL左右。在真菌生长过程中，随着菌丝的生长和菌球数量增加，到后期，由于菌液有一定的粘稠度与机械剪切力，菌球数目也会增多。而菌球密度越大，则接入栽培瓶时的发菌点越多，越有利于菌丝吸收营养。

图2 五个菌株液体菌种的菌球密度的变化

2.3 菌球直径的变化 5个菌株菌球直径的变化如图3所示。

图3 五个菌株液体菌种的菌球直径的变化

在发酵培养的前期，菌液发菌点较少，菌丝易集中同一点生长，使菌球变大，随着菌球密度增大，菌液的摩擦力也会增大，从而使菌球变小。菌丝球越小越利于充分吸收利用氧气与养分。5个菌株在接种期的6～9天时，菌球直径较小的是BX与XH，分别为1.66 mm与1.64 mm。

2.4 栽培周期与出菇性状 5个菌株的栽培性状如表1所示。

表1 5个菌株的栽培性状

5个菌株中，BX发菌较快，发满栽培瓶需18.1天，其次是XH，为19天；出菇时间BX较短，为12.3天；产量XH较高，为209.2 g，其次是BX；BX的子实体较长，但菌柄与菌盖较小，单菇重在5个菌株中最小，为42.1 g。在出菇过程中，BX菌株产生菇蕾最多，单瓶子实体个数为4.6个。U5-125和U5-150子实体商品性状较差，子实体短而粗，产量较低。

3 小结与讨论

在液体发酵过程中，BX菌株具有较大的菌丝量，发酵周期短，生长对数期菌球密度大，菌球直径较小，其在生产中能与栽培料充分接触，发菌较快。因此，BX比较适合发酵生产，XH次之。

发酵过程中，培养基的配方与物理性状也是重要的影响因素。适宜的碳氮比可产生更多的菌丝量，在配方相同的情况下，培养基粘稠度越大产生的菌球越多。此外，还受摇床的转速和温度等的影响。因此，选用适宜的配方与环境因子可使培养液产生更多的菌丝量，而要使菌球密度、大小更合适，尚需作进一步研究。

出菇过程中，XH的单瓶子实体产量最高，为209.2 g。因而在实际生产时，要求生产周期短的，可选用菌株BX；要求产量高的，可选用XH。此外，市场上商品菇的菇形也会影响销售，菌株BX菇形细长，U5-125与U5-150菇形粗短，XH菇形相对适中。在实际生产中，可根据市场不同的需求选用不同的菌株。

[1] 张胜友. 中国液体菌种生产新技术[M]. 武汉: 华中科技大学出版社，2010: 1-2.

[2] 乐涛. 六个香菇菌株液体菌种代料栽培的比较试验[J]. 食用菌, 2006(2): 13-14.

[3] 闫静. 秀珍菇不同菌株液体菌种比较研究[J]. 浙江农业学报, 2007, 19(2): 127-129.

[5] 蔡信之, 黄君红. 微生物学（第二版）[M]. 北京: 高等教育出版社, 2002: 152.

[4] 马立芝. 杏鲍菇液体菌种培养及贮藏工艺的研究[D]. 北京: 中国农业大学, 2005.

上海市国际科技合作基金项目（11490704300），国家星火计划项目（2012GA680001）。

王涛(1987— )，男，在读硕士，从事杏鲍菇液体菌种工厂化栽培研究，E-mail: angtao_01@foxmail.com

，E-mail: syj0@saas.sh.cn

S646

A

2095-0934（2014）02-086-03