连翘的化学成分与银翘解毒片的研究进展

王姝综述，任丽丽审校（首都医科大学燕京医学院，北京101300）

连翘的化学成分与银翘解毒片的研究进展

王姝综述，任丽丽审校（首都医科大学燕京医学院，北京101300）

连翘/化学；银翘解毒丸/化学；综述

连翘又名黄花条、连壳、青翘、落翘、黄奇丹、空壳、连苔、连翘壳等，为木樨科植物连翘的干燥果实。秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称“青翘”；果实熟透时采收，晒干，除去杂质，习称“老翘”。性苦、微寒，归肺、心、胆经，具有清热解毒、消肿散结、疏散风热的作用，临床用于痈肿疮毒、急性风热感冒、淋巴结核、尿路感染等症。主要分布在我国山西、河南、陕西、山东等省[1-5]，木樨科连翘从宋代开始沿用至今，已经成为连翘的主流商品[6]。本文主要综述连翘的化学成分及相关中成药银翘解毒片的研究进展。

1 连翘的化学成分

连翘的化学成分主要有苯乙醇苷类、木脂素类、C6～C2天然醇及其苷类、黄酮类、三萜类、挥发油及其他醌苷类和一些醇、酯、酸类化合物[5，7-8]。下面具体介绍目前已知的主要物质。

1.1 苯乙醇苷类连翘酯苷（forsythoiaside）包括连翘酯苷A、B、C、D、E、H、I，R-Forsythoside J，S-Forsythoside J，毛柳苷（salidroside），泽丁香酚苷（acteoside），calceolarioside，plantainoside，β-羟基泽丁香酚甙（β-hydroxyacetoside）[2-3，7-9]，S-suspensaside methyl ether，S-suspensaside，R-suspensaside，suspensaside B[7]。

1.1.1 连翘酯苷A——连翘的指标性成分[1]按照高效液相色谱（HPLC）法测定（填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为乙腈-0.4%冰醋酸溶液（15∶85）；检测波长为330 nm。理论板数按连翘酯苷A峰计算应不低于5 000），按干燥品计算，含连翘酯苷A（C29H36O15）不得少于0.25%[1]。

王进等[10]对叶子、果实、果梗、枝梗这些不同部位的连翘酯苷A含量进行了测定，结果发现这些部位中连翘酯苷A含量依次为：叶子、果实、果梗、枝梗。连翘叶中的连翘酯苷A含量最高（4.537%），是果实中的1.1倍、枝梗中的10.6倍、果梗的2.4倍。

秦宇等[11]对连翘进行了化学成分的分离与鉴定，采用理化和谱学分析（NMR、ESI-MS）确定结构为3，4-二羟基-β-苯乙基-O-α-L-鼠李糖基（1→6）-4-O-咖啡酰基-β-D-葡萄糖苷，即是连翘酯苷A。还采用二甲基对苯二胺自由基（DMPD+）法和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）法证明了连翘酯苷A的抗氧化活性随连翘酯苷A水平的增加而增强。

靳茂礼等[12]采用超高液相色谱指纹图谱，对不同加工方法、不同部位、不同采集地点和时间的连翘叶中的连翘酯苷A进行了定量检测，检测范围内线性关系良好，r2＞0.999 7，平均回收率为97.2%。结果显示，样品中连翘酯苷A含量均超过2010年版《中华人民共和国药典》标准。

栾兰等[13]制备HPLC，利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、薄层色谱进行分离纯化，通过理化方法和1H-NMR、13C-NMR等进行结构鉴定，与文献对照，得到的化合物9，白色粉末（甲醇-水）为连翘酯苷A。

1.1.2 连翘苷——连翘的指标性成分[1]按照HPLC法测定（填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为乙腈-水（25∶75）；检测波长为277 nm。理论板数按连翘苷峰计算应不低于3 000），按干燥品计算，含连翘苷（C27H34O11）不得少于0.15%[1]。

栾兰等[13]制备HPLC，利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、薄层色谱进行分离纯化，通过理化方法和1H-NMR、13C-NMR等进行结构鉴定，与文献对照，得到的化合物白色粉末（二氯甲烷-甲醇）为连翘苷。

