蒙药多叶棘豆中的黄酮类化学成分

孟根小，王青虎，郭玉海，奥·乌力吉*

1中国农业大学农学与生物技术学院，北京 100193;2内蒙古民族大学蒙医药学院，通辽 028300

多叶棘豆为豆科植物狐尾藻棘豆［Oxytropis myriophylla (Pall.)DC］的干燥地上部位，蒙药名为那布其热哈·乌如吐扎，配伍入蒙药清感九味丸、七雄丸、七味水银丸、萨仁嘎日迪等30 余种方剂［1，2］，治疗风疹、流感、咽喉肿痛以及痈疮肿毒和多种出血证。虽为临床常用药物，但多叶棘豆的研究鲜有报道，化学成分的研究方面，一些学者从多叶棘豆中分离提纯了黄酮类［3-5］、木酚素类［6］、三萜皂苷［7］和生物碱类［8］，但不够全面系统。为了进一步研究多叶棘豆的化学成分，充分阐明其药效物质基础，本实验经过系统的化学成分研究，分离提纯近30 个化合物，其中已鉴定10 个黄酮类化合物，分别为:4，4'-二甲氧基-6'-羟基查尔酮(1)、2'，4'-二羟基-4-甲氧基查尔酮(2)、7，8-二羟基二氢黄酮(3)、4，2'，4' -三羟基查尔酮(4)、2'，4'-二羟基二氢查尔酮(5)、4'-羟基二氢黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(6)、2'，4'-二羟基查尔酮(7)、芹菜素(8)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(9)和3'，7-二羟基-2'，4'-二甲氧基异黄烷(10)。以上化合物中1～9 均为首次从该植物中分离。

1 材料与仪器

核磁共振谱采用Bruker ARX-500 型核磁共振谱仪;分光光度计(UV-2501PC 型，日本岛津);半制备高效液相色谱仪(LC6-AD 输液泵，SPD-10Avp 检测器，SCL-10Avp 工作站);SHINADZU PRC-ODS 色谱柱(20 mm × 250 mm，15 μm)电 子 天 平(AUW220D 型，日本岛津);旋转蒸发器(RE52-2型，上海泸西分析仪器厂)。硅胶(青岛海洋化工厂，200～300 目);Sephadex LH-20(Pharmacia 公司);氘代试剂为Cambridge Isotope Laboratories，InC;柱色谱试剂均为分析纯。多叶棘豆于2013年12月由内蒙古民族大学附属医院提供，并由布和巴特尔教授鉴定为豆科狐尾藻棘豆Oxytropis myriophylla(PALL.)DC.的全草。

2 提取与分离

粉碎多叶棘豆5.0 kg，加95%乙醇50 L，回流提取3 h，滤过。药渣再用95%乙醇30 L 分两次提取，滤过，合并滤液。滤液减压回收乙醇得浸膏680.5 g。浸膏加适量水成悬浮液，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇各萃取3 次，合并提取液，减压回收溶剂得石油醚提取物143.0 g，二氯甲烷提取物117.0 g，乙酸乙酯提取物37.3 g 和正丁醇提取物153.5 g。二氯甲烷萃取部分(100 g)加150 g 硅胶(160～200 目)拌样，充分干燥，上硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-丙酮(100∶0～0∶100)梯度洗脱，250 mL 收集，洗脱液经TLC 检识合并，得6 个流分。流分1(120 mg)经Sephadex LH-20 柱色谱，以二氯甲烷-甲醇(1∶1)反复纯化，并TLC 检识得化合物5(10 mg);流分2(130 mg)以二氯甲烷-丙酮(80∶1)反复洗脱得黄色和白色两种物质，分别经反复重结晶得化合物7(12 mg)和10(5 mg);流分3(100 mg)经二氯甲烷-丙酮(60∶1)反复洗脱，得化合物1(8 mg)和2(7 mg)结晶。乙酸乙酯萃取部分(20 g)，经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇(100∶1、60∶1、40∶1、20∶1)梯度洗脱，得4 个流分。流分2(60 mg)经Sephadex LH-20 柱色谱，以二氯甲烷-甲醇(1∶1)反复洗脱，得化合物8(5 mg);流分3(80 mg)经Sephadex LH-20 柱色谱，以二氯甲烷-甲醇(1∶1)反复洗脱得黄色混合物(25 mg)，再经半制备高效液相色谱仪，以甲醇-水(49∶51)反复分离制备，得化合物3(7 mg)和4(8 mg)。正丁醇萃取部分(130 g)，经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇(100∶1、60∶1、30∶1、10∶1)梯度洗脱，得4 个流分。流分2(100 mg)经Sephadex LH-20 柱色谱，以二氯甲烷-甲醇(1∶1)反复洗脱得化合物9(9 mg)，流分3(90 mg)过滤，经半制备高效液相色谱仪，以甲醇-水(32∶68)反复分离制备，得化合物6(6 mg)。

