血清细胞纤维连接蛋白水平与脑出血预后的相关性分析

蒋邦文，何武金

(1.广西灌阳县人民医院，广西灌阳541600;2.桂林医学院附属医院，广西桂林541000)

脑出血是全世界病死率和致残率极高的常见病之一，其在我国致死性疾病中所占的比例亦不断升高。该病发生原因往往与脑动脉粥样硬化、高血压等有关，但至今其治疗方法及效果仍不尽如人意[1]。近年来研究发现细胞纤维连接蛋白(cFN)与心脑血管疾病有关。cFN是血管内皮的一种糖蛋白，它的水平升高可以损伤血管内皮，容易诱发脑出血。笔者探讨了脑出血患者血清cFN水平与脑出血1个月死亡的相关性以及其临床意义，现将结果报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 随机选取2012年4月—2013年2月灌阳县人民医院收治的高血压性基底节区急性脑出血患者68例为脑出血组，男48例，女37例;年龄45～85岁;入院时平均动脉压94～187 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa);格拉斯哥(GCS)评分7～13分;多田公式计算血肿量8～65 mL。选取同期健康体检人群50例作为对照组，其中男30例，女20例;年龄44～84岁。 2组间年龄、性别比较差异无统计学意义(P均＞0.05)。脑出血组患者均除外既往脑血管性疾病、使用抗凝剂、严重感染、严重心肝肾疾病及严重头部外伤史。样本采集时患者及健康人均知情同意，自愿签署知情同意书。

1.2 主要试剂及仪器 人cFN ELISA试剂盒(Cusabio公司);高速低温离心机(德国Eppendorf公司);离心管(美国Corning公司)，雪花制冰机(日本 SANYO公司);Bio－Rad 680酶标仪(Bio－Rad公司)。

1.3 实验方法 脑出血组静脉血在入院时获得，对照组静脉血体检时获得。在患者入院后次日清晨采集空腹静脉血3 mL，立即冰盒取回后4℃冰箱静置2h，4℃ 4000 r/min离心5 min，吸取血清按每管50 μL分装于5个0.5 mL离心管，与病例或对照基本情况表统一编号后，－80℃冰箱保存。按照说明书取出试剂盒内的标准品，分别按照1000，500，250，125，62.5，31.2，15.6，0 μg/L 的浓度作标准曲线;各组血清样本用样本稀释液进行1∶500倍稀释;然后将标准品与待测血清样本加于酶标板孔底部，轻轻晃动，酶标板加上覆膜，37℃孵育120 min;移去酶标板上的液体，甩干，然后每孔加生物素标记抗体工作液100 μL，37℃孵育60 min;移去孔内液体，甩干，洗板3次，每孔加200 μL洗涤液，每次浸泡2min，甩干;每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液100 μL，37℃孵育60 min;依次每孔加入底物溶液90 μL，37℃避光显色;15 min内于波长450 nm酶标仪上测量各孔的光密度(OD值)。

1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0统计学软件进行数据分析。本实验所有计量数据用均数±标准差表示，比较采用t检验;采用Logistic回归对脑出血患者死亡的危险因素进行分析;利用ROC曲线评价血清cFN浓度对脑出血患者死亡的预测价值。所有统计检验均为双侧检验，检验水准α=0.01。

2 结果

2.1 2组血清cFN浓度的比较 脑出血组血清cFN浓度为(286.91 ±59.85)μg/L，对照组为(165.94 ±38.23)μg/L，2组比较有显著性差异(t=12.529，P＜0.01)。

2.2 脑出血组1个月后死亡与非死亡病例血清cFN浓度比较 入院后1个月内死亡17例，死亡原因均为脑出血。死亡患者血清 cFN 浓度为(343.34±34.88)μg/L，非死亡患者为(268.10 ±54.47)μg/L，二者比较有显著性差异(t=5.328，P＜0.01)。Logistic回归分析显示，cFN 浓度(OR=1.23，95%CI(1.06，1.37)，P＜0.01)是脑出血死亡的独立危险因素。

2.3 ROC曲线评价血清cFN浓度对脑出血1个内月死亡的预测价值 ROC曲线显示血清cFN浓度对预测脑出血1个月内死亡有显著价值(AUC=0.882，95%CI(0.803，0.962)，P＜0.01)，且血清cFN浓度大于299.25 μg/L对预测脑出血1个月内死亡的敏感性为88%，特异性为78%。

