非罗氏配套肌酐试剂在罗氏Modular DP生化分析仪上的性能评价

施建丰，姚孝明，颜巍，周竞，张静，张家明

(江苏省中西医结合医院，江苏南京210028)

非罗氏配套肌酐试剂在罗氏Modular DP生化分析仪上的性能评价

施建丰，姚孝明，颜巍，周竞，张静，张家明

(江苏省中西医结合医院，江苏南京210028)

目的评价非配套血清肌酐检测试剂在罗氏Modular DP全自动生化分析仪上的分析性能。方法按美国临床实验室标准化协会(CLSI)的指南文件EP-5A2，EP-6A2，EP9-A2，EP-7A2的要求，对非罗氏配套肌酐试剂在罗氏Modular DP全自动生化分析仪上进行精密度、线性范围、与罗氏配套肌酐试剂比对、干扰性能进行验证，利用卫生部室间质量评价结果对检测准确度进行评价。结果批内精密度小于1/4允许总误差(TEa)、总精密度小于1/3TEa；40份患者标本比对相关系数r= 0.9992，在医学决定水平偏倚小于1/2TEa；2013年3个批次卫生部室间质量评价成绩均为100分，总平均偏倚小于1/2TEa；线性范围、干扰性能均与厂商声明的性能指标相符。结论非配套血清肌酐检测试剂在罗氏Modular DP全自动生化分析仪上的主要分析性能能够符合质量目标要求。

非配套试剂；精密度；准确度；线性范围；干扰；比对

为确保临床实验室检验结果的准确和可靠，向临床诊断和治疗提供可靠依据，临床实验室应在更换检测系统或仪器(相同或不同的型号)、增加新项目、改变检测试剂盒的供应商、在对检测系统进行任何变动时，均应在实验室出具临床检验结果前，对检测系统的分析性能进行评价，只有符合实验室质量目标要求和/或符合产品制造商声明的性能指标，该检测系统才能应用于临床。ISO15189: 2012《医学实验室-质量和能力的专用要求》中也明确要求申请认可的实验室应对设备、检测系统或方法的主要分析性能进行验证，证实其能够达到临床检测所要求的标准。本文依据美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)指南等文件的要求对世诺公司血清肌酐检测试剂在罗氏Modular DP全自动生化分析仪上的精密度、准确度、线性范围、与罗氏配套肌酐试剂比对、干扰性能进行评价。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器罗氏Modular DP全自动生化分析仪

1.1.2 试剂肌酐试剂(酶法)：CRE-R1(罗氏公司试剂，批号：64481701)；CRE-R2(罗氏公司试剂，批号：64657301)；CRE-S(世诺公司试剂，批号：K132)。

1.1.3 校准品罗氏C.fas(批号：15869001)，肌酐标准液(世诺公司，批号：A110)。

1.1.4 质控品朗道709UN和498UE。

1.1.5 线性物质高值肌酐水溶液(世诺公司提供)。

1.1.6 干扰物质抗坏血酸、游离胆红素、结合胆红素、血红蛋白、乳糜微粒、肌酸(世诺公司提供)。

1.1.7 标本收集日常工作中40份病人混合血清，用于干扰试验；另收集40份病人血清，要求浓度范围覆盖线性范围备用。

1.2 方法

1.2.1 精密度验证参考CLSIEP5-A2[1]文件，选择朗道709UN和498UE两个水平的质控品，连续检测20天，每天的室内质控均在控状态下进行批内精密度、总精密度的评价。

1.2.1.1 批内精密度选用709UN和498UE两个浓度质控品，两个浓度质控品各重复测定20次，计算SD(标准差)、CV(变异系数)值。

1.2.1.2 总精密度选用709UN和498UE两个浓度质控品，每天分别检测2批，批间间隔时间不小于2h，每批做双份测定，连续测试20d，计算SD(标准差)、CV(变异系数)值。

1.2.1.3 判定标准批内精密度小于1/4TEa、总精密度小于1/3 TEa，肌酐允许总误差12%[2]。

1.2.2 线性范围验证参考CLSI EP6-A2[3，4]文件，选取高值肌酐溶液(H)和低值血清(L)各一份，按照5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L方式配制成6个浓度肌酐样品，每个浓度样品重复检测2次，取均值，按CLSI EP6A2方案进行多项式回归分析。本实验室规定精密度和非线性允许误差限分别为4%和4%。

1.2.3 干扰试验

1.2.3.1 干扰试验方法参考CLSI EP7-A2文件，采用添加干扰物法[5]，通过比较添加干扰物的实验样本和无添加干扰物的实验样本，评价干扰物对检测的影响程度。

收集混合血清3ml，该血清肌酐浓度接近医学决定水平，将混合血清各取1.35ml加入2ml样品杯中，记号笔标记两样品杯分别为A，B；A样品杯中加入0.15ml生理盐水配制成无添加干扰物原液A，B样品杯中加入0.15ml高浓度干扰物配制成添加干扰物原液B；干扰物浓度梯度按照表1配制；各干扰样本双份检测，结果取均值。以样本1(无添加干扰物)浓度为100%，其他样本浓度与样本1进行比较，分析随添加干扰物浓度逐渐增加检测受影响情况。见表1。

表1 干扰物梯度浓度配制表(μl)

