阴道分泌物常规镜检与五联检法联合应用的分析评价

温立娟

(肥城矿业中心医院检验科，山东肥城271608)

阴道分泌物常规镜检与五联检法联合应用的分析评价

温立娟

(肥城矿业中心医院检验科，山东肥城271608)

目的探讨阴道分泌物常规镜检与五联检联合应用价值及结果不符原因分析。方法收集妇科门诊982份阴道分泌物标本，同时采用常规镜检与五联检进行乳酸杆菌、白细胞、BV、念珠菌、滴虫检测，并进行结果比较。结果五联检乳酸杆菌、白细胞、BV、念珠菌、滴虫的阳性检出率分别为：14.5%、38.7%、21.2%、16.6%、10.1%；常规镜检乳酸杆菌、白细胞、BV、念珠菌、滴虫的阳性检出率分别为：17.0%、37.4%、14.2%、18.3%、8.4%；两种方法阳性率比较，乳酸杆菌、BV、滴虫检测差异有统计学意义(P＜0.05)；五联检与两种方法联合应用阳性检出率比较χ2=118，P＜0.05，差异有统计学意义。结论为了弥补常规镜检与五联检各自的缺点，应将两种方法联合应用，提高检出率，防止漏检。

阴道分泌物；乳酸杆菌；白细胞；BV；念珠菌；滴虫

阴道分泌物为女性生殖系统分泌的液体，主要由阴道黏膜渗出液、宫颈腺体及子宫内膜分泌混合而成，又称白带。阴道疾病是妇女的常见病、多发病[1]。检查阴道分泌物国内大多实验室用简单快速的常规显微镜法，但报告的准确性受限于检测人员的工作经验和技术水平影响，主观性强，漏诊率高；近年来，国内外不少作者，研究报道用酶学[2]的方法检测阴道分泌物，通过检测过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸苷酶、脯氨酸氨基肽酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶及pH值互补甚至替代常规镜检的乳酸杆菌、清洁度(白细胞)、线索细胞，念珠菌、滴虫的检测，但经过多年的临床实践结果表明五联检法也存在假阳性、假阴性问题，因此，本文对两种方法的检测结果进行比较，将不符结果分析讨论，并进一步探讨两种方法联合应用的价值，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源2013年12月6日至2014年4月12日来我院妇科门诊就诊的患者982例，年龄17～63岁，由妇科门诊医生用无菌棉拭子采取阴道后穹窿分泌物，采取后立即送检。

1.2 试剂五联试剂盒由郑州安图绿科公司生产。

1.3 检测方法取同一份阴道分泌物标本，分别用显微镜法和五联检试剂盒检测，五联检法严格按照试剂盒说明书操作，检测pH值、过氧化氢酶、白细胞酯酶、唾液酸苷酶、脯氨酸氨肽酶以及N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶。镜检法直接将阴道分泌物涂湿片在显微镜下观察白细胞、滴虫、念珠菌，然后将片子进行革兰染色观察乳酸杆菌、线索细胞。

1.4 结果判断显微镜镜检：乳酸杆菌≥6个/HPF革兰阳性长杆菌为阳性(+)、＜6个/HPF为阴性(-)；BV以每视野线索细胞≥20%为阳性(+)，线索细胞＜20%为阴性，并进行Nugent评分，确认细菌性阴道炎[3];显微镜镜检念珠菌，以高倍镜下看到念珠菌属孢子和菌丝为阳性(+)，未看到为阴性(-)湿片镜检：白细胞每视野≥15个/HP为阳性(+)，＜15个/为阴性(-)；滴虫看到为阳性(+)，未见到为阴性(-)。

1.5 统计学分析率的比较采用卡方检验,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法检出率比较五联检乳酸杆菌、白细胞、BV、念珠菌、滴虫的阳性检出率分别为：14.5%、38.7%、21.2%、16.6%、10.1%；常规镜检乳酸杆菌、白细胞、BV、念珠菌、滴虫的阳性检出率分别为：17.0%、37.4%、14.2%、18.3%、8.4%；两种方法阳性率比较，在乳酸杆菌、BV、滴虫检测中，差异有统计学意义(P＜0.05)，在白细胞、念珠菌检测中，两种方法比较，差异无统计学意义P＞0.05，见表1。

表1 两种方法检出率比较[n(%)]

2.2 五联检与两种方法联合检测结果对比五联检检出阳性标本共531例(重复阳性不计)阳性率为54.1%(531/982)，两种方法联用检出阳性标本667例(重复阳性不计)阳性率为67.9%(667/982)，两种方法相比，有统计学意义，(χ2=118，P＜0.05),阳性符合率76.9%(521/677)，阴性符合率66.1%(305/ 461)总符合率84.1%(826/982)，见表2。