3 结构鉴定

化合物1 鲜黄色结晶(甲醇)，紫外光下显黄色荧光，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:13.6 (1H，s，2'-OH)，3.98 (6H，s，4，4'-OCH3)，8.14 (1H，d，J=9.0 Hz，H-6')，6.37 (1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-3')，6.24 (1H，d，J=2.0 Hz，H-5')，7.78 (1H，d，J=15.5 Hz，α-H)，7.76(1H，d，J=15.5 Hz，β-H)，7.36 (2H，d，J=9.0 Hz，H-2，6)，6.93(1H，d，J=9.0 Hz，H-3，5)。13C NMR(126 MHz，DMSO-d6)δ:191.7 (-CO-)，113.1(C-1')，163.5 (C-2')，109.0 (C-3')，166.4(C-4')，103.1 (C-5')，133.2 (C-6')，117.9 (α-C)，144.5(β-C)，126.2 (C-1)，131.6 (C-2，6)，116.3 (C-3，5)，160.8 (C-4)，55.7(OCH3)。据以上数据与文献［9］对照，鉴定该化合物为4，4'-二甲氧基-2'-羟基查尔酮。

化合物2 鲜黄色结晶(甲醇)，紫外光下显黄色荧光，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:13.5 (1H，s，2'-OH)，10.1 (1H，s，4'-OH)，3.91 (3H，s，4-OCH3)，8.15 (1H，d，J=9.0 Hz，H-6')，6.35 (1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-3')，6.21 (1H，d，J=2.0 Hz，H-5')，7.75 (1H，d，J=15.5 Hz，α-H)，7.73 (1H，d，J=15.5 Hz，β-H)，7.34 (2H，d，J=9.0 Hz，H-2，6)，6.91(1H，d，J=9.0 Hz，H-3，5)。13C NMR(126 MHz，DMSO-d6)δ:192.0 (-CO-)，113.6 (C-1')，163.1 (C-2')，108.1(C-3')，166.3 (C-4')，103.4 (C-5')，133.1 (C-6')，118.3 (α-C)，144.1 (β-C)，126.0 (C-1)，131.3 (C-2，6)，116.5 (C-3，5)，161.4 (C-4)，56.9(OCH3)。据以上数据与文献［10］对照，鉴定该化合物为2'，4'-二羟基-4-甲氧基查尔酮。