黄九林等[14]采用超声波辅助法提取连翘提取液中连翘苷，HPLC法测定连翘苷的含量，结果显示，连翘苷含量由高到低依次为新叶（2.25%）、老叶（0.69%）、花（0.38%）、果实（0.37%）。

麻秀芳等[15]以山西省绛县种植的连翘为研究对象，采用HPLC指纹图谱分析8种样品，共有18个共有峰，且指纹图谱相似度均在90%以上，最后得出结论样品虽然存在来源差异，但具有较好的相关性，提示连翘宜种植在阳坡或河槽边。

1.2 木脂素类是连翘中的一类主要成分，含量较多的主要有连翘苷（phillyrin）、表松脂素（epipinoresinol）、连翘脂素（phillygenin）、表松脂素-4-β-D-葡萄糖苷、表松脂素-4′-O-葡萄糖苷、松脂素（pinoresinol）、松脂素-β-D-葡萄糖苷（pinoresinol-β-D-glucoside）、松脂素单甲醚-β-D-葡萄糖苷（pinoresinol monomethyl ether-β-D-glucoside）[2-3，7-9]、7′-epi-8-羟基松脂素、8-羟基松脂素、dimethylmatairesinol、cedrusin、forsythialanA、forsythialan B、落叶松脂素、罗汉松酯素、罗汉松苷、二甲基罗汉松酯素、牛蒡酚、牛蒡子苷[16-18]。

朴香兰等[18]综述了连翘果实中连翘苷和木脂素类组分的提取工艺及连翘苷和木脂素类组分的生物活性研究情况，为连翘木脂素的开发利用提供了参考。

1.3 C6～C2天然醇及其苷类目前分离到的有连翘醇（rengyol）、异连翘醇（isorengyol）、连翘环己醇苷A（rengyoside A）、suspenol、连翘环己醇苷C（rengyoside C）、连翘环己醇酮（rengyolone）、corno

side、连翘醇氧化物（rengyoxide）、连翘环己醇苷B（rengyoside B）、连翘酸（rengynic acid）、毛柳苷、连翘醇酯、8-O-（2-羟基乙氧基）乙基-连翘醇、连翘酸-1′-O-β-D-葡萄糖苷（rengynic acid-1′-O-β-D-glucoside）、连翘烯甙A（forsythenside A）和连翘烯甙B（forsythenside B）[7-9，19]。

1.4 黄酮类目前，黄酮类主要有：芦丁（rutin）、槲皮素（quercetin）、异槲皮素（isoquercetin）、紫云英苷（astragalin）、汉黄芩素-7-O-葡萄糖苷（wognin-7-O-glucoside）[2-3，5，7-9]。

栾兰等[13]制备HPLC法，利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、薄层色谱进行分离纯化，通过理化方法和1H-NMR、13C-NMR等进行结构鉴定，与文献对照，得到的化合物6，黄色粉末（甲醇-水）为槲皮素。

黄九林等[14]采用超声波辅助法提取连翘提取液中总黄酮，比色法测定总黄酮的含量，结果显示，总黄酮含量由高到低依次为花（2.86%）、新叶（1.62%）、老叶（1.02%）、果实（0.64%）。并推论出总黄酮是连翘花和叶抗氧化活性的主要成分。

1.5 萜类目前，萜类主要有：白桦脂酸（betulinic acid）、熊果酸（ursolic acid）、齐墩果酸（oleanolic acid）、β-香树脂醇乙酸酯（βamyrin acetate）、异降香萜烯醇乙酸酯（iso-baucerenyl acetate）、20（S）-达玛烷-24-烯-3β、20-二醇-3-乙酸酯[20（S）-dammar-24-ene-3β，20-diol-3-acetate]、3β-乙酸基-20，25-环氧达玛烷-24α-醇（3βacetyl-20，25-epoxydammarane-24α-ol）、3β-乙酸基-20，25-环氧达玛烷-24β-醇（3β-acetyl-20，25-epoxydammarane-24β-ol）、3β-乙酸基-20，25-环氧达玛烷-24-醇（3β-acetoxy-20，25-epoxy-dammarane-24-ol）[2-3，7]、20S，24S-环氧达玛烷-25-醇-3α-羟基乙酸酯等[2-3，7-9]。