3 讨论

随着社会生活条件的进步和改善以及人们的饮食生活方式的改变，脑血管疾病已成为现代社会严重威胁人们健康的最主要疾病[1]之一，其除了具有高病死率、致残率外，还有较高的复发率。而脑出血是脑血管疾病常见的急危重症疾病，发病率占脑卒中的10%～30%[2]，相对缺血性梗死而言，脑出血有着更高的致残率及病死率。随着医疗水平的改善，脑出血患者病死率有所降低，但脑出血所导致的疾病负担却日益增加[3]。因此研究脑出血病理损伤机制、治疗、预后，借以降低脑出血患者病死率成为目前许多学者的追求热点。研究表明，脑出血患者预后与很多因素有关，如脑血肿周围组织局部脑血流下降、脑血肿周围组织水肿、血脑屏障受损、血液分解产物释放多种生物活性物质等[4－5]。

cFN是纤维连接蛋白的一员，是一组具有多种生物活性的大分子糖蛋白，主要由肝细胞、血管内皮细胞和纤维母细胞等合成，它参与了机体的细胞连接黏附、增殖分化、上皮组织的修复及排列规律化以及机体免疫调控等多种生理活动[6]。cFN作为一个血小板整合素的配体，其功能主要参与血小板的黏附和聚集反应，使之黏附、聚集于内膜上，形成附壁血栓，从而加速止血[7]。

近年来，cFN在脑血管疾病中的作用日益受到重视，其可作为判断脑梗死病情一种敏感性很高的指标。在急性缺血性卒中患者中，cFN水平在溶栓治疗后继发出血的患者中明显升高，因而cFN可作为判断在溶栓治疗中并发出血的危险性的一种有用指标[8]。Castellanos等[9－10]研究发现急性缺血性卒中溶栓治疗后继发出血的患者血中cFn水平明显升高，出血越严重，cFN的水平也越高，cFN浓度达到或超过3.6 mg/L时，预测出血发生的准确性为100%。庄丽丽等[11]研究也发现原发性脑出血早期患者血浆cFn水平升高，且随血肿容量增加血浆cFN浓度也越高。Silva等[12]分别检测183例脑出血患者不同时间段血浆IL－6及cFN水平，发现在后继出现血肿增大和预后较差的患者中，血浆细胞因子或炎症递质的水平明显升高，cFN高于6 μg/L与颅内血肿扩大独立相关。

本研究发现cFN在脑出血患者早期显著升高，死亡患者cFN水平明显比非死亡患者增高，表明cFN显著升高是脑出血后1个月死亡的独立危险因素。此外还利用ROC曲线辨别了cFN的判定界值，对预测脑出血1个月内死亡有较高的灵敏度和特异度，提示脑出血患者血清cFN水平升高有助于早期判断脑出血患者的病死情况。脑出血患者血清中cFN明显升高的具体机制尚未明确，其原因可能有:脑血管破裂出血大多发生于患有基础病变的血管，最常见的是脑血管的细、小动脉硬化;硬化的动脉表现为平滑肌增生，内膜增厚，胶原纤维明显增多，甚至发生纤维素样坏死，血管壁出现葱皮样层状增厚，导致动脉血管管腔狭窄，当血压突然升高，病变血管易出现破裂性出血，可能通过血管增生的内皮细胞和纤维母细胞合成cFN增多，导致血清中cFN含量升高;同时颅内动脉破裂后，可产生大量炎性递质，如IL、转化生长因子等，促进血管内皮细胞和纤维母细胞合成cFN增多，使血清中cFN含量升高;另外，cFN作为一个血小板整合素的配体，当血管破裂，内皮细胞损伤释放组织因子，可刺激cFN的释放，促进其参与血小板的黏附和聚集反应，从而加速止血。而cFN在脑出血患者的发生发展过程中，其异常升高更可能是疾病发生的反馈机制形成，脑出血越严重，机体反馈刺激cFN升高更明显。因此，cFN水平可用于反映脑出血的严重程度，测定患者血清cFN含量，有助于判断脑出血患者病情严重程度，对脑出血患者死亡风险有显著的预测价值。

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