1.2.3.2 结果判断抗坏血酸浓度2g/L、游离胆红素浓度200mg/L、结合胆红素浓度200mg/L、血红蛋白浓度5g/L、乳糜浊度3000、肌酸浓度300mg/L时，对检测结果的影响小于5%。

1.2.4 比对试验

1.2.4.1 比对试验方法按EP9 A2[6，7]文件中肌酐项目浓度分布范围要求，选取40份各浓度范围分布的病人血清。实验分5d进行，每天测试8份血清，每份血清双份检测，按照样品顺序号1→8，8→1顺序检测。结果输入Excel计算表格，X轴为参比系统(罗氏原装系统)结果，Y轴为待评系统(世诺试剂罗氏仪器检测系统)结果，对结果进行线性回归统计，得到相关系数r，要求r大于0.975，认为样本浓度范围合适，得到线性回归方程Y=bX+a，其中b、a分别表示两种方法间的比例误差和恒定误差。根据临床使用要求，可在各个临床决定水平浓度Xc处，了解Y方法引入后相对于X方法的系统误差SE，SE=|Yc-Xc|=|(b-1)Xc+a|。

1.2.4.2 判断标准由方法学比对评估的系统误差SE或相对偏差≤1/2TEa，认为两个系统间的系统误差属临床可接受水平。

1.2.5 准确度

1.2.5.1 方法采用简易评价方案[8]，利用卫生部临床检验中心室间质量评价的结果评价检测准确度。平均偏倚为每份样品偏倚绝对值取均值。

1.2.5.2 判断标准必须为成功的EQA，且平均偏倚≤1/2TEa。

2 结果

2.1 精密度试验批内精密度小于1/4 TEa、总精密度均小于1/3TEa，符合质量要求。见表2。

表2 精密度试验结果

2.2 线性范围试验

2.2.1 离群值检验实验结果SD为2.85μmol/L，CVD为0.28%，小于4%允许限，数据可用于线性评价。

2.2.2 多项式回归分析结果二次的非线性系数b2为0.27，小于非线性系数判断限2.262；三次方程的非线性系数b2为1.140、b3为-0.080，小于非线性系数判断限2.306，都不是显著的，曲线是线性的。

2.3 干扰试验抗坏血酸浓度2g/L、游离胆红素浓度200mg/L、结合胆红素浓度200mg/L、血红蛋白浓度5g/L、乳糜浊度3000、肌酸浓度300mg/L时对肌酐检测的结果有干扰，干扰造成的|偏倚|均≤5%，可接受。见表3。

2.4 比对试验经回归分析，两组结果相关系数r= 0.9992，大于0.975，回归方程y=0.9979x+0.2984，符合要求；在2个医学决定水平检测结果的误差也在可接受范围。见表4。

2.5 准确度验证2013年本实验室肌酐项目3个批次卫生部室间质量评价成绩均为100分，为成功的EQA。全年的平均偏倚为2.60%，≤1/2 TEa，符合质量目标要求。见表5。

3 讨论

精密度是指重复检验结果间的一致性，通过批内、批间和总精密度反映检测系统的重复性性能。精密度是检测系统的首要性能指标，是进行其他方法学验证的前提。EP5-A2是临床化学设备和检测系统精密度评价方案，实验结果表明非配套试剂在MODULAR DP模块上的精密度能达到质量目标的要求。在确认检测系统的精密度符合要求的基础上，我们还依据美国临床实验室标准化协会(CLSI)的指南文件对非配套肌酐试剂的线性范围，与罗氏配套试剂比对，干扰试验等基础性能进行了评价，采用卫生部临床检验中心室间质量评价结果评估了实验的准确度，建立了适合本实验室评估开放试剂应用于MODULAR DP模块的系统的性能评价方法。

实验结果表明，高质量的非配套试剂在精密度是能够到达质量目标的，线性范围、抗干扰性能也能符合制造商的声明，通过比对实验实现量值的溯源性传递，是能够实现结果准确这个最终目标的。本方法的建立既为我们选择适合本检测系统、能够满足质量要求的开放试剂提供了实验根据，也符合我国目前的现状，有利于节约实验室资源。

表3 干扰试验结果

表4 医学决定水平误差分析结果

表5 2013年肌酐项目卫生部室间质评结果

[1]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of Precision Performance of Quantitative MeasurementMethods;Approved Guideline-Second Edition[S].EP5-A2,CLSI,2004.

[2]中华人民共和国卫生部.中华人民共和国卫生行业标准WS/ T403-2012-临床生物化学检验常规项目分析质量目标[S].北京:卫生部临床检验标准专业委员会,2012.

[3]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures;Approved Guideline-Second Edition[S].EP6-A2,CLSI,2003.

[4]吕赛平,邹学森.定量检测系统线性评价方法—EP6-A法[J].实验与检验医学,2009,27(3):303-304.

[5]Clinical and Laboratory Standards Institute.Interference testing in clinical chemistry;approved guideline-second edition[S].EP7-A2, CLSI,2005.

[6]Clinical and Laboratory Standards Institute.Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;approved guidelinesecond edition[S].EP9-A2,CLSI,2002.

[7]陈先荣,李智,刘一平.NCCLSEP9-A文件在全自动生化分析仪评价中的应用[J].实验与检验医学,2010,28(4):407-408.

[8]许斌.医院检验科建设管理规范[M].第2版.南京:东南大学出版社,2013:232-233.

R446.11+2

A

1674-1129(2014)05-0549-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.05.022

2014-07-10；

2014-08-05)