3 讨论

982例阴道分泌物经两种方法显示：在白细胞、BV、滴虫检测中五联检阳性检出率高于常规镜检法，乳酸杆菌、念珠菌的检测五联检阳性率低于常规镜检。

表2 五联检与两种方法联用对比

乳酸杆菌属是妇女阴道内正常菌群的优势菌，对阴道微生态平衡起到重要的调节作用，常见的种属有卷曲乳杆菌，詹氏乳杆菌和格氏乳杆菌等。95%的乳酸杆菌能产生过氧化氢，阴道中产高水平过氧化氢乳酸杆菌的存在能减少子宫上行性感染的发生率。五联检用酶学的方法检测阴道分泌物，用过氧化氢来表示分泌物中乳酸杆菌的多少，阴性说明乳酸杆菌多，阳性则提示阴道环境处于病理或亚健康状态，本研究中乳酸杆菌的检出率低于常规镜检染色，差异有显著性(P＜0.05)，其中有6例镜检染色见到乳酸杆菌而五联检提示不产生过氧化氢，无乳酸杆菌存在，这与部分乳酸杆菌不产生过氧化氢有关[4]，2例镜检未见到乳酸杆菌而五联检检测出过氧化氢，检测卡第1孔变红标记为阴性，提示含有大量乳酸杆菌存在，同时唾液酸苷酶孔和乙酰氨基葡萄糖苷酶孔变色，这时可以结合镜检情况排除过氧化氢孔假阴性问题。

本研究中五联检检出BV的检出率高于常规镜检，两种方法差异有显著性(P＜0.05)。五联检法是通过唾液酸苷酶活性和脯氨酸酶活性来检测BV，其影响因素较多，其中血性物质在脯氨基肽酶作用下产生胺类物质而使结果出现假阳性，从而使血性标本的BV检出率假性增高[5]影响检出率。线索细胞是诊断细菌性阴道病的重要指标[6]，镜检线索细胞血性标本是不受影响的，所以血性标本应做镜检。

白细胞酯酶为多形核白细胞释放的酯酶，在正常情况下难以检测，当人体发生炎症反应时，多形核白细胞的趋化性在炎症病灶聚集而大量释放酯酶，只有在炎症情况下(WBC：104/ml)，炎症白细胞才有可能检测到，有研究报道，妇女子宫颈和阴道黏膜发生炎症反应时，白细胞酯酶活性会升高，而且其颜色深度与活性成正相关[7]。在镜下看到大量的白细胞为感染的初期，待中性粒细胞吞噬了足量的病菌后LE测试块才显示阳性，一般为感染的中后期此时镜下的白细胞较少，易漏检，因此LE生化检测与镜检相比有一定优势，镜检无法反映炎症各期变化，五联检阳性率高于湿片镜检，但无显著差别，其中有17例标本五联检阳性，而湿片阴性，是多形核细胞破坏、崩解镜检不能检测所致，因此为了避免此现象两种方法联合检测达到不漏检的目的。

念珠菌和滴虫判别是通过乙酰氨基葡萄糖苷酶结合pH来判断的，该指标的阳性率略低于镜检法主要有以下原因：11例标本为带血标本，五联检以试纸颜色的变化来判断阴阳性，带血标本影响结果判断；6例镜检发现念珠菌而五联检为阴性，主要因为有些种类念珠菌不具有酶活性[8]，利用特异性酶检测念珠菌，存在部分种类念珠菌漏检现象[9]，结合以上原因该指标在镜检与五联检两者结合互补情况下才能更好指导临床。

滴虫需在25～42℃的液体活动,显微镜湿片法易受标本取样后保存时间和温度的影响，检出率与季节有关[10]，而五联检法不受分泌物标本温度和离体时间的影响，可以弥补镜检在温度低和时间长时检出率下降的缺点。

经以上分析可知，两种方法各有利弊，单一的常规镜检或五联检法不能反映阴道病的真实感染情况，因此进一步研究将两种方法联合进行检验与五联检对比，五联检法阳性检出率为54.1%，两种方法联合应用阳性检出率为67.9%，两组比较差异有统计学意义(χ2=118,P＜0.05)，综上所述，常规镜检对人员经验要求高，从形态学上鉴别存在主观性强等缺点，五联检客观、科学、快速存在一定假阳性、假阴性，对标本要求高，不能混入血液、精子等，两者同时检测具有一定互补性，可提高阳性检出率，避免漏检。

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R446.19，R711.31

A

1674-1129(2014)05-0598-03

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10.3969/j.issn.1674-1129.2014.05.047

2014-06-23；

2014-07-14)