化合物3 淡黄色结晶(甲醇)，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR (500 MHz，MeOD)δ:7.40 (2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，6')，7.32 (2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，5')，7.27 (1H，d，J=8.5 Hz，H-4')，5.80 (1H，d，J=8.5 Hz，H-5)，5.79 (1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6)，5.36 (1H，dd，J=13.0，3.0 Hz，H-2)，2.99 (1H，dd，J=16.5，13.0 Hz，H-3α)，2.65(1H，dd，J=16.5，2.5 Hz，H-3β);13C NMR (126 MHz，MeOD)δ:197.1 (C-4)，168.2 (C-7)，165.5(C-8)，164.7(C-9)，140.5 (C-1')，129.7 (C-3'，5')，129.6 (C-4')，127.4(C-2'，6')，103.2 (C-10)，97.4(C-6)，96.4(C-5)，80.4(C-2)，44.2(C-3)。据以上数据并与文献［11］对照，鉴定该化合物为7，8-二羟基二氢黄酮。

化合物4 鲜黄色结晶(甲醇)，紫外光下显黄色荧光，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:13.1 (1H，s，2'-OH)，10.1 (1H，s，4'-OH)，9.78 (1H，s，4-OH)，，8.11 (1H，d，J=9.0 Hz，H-6')，7.70 (1H，d，J=15.5 Hz，α-H)，7.73(1H，d，J=15.5 Hz，β-H)，7.30 (2H，d，J=9.0 Hz，H-2，6)，6.91(1H，d，J=9.0 Hz，H-3，5)，6.33(1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-3')，6.22 (1H，d，J=2.0 Hz，H-5');13C NMR(126 MHz，DMSO-d6)δ:192.0 (-CO-)，114.2 (C-1')，161.8 (C-2')，108.7(C-3')，163.1 (C-4')，103.7 (C-5')，133.0 (C-6')，117.8 (α-C)，144.7 (β-C)，126.2 (C-1)，131.8 (C-2，6)，116.1 (C-3，5)，159.8 (C-4)。据以上数据并与文献［12］对照，鉴定该化合物为4，2'，4' -三羟基查尔酮。

化合物5 白色粉末(甲醇)，紫外光下显黄色荧光，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ:12.74 (1H，s，2'-OH)，7.63(1H，d，J=8.4 Hz，H-6')，7.30 (2H，m，H-3，5)，7.23(3H，m，H-2，4，6)，6.35 (1H，d，J=2.4 Hz，H-3')，6.37(1H，dd，J=5.0，2.4 Hz，H-5')，3.24 (2H，t，J=10.0，5.0 Hz，α-H)，3.05 (2H，t，J=10.0，5.0 Hz，β-H);13C NMR(126 MHz，CDCl3)δ:203.6(CO)，165.2(C-4')，162.5(C-2')，140.8(C-1)，132.2(C-6')，128.6(C-3，5)，128.4(C-2，6)，126.3(C-4)，113.9(C-1')，107.7(C-5')，103.6 (C-3')，39.70 (α-C)，30.3 (β-C)。据以上数据并与文献［13］对照，鉴定该化合物为2'，4'-二羟基二氢查尔酮。

