改良离心柱法检测ALP-L3在原发性肝细胞癌诊断中的应用研究

肖九长，谢海燕，肖小惠

(赣州市人民医院、南昌大学附属赣州医院检验科，江西赣州341000)

改良离心柱法检测ALP-L3在原发性肝细胞癌诊断中的应用研究

肖九长，谢海燕，肖小惠

(赣州市人民医院、南昌大学附属赣州医院检验科，江西赣州341000)

目的探讨甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在诊断原发性肝细胞癌中的临床意义。方法选择原发性肝细胞癌(HCC)患者117例、肝硬化患者46例、慢性肝炎患者58例，采用改良离心柱法分离血清AFP-L3，电化学发光法检测甲胎蛋白(AFP)和AFP-L3，并计算AFP-L3与AFP含量比值[AFP-L3/AFP(%)]，以比值≥10%作为阳性判断标准，分析AFP-L3(%)水平与原发性肝细胞癌的关系。结果HCC患者血清中AFP-L3(%)明显高于其它肝病患者(P＜0.001)，灵敏度为83.8%；不同浓度AFP的HCC患者之间，AFP-L3(%)的浓度差异无统计学意义，但随着AFP浓度的升高，AFP-L3的阳性率也逐惭升高。结论改良离心柱法检测AFP-L3对HCC和良性肝病的诊断具有重要意义，尤其是在低浓度AFP的原发性肝细胞癌和良性肝病的鉴别诊断方面。

原发性肝细胞癌；甲胎蛋白异质体；改良离心柱法

原发性肝细胞癌(HCC)是我国常见恶性肿瘤之一，死亡率高，死亡率居恶性肿瘤的第二位，占全世界肝癌死亡人数的45%。HCC的实验室诊断指标以AFP的特异性和敏感性最高，通常认为AFP大于400 ng/ml可以诊断为HCC，但阳性率约为64%[1]，而且部分肝炎、肝硬化、孕妇、转移性肝癌等也可测出小量AFP，少数病例甚至大于400 ng/ml。AFP异质体或称AFP亚型，为肝细胞癌所特有，本研究通过改良离心柱法分离AFP-L3，并用电化学发光法检测221例原发性肝细胞癌、肝硬化、慢性肝炎患者的AFP及AFP-L3，以探讨AFP-L3在HCC诊断及鉴别诊断中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料2011年12月至2013年6月的本院住院患者和门诊患者，包括原发性肝细胞癌患者117例，确诊符合国家卫计委《原发性肝细胞癌诊疗规范(2011年版)》的诊断标准，男77例，女40例，年龄31～74岁，平均55岁；肝硬化患者46例，男34例，女12例，年龄26～67岁，平均48岁；慢性肝炎患者58例，男41例，女17例，年龄24～62岁，平均43岁；肝硬化及慢性肝炎患者经临床结合检验、影像、病理等进行诊断。另外，选择本院健康体检者40名，男30例、女10例，年龄20～58岁，排除心、肝、肺、肾功能异常。

1.2 标本采集采集受检者空腹静脉血3ml分离血清待检。

1.3 检测方法AFP-L3的分离采用改良微量离心柱法，试剂盒由北京热景生物技术有限公司提供，分离AFP-L3时严格按照试剂盒中操作说明书进行。最后离心洗脱后获得的AFP-L3及患者血清总AFP，使用罗氏公司Cobas e601电化学发光仪及该公司生产的配套试剂盒[国食药监械(进)字2011第3401508]进行检测，并计算AFP-L3占总AFP的百分比，以AFP-L3/AFP(%)≥10%作为AFP-L3异常升高标准。

1.4 统计学分析用SPSS11.5软件进行统计分析，计量资料以(x±s)表示，计数资料χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组患者AFP-L3检测结果原发性肝细胞癌组血清中AFP-L3(%)明显高于肝硬化组和慢性肝炎组(P＜0.01)；原发性肝细胞癌组AFP-L3(%)阳性率明显高于肝硬化组和慢性肝炎组(P＜0.001)；AFP-L3(%)诊断HCC的敏感性为83.8%，见表1。

2.2 原发性肝细胞癌患者不同AFP浓度的AFPL3测定结果比较见表2。

3 讨论

甲胎蛋白是一种单链糖蛋白，在凝胶电泳中具有不同的迁移率，依其分子在糖链部分的不同亚结构，甲胎蛋白可分为AFP-L1、AFP-L2、AFPL3，这种分子结构上的差异可通过与外源性植物凝集素亲和力的不同将其检出。目前AFP-L3的检测方法有免疫交叉电泳技术、亲和印迹法、植物凝集素亲和层析等，但上述方法由于技术要求较高、操作繁琐、试剂昂贵等，限制了它们在临床上的使用。本研究采用国产的微量凝柱法试剂，结合罗氏电化学发光检测方法，可以快速、简便、经济地获得AFP、AFP-L3的含量及AFP-L3与AFP比值。

表1 各组患者AFP-L3检测结果比较

表1 各组患者AFP-L3检测结果比较

注：与原发性肝细胞癌相比，*P<0.001。

组别总例数AFP-L3阳性例数阳性率(%)原发性肝细胞癌肝硬化慢性肝炎健康体检者117 46 58 40 19.52±10.25 9.24±4.84*7.45±4.21*4.15±4.85*98 660 83.8 13.0*10.3*0