栾兰等[13]通过多种色谱分离纯化，Liebermann-Burchard反应阳性，1H-NMR、13C-NMR等进行结构鉴定，与文献对照，得到的化合物2，白色簇晶（二氯甲烷-甲醇）为齐墩果酸。

1.6 挥发油挥发油主要存在于连翘种子中，果皮和种子所含化学成分基本一致，只是产地有所差异。主要有：β-蒎烯（含量最高，在4%以上）、α-蒎烯、松油烯-4-醇、水芹烯、对聚伞花烯、伞花烃、芳樟醇、莰烯、香桧烯、月桂烯、龙脑等。连翘花中有单萜、倍半萜类化合物，如桉油精、萜烯醇、α-荜澄茄油烯、丁香酚和石竹烯等，多以醇、醛、酮类化合物为主[2-3，5，7-8]。

郭丁丁[20]综述了近些年连翘中挥发油成分的研究成果，由于连翘来源不同导致挥发油成分会有一定的差别，作者总结了现代连翘挥发油提取中存在的一些问题，为进一步深入研究提供了参考。

1.7 其他目前主要有：forsythol（连翘酚）、硬脂酸、棕榈酸、β-谷甾酸、琥珀酸、丁二酸（succinicacid）、2，3-二羟甲基-4-（3′，4′-二甲氧基苯基）-γ-丁内酯、丁四醇（erythritol）、微量元素，如铜（Cu）、钴（Co）、镍（Ni）、锌（Zn）、铁（Fe）、锰（Mn）、铅（Pb）、砷（As）[3，5，8-9]及神经酰胺类化合物[21]等。

邹琼宇等[21]采用多种色谱方法（正、反相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、薄层制备色谱等）分离连翘果实的化学成分，通过ESI-MS/ MS（串联质谱）及1D-和2D-NMR（一维及二维核磁共振波谱）等波谱解析技术，分离鉴定出24种化合物。其中，首次从连翘中分离得到10种神经酰胺类化合物，其中4种化合物的结构为首次报道。

2 连翘的有效性成分/活性成分

连翘有许多活性成分使其具有不同的药理作用，如抗肿瘤、抗病毒、抗炎镇痛、抗菌、保肝护心、抗内毒素、降压、抗疲劳、镇吐止吐等[22]，引起相应药理作用的主要活性成分，目前已知的有：连翘酯苷具有抗菌、抗病毒、抗氧化、利胆、抑制弹性蛋白酶活力、免疫调节、松弛血管等药理作用[23]，还具有明显的解热作用[8]；3β-乙酸基-20，25-环氧达玛烷-24-醇、熊果酸、芦丁均具有抗炎作用[8-9]；连翘苷具有抗氧化、降血脂作用[8-9]；齐墩果酸具有轻微的强心作用[5，8-9]；连翘苷、齐墩果酸和熊果酸是连翘抗肝损伤的有效成分[5，8]；熊果酸还具有抗炎、抗肿瘤活性[8]；槲皮素具有抗人巨细胞病毒作用[24]；连翘脂素和表松脂素对人胃癌细胞株SGC7901有一定的抑制其生长作用[25]；达玛-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇[20（s）-dammar-24-ene-3β，20-diol-3β-acetate，DM]和五环齐墩果烷型三萜类化合物安博立酸（ambrolic acid，AA）对人消化道肿瘤细胞均有较好的抑制作用[26]。

3 银翘解毒片研究进展

连翘是清热解毒良药，存在于很多传统的中药复方制剂中，如双黄连口服液、清热解毒口服液、连草解热口服液、银翘解毒冲剂等[27]。下面根据2010年版《中华人民共和国药典》，简单综述近几年的银翘解毒片的研究情况。

银翘解毒片[1]处方：金银花200 g、连翘200 g、薄荷120 g、荆芥80 g、淡豆豉100 g、牛蒡子（炒）120 g、桔梗120 g，淡竹叶80 g，甘草100 g。功能与主治：疏风解表，清热解毒。用于风热感冒，症见发热头痛、咳嗽口干、咽喉疼痛。检查：应符合片剂项下有关的各项规定（附录ⅠD）。含量测定：（1）金银花，本品每片含金银花以绿原酸（C16H18O9）计，不得少于2.7 mg。（2）连翘，本品每片含连翘以连翘苷（C27H34O11）计，不得少于0.10 mg。