化合物6 淡黄色粉末(甲醇)，易溶于甲醇和乙醇，盐酸-镁粉反应阳性，Molish 反应为阳性，提示该化合物为黄酮苷。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:7.51(1H，d，J=8.5 Hz，H-5)，6.39 (1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6)，6.16 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，7.33 (2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，6')，6.71 (2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，5')，5.36 (1H，dd，J=13.0，3.0 Hz，H-2)，3.01 (1H，dd，J=16.5，13.0 Hz，H-3α)，2.49 (1H，dd，J=16.5，3.0 Hz，H-3β);13C NMR(126 MHz，DMSO-d6)δ:79.3 (C-2)，43.9 (C-3)，190.4 (C-4)，128.5 (C-5)，112.0 (C-6)，165.1(C-7)，103.3 (C-8)，162.8 (C-9)，111.0 (C-10)，130.8 (C-1')，127.1 (C-2'，6')，113.4 (C-3'，5')，159.1 (C-4')。糖的碳信号δ:100.1 (C-1'')，75.1(C-2'')，76.8 (C-3'')，70.2 (C-4'')，77.4 (C-5'')及61.8 (C-6'')，提示该糖是葡萄糖，并且在1H NMR 谱中给出了端基质子信号δ 5.01 (1H，d，J=6.5 Hz)，显示为β 糖苷键。在HMBC 谱中端基质子信号δ 5.01 (1H，d，J=6.5 Hz)与165.1 (C-7)相关，说明葡萄糖连接在7 位。其数据与文献［14］基本一致，故鉴定该化合物为4'-羟基二氢黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物7 黄色粉末(甲醇)，紫外光下显黄色荧光，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR (500MHz，CDCl3)δ:13.36(1H，s，2'-OH)，7.57 (1H，d，J=15.5 Hz，α-H)，7.89 (1H，d，J=15.5 Hz，β-H)，7.68 (2H，m，H-3，5)，7.45 (3H，m，H-2，4，6)，7.84 (1H，d，J=8.4 Hz，H-6')，6.45 (1H，dd，J=8.4，2.4Hz，H-5')，6.43 (1H，d，J=2.4 Hz，H-3');13C NMR(126 MHz，CDCl3)δ:192.0(CO)，166.5(C-2')，162.7(C-4')，144.7(β-C)，134.7(C-1)，132.1 (C-6')，130.8 (C-4)，129.0 (C-2，6)，128.6(C-3，5)，120.3(α-C)，114.6 (C-1')，107.8(C-5')，103.8(C-3')。其数据与文献［13］基本一致，故鉴定该化合物为2'，4'-二羟基查尔酮。

化合物8 黄色结晶(甲醇)，盐酸-镁粉反应阳性，推测为黄酮类化合物。在1H NMR (500 MHz，DMSO-d6):δ 6.77 (1H，s，H-3)，6.18 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.46 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，7.90(2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，6')，6.93 (2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，5')，12.90 (1H，s，5-OH)。其数据与文献［15］中谱学数据基本一致，故鉴定为芹菜素。

化合物9 淡黄色粉末(甲醇)，盐酸-镁粉反应阳性，Molish 反应为阳性，提示该化合物为一黄酮苷。1H NMR (500 MHz，DMSO-d6)δ:12.96(1H，s，5-OH)，6.85(1H，s，H-3)，6.46(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.87 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，7.95 (2H，d，J=9.0 Hz，H-2'，6')，6.95 (2H，d，J=9.0 Hz，H-3'，5')，5.17(1H，d，J=9.0 Hz，H-1'')，3.29(3H，m，J=9.0 Hz，H-2''，3''，5'')，3.81(1H，d，J=9.0 Hz，H-4'');13C NMR (126 MHz，MSO-d6)δ:164.2(C-2)，102.9(C-3)，181.9(C-4)，161.3(C-5)，99.3(C-6)，162.5(C-7)，94.6(C-8)，156.8(C-9)，105.3(C-10)，120.7(C-1')，128.5(C-2'，6')，161.0(C-4')，115.9(C-3'，5')，99.3(C-1'')，71.5(C-2'')，72.8(C-3'')，74.7(C-4'')，76.0(C-5'')，170.5(6''-COOH)。其数据与文献［16］中谱学数据基本一致，故鉴定为芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。

化合物10 白色粉末(甲醇)，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR (500 MHz，CDCl3)δ 6.96(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，6.80(1H，d，J=8.7 Hz，H-6')，6.47(1H，d，J=8.7 Hz，H-5')，6.40(1H，dd，J=11.8，2.4 Hz，H-6)，6.38(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，4.35(1H，d，J=1.5 Hz，H-2)，4.07(1H，t，J=10.0 Hz，H-2)，3.95(3H，s，OCH3)，3.87(3H，s，OCH3)，3.55(1H，m，H-3)，3.03 (1H，dd，J=16.1，10.3 Hz，H-4)，3.01 (1H，ddd，J=16.1，12.1，1.7 Hz，H-4);13C NMR (126 MHz，CDCl3)δ 155.2(C-7)，154.9(C-9)，151.1(C-4')，147.5(C-3')，135.4(C-2')，130.4(C-5)，121.8(C-6')，120.3(C-1')，114.8(C-10)，107.9(C-6)，103.7(C-5')，103.2(C-8)，69.7(C-2)，61.0(OCH3)，55.8(OCH3)，32.1(C-3)，30.2(C-4)。其数据与文献［17］基本一致，故鉴定为3'，7-二羟基-2'，4'-二甲氧基异黄烷。