表2 原发性肝细胞癌患者不同AFP浓度的AFP-L3测定结果比较

表2 原发性肝细胞癌患者不同AFP浓度的AFP-L3测定结果比较

注：各组间比较，*P>0.05，**P<0.001。

组别(ng/ml)总例数AFP-L3阳性例数阳性率(%)≥400 200～400≤200合计66 28 23 117 19.94±11.74*18.26±10.69*17.25±9.76*66 21 11 98 100**75**47.8**

肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在恶性肿瘤中的死亡率排第三，仅次于胃癌和肺癌，我国每年因患肝癌死亡的人数占全世界肝癌死亡人数的40%，是一种严重威胁人民生命健康的疾病[2]。肝癌起病隐匿，癌细胞形成到发展成有自觉症状，约需2年，在此期间，患者可无任何症状和体征，相当部分患者是在肝病随访或健康体检的时候，通过影像法如B超、CT偶然发现的。患者一旦出现症状，大部分患者已到了肝癌的中晚期。

治疗肝癌患者的关键是早发现、早诊断、早治疗。AFP作为原发性肝细胞癌的诊断标志物，尽管在临床上已应用多年，也得到了广大临床工作者的普遍认可，但它也存在着不足：肝炎、肝硬化等良性肝病患者及胃癌、肺癌、胰腺肿瘤等非HCC患者，AFP会升高；临床上有30%～40%的HCC患者血清AFP含量在正常范围内[3]。这给用AFP作为HCC患者的早期实验室诊断带来困难，从而延误病情。

2005年，美国FDA批准将AFP-L3应用于HCC的诊断，并将10%作为诊断阈值，即使患者血清AFP只有轻微的升高但AFP-L3≥10%，也高度提示HCC发生的可能[4]。本结果显示,以AFP-L3/ AFP(%)≥10%作为HCC的阳性诊断标准，其敏感性为83.8%，均值为19.9，HCC患者的AFP-L3均值及阳性率均显著高于肝硬化组、慢性肝炎组，差别具有统计学意义，提示检测AFP-L3有助于鉴别HCC与非HCC患者。

按不同的AFP浓度，将117例原发性肝细胞癌患者分成三组，分别检测AFP-L3。由表2可见，当AFP≤200ng/ml时，AFP-L3的阳性率为47.8%；当AFP的浓度在200ng/ml及400ng/ml之间时，AFP-L3的阳性率为75%；当AFP浓度大于400ng/ ml时，AFP-L3的阳性率为100%，即在原发性肝细胞癌患者中，随着AFP浓度的升高，AFP-L3的阳性率也逐惭升高，三者之间存在统计学差异，与胡敏华等[5]报道存在差异，可能是本研究AFP低浓度HCC患者的病例过少所致。不同AFP浓度HCC患者的AFP-L3浓度差异无统计学意义(P>0.05)，HCC患者的AFP-L3浓度与AFP浓度无相关性，因此，AFP-L3更适用于AFP低浓度阳性良、恶性肝病的鉴别诊断，与曹立等[6]报道一致。

文献报道，AFP-L3阳性对HCC的正确预警率达94%，在临床诊断、影像学检查尚未发现肝癌特征性占位病变时，对AFP低浓度阳性病例进行AFP-L3检测，可以早期预警肝癌的发生，使HCC患者的诊断可提前3～28个月[4，7]。

因此，作者认为临床上检测AFP-L3对于鉴别良恶性肝脏病变是很有帮助的，特别对于小肝癌的早期诊断及在低AFP含量肝病患者的鉴别诊断中，具有重要的临床应用价值。

[1]唐菁娟.联合检测血清ALP，GGT和AFP对肝癌的诊断价值[J].实验与检验医学,2010,28(5):495.

[2]彭承宏,李松岗,刘颖斌,等.肝癌研究现状[J].肝胆外科杂志,2001,9 (5):386.

[3]殷正丰.甲胎蛋白异质体作为肝癌标志物的临床应用[J].实用肿瘤杂志,2004,19(1):1-4.

[4]李冰,范公忍,曹建彪.甲胎蛋自异质体对肝细胞癌早期诊断的临床意义[J].医学综述,2012,18(19):3284-3286.

[5]胡敏华,陈燕,梁亚,等.新微量离心柱法测定甲胎蛋白异质体对原发性肝细胞癌诊断的价值(附297例分析)[J].福建医药杂志, 2009,31(4):95-96.

[6]曹立,孙华宝,敖琴芳,等.ROC曲线评价甲胎蛋白异质体对原发性肝细胞癌的诊断价值[J].实验与检验医学,2010,28(5):465-467.

[7]何兰香,毛智趣,黄海深,等.AFP-L3对肝癌鉴别诊断的临床价值[J].实验与检验医学,2013,31(3):258-259.

R735.7，R446.62

A

1674-1129(2014)05-0536-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.05.016

2014-06-03；

2014-06-30)

江西省赣州市科技局2011年指导性课题项目(编号：2011127)

肖久长，男，1969年9月生，学士学位，副主任技师，研究方向为临床生物化学及肿瘤标志物。