刘玲[28]对银翘解毒片中绿原酸的含量采用HPLC法测定，为该制剂的质量控制提供一个尝试的方法。主要方法为采用AE. Lichrom C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈∶0.4%磷酸溶液（10∶90）；检测波长为327 nm；流速控制在1.0 mL/min；室温操作。结果显示，绿原酸在10.16～101.60 μg/mL范围呈线性关系，r=0.999 8，平均回收率为98.8%，相对标准偏差（RSD）=1.0%。

王月花等[29]对银翘解毒片中绿原酸含量进行了测定，结果稳定可靠，方法准确，为银翘解毒片的质量控制提供了参考。此方法采用反相高效液相色谱法，Alltech C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；乙腈（A）-0.2%醋酸水（B）为流动相，梯度洗脱；流速1.0 mL/min；检测波长为280 nm；室温。结果显示，绿原酸的进样量在0.98～12.25 μg范围内呈线性关系（r=0.999 9），平均回收率为99.8%，RSD=0.07%。

孙增民[30]对银翘解毒片中连翘苷的含量进行了测定，定量准确，方法简便，可用于银翘解毒片的质量控制。该法采用HPLC法，C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；乙睛-水（23∶77）为流动相，检测波长为277 nm。结果显示，连翘苷在0.195 2～0.976 0 μg范围内呈线性关系，平均回收率99.7%，RSD=2.2%。

朱旭峰[31]对银翘解毒片中连翘苷的含量应用HPLC法测定，重复性好，灵敏度高，可控制银翘解毒片的质量。此方法采用高效液相色谱法测定，C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流动相为乙腈-水（25∶75），检测波长为277 nm，结果显示，连翘苷在10～100 μg/mL范围为呈线性关系，平均回收率为97.88%，RSD=1.36%（n=5）。

张宇洁等[32]对银翘解毒片中连翘苷和牛蒡苷含量采用HPLC法测定，方法准确、简便。此法采用Kromasil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%乙酸（25∶75）溶液，流速1.0 mL/min，检测波长为280 nm。结果显示，连翘苷分别在0.48～2.40 μg、牛蒡苷在0.235～1.175 μg呈良好线性关系，加样回收率分别为99.9%（RSD=1.25%），99.5%（RSD=1.13%）均得到了较好分离。

高洁等[33]对银翘解毒片中绿原酸、连翘苷和甘草酸的含量测定进行了尝试，该方法准确度高、专属性好，可用银翘解毒片的质量控制评价。该法采用反相高效液相色谱法，色谱柱为Diamonsil TMC18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长分别为326、228、252 nm，柱温30℃。结果显示，绿原酸、连翘苷、甘草酸分别在0.395 6～2.769 2 μg、0.592 8～4.149 6 μg和0.558 3～3.908 0 μg范围内呈良好线性关系，相关系数分别为0.999 1、0.999 8和0.999 9，加样回收率分别为100.5%、97.1%和99.6%，RSD分别为1.6%、2.1%和1.2%（n=6）。

目前，上市的银翘解毒中成药剂型很多，有颗粒剂、片剂、丸剂等固体剂型，也有口服液、合剂等液体剂型。2010年版《中华人民共和国药典》收录的有银翘解毒颗粒、银翘解毒片、银翘解毒丸、银翘解毒浓缩丸、银翘解毒胶囊、银翘解毒软胶囊[1]，剂型品种很多，疗效较好。但这不意味着其他单味或复方中药都能制成各种不同的剂型，都会有很好的治疗效果。贺倩等[34]应用HPLC特征图谱，比较传统方法煎煮银翘散与相关中成药制剂（银翘解毒片、银翘解毒颗粒、银翘解毒丸、银翘解毒液、银翘解毒合剂），结果发现成药虽然保留了特征峰，但指标成分量（绿原酸、连翘酯苷、牛蒡苷）均有不同程度降低，这与成药生产工艺繁琐、煎煮时间长有很大关系。由此可见，利用现代科技把传统中药制成有益剂型还是有困难的，相信在不远的将来，经过大家的共同努力，中成药发展会更进一步。

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1009-5519（2014）09-1333-03

2014-01-16）

王姝（1975-），女，北京人，讲师，主要从事药理学教学工作；E-mail：wshgfg@sina.com。