1 Luobusang (罗布桑).Mongolian pharmacy (蒙药学).Huhhot:Inner-Mongol people publishing house，2006.196.

2 Zhao WD continuing study course of Mongolian medicine(昭乌达盟蒙药进修班).Mongol Em Nairalgin Emhidgel(蒙医药方汇编).Shenyang:Liaoning People's Publishing House，1977.62-64.

3 Lu JH，Liu Y，Zhao YY，et al.New flavonoids fromOxytropis myriophylla.Chem Pharm Bull，2004，52:276-278.

4 She GM，Sun FF，Liu B.Three new flavonoid glycosides fromOxytropis myriophylla.J Nat Med，2012，66:208-212.

5 She GM，Wang S，Liu B.Dihydrochalcone glycosides fromOxytropis myriophylla.Chem Cent J，2011，5:71-73.

6 She GM，Sun FF，Liu Bin.A new lignan fromOxytropis myriophylla.Nat Prod Res，2012，26:1285-1290.

7 Okawa M，Yamaguchi R，Delger H，et al.Five triterpene glycosides fromOxytropis myriophylla.Chem Pharm Bull，2002，50:1097-1099.

8 Kojima K，Purevsuren S，Narantuya S，et al.Alkaloids fromOxytropis myriophylla(Pall.)DC.Sci Pharm，2001，69:383-388.

9 Jiao J(焦姣)，Sun H(孙慧)，Lan J(兰杰)，et al.The fungicidal constituents' extraction，isolation and determination onAmorpha fruticosaL.Agrochemicals，2012，51:491-493.

10 Achenbach H，Stoecher M，Constenla MA.Constituents of tropical medicinal plants.Part31.Flavonoid and other constituents ofBauhinia manca.Phytochemistry，1988，27:1835.

11 Eun-Ryeong H，Seyeon P，Chul-Hak Y.7，8-dihydroxyflavanone as an inhibitor for Jun-Fos-DNA complex formation and its cytotoxic effect on cultured human cancer cells.Nat Produ Res，2003，17:431-436.

12 Wang CF(王彩芳)，Li JP(李俊平)，Li RR(李娆娆)，et al.Structural elucidation of three flavonoids extracted from the Rhizomes ofLigularia vellereabyNMR spectroscopy.Chin J Magn Res(波谱学杂志)，2009，2:264-271.

13 Lv F(吕芳)，Xu XJ(徐筱杰).Studies on flavonoids ofOxytropis falcata.Chin J Chin Mater Med(中国中药杂志)，2007，4:318-320.

14 Xie X(谢雪)，Zhang HD(张宏达)，Chen YZ(陈昱竹)，et al.Chemical constituents and activities of total flavonoids from Yushen Tang.Chin J Chin Mater Med(中国中药杂志)，2012，37:3585-3590.

15 Gao W(高雯)，Shen Y(沈阳)，Zhang HJ(张红军)，et al.The chemical constituents ofPotentilla chinensis.Pharm Care Res(药学服务与研究)，2007，7:262-264.

16 Fathiazad F，Mazandarani M，Hamedeyazdan S，et al.Phytochemical analysis and antioxidant activity ofHyssopus officinalisL.from Iran.Adv Pharm Bull，2011，1(2):63-67.

17 Li ZJ(李志军).Studies on the chemical ofOxytropis myriophylla(Pall.)DC.Zhengzhou:Henan University，MSc.2010.