冷沉淀制备技术改进与临床应用情况的研究

袁小玲,吴杰敏,林桂芳,杨卫红,邓红梅,陈明,刘云华

(1、宜春市中心血站,江西宜春336000;2、婺源县人民医院检验科,江西婺源333200;3、宜春市人民医院,江西宜春336000;4、抚州市中心血站,江西抚州332900)

.经验交流.

冷沉淀制备技术改进与临床应用情况的研究

袁小玲1,吴杰敏2,林桂芳3,杨卫红1,邓红梅4,陈明1,刘云华1

(1、宜春市中心血站,江西宜春336000;2、婺源县人民医院检验科,江西婺源333200;3、宜春市人民医院,江西宜春336000;4、抚州市中心血站,江西抚州332900)

冷沉淀;改进虹吸法;产品质量;临床应用

冷沉淀中含有不稳定的凝血因子如Ⅷ,在制备过程中受制备时间、温度等多种因素的影响,容易降低活性或损耗,选择好的制备方法尤为重要,目前常用的制备方法有4℃冰箱融化离心法和水浴融化虹吸法,本血站通过对虹吸传统方法的技术改进,提高了产品质量,更好地满足临床输血的需要,取得了很好的社会及经济效益,现报告如下.

1 材料与方法

1.1 血液来源血液来自本站无偿献血者,符合《献血者健康检查标准》,每次献血量为400ml, 6min内采血完毕,采血过程顺利.

1.2 器材Sysmex CA-50自动血凝分析仪(日本),贺利氏6000i型大容量低温离心机;达科为CT-4T.6C型水浴式低温融化箱;ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制备仪(山东),DXJ-2型低温血浆速冻机(郑州),热合机,分浆夹,FⅧ试剂盒(德国希森美康医用电子(上海)有限公司;批号:546568),纤维蛋白原(Fg)(德国希森美康生物科技(无锡)有限公司,批号:R2015),一次性使用去白细胞塑料血袋五联袋(山东威高).

1.3 冷沉淀凝血因子原料血浆采用山东威高集团生产的一次性白细胞滤除五联袋(抗凝剂为CPDA-1),采集400 ml全血60人份,于6h内分离血浆并速冻(每袋200 ml),将新鲜冰冻血浆随机分成三组,每组20袋,将血浆袋和空转移袋叠好立即放于血浆速冻机速冻,冻结完好后放-18℃以下低温冰箱中保存备用.

1.4 操作方法

1.4.1 传统手工离心法将备用的20袋新鲜冰冻血浆从-20℃低温冰箱中取出,平铺于4℃血液冰箱内,察看血浆中有少许冰渣时取出,将20袋血浆平衡离心,离心力2908g、离心时间为10 min、离心温度4℃.取出离心后的原料血浆袋置于分浆夹上将上层血浆挤压入转移袋中,分出上层血浆,余留下的约含有20~30ml血浆及不溶解白色沉淀物,即为冷沉淀制品,热合封口后立即放置-18℃以下深低温冰箱中保存备用.

1.4.2 传统水浴虹吸法按照达科为CT-4T.6C型水浴式低温融化箱说明书操作,待水箱中水温降至6℃并恒定,将20袋新鲜冰冻血浆取出,待管路变软后将盛有血浆的袋子置于(4±2)℃水浴装置中水箱中,将转移袋悬挂于水浴箱外,位置低于血浆袋,两袋之间形成一定的高度落差,血浆融化后,随时被虹吸至空袋中,当融化至剩下40~50 ml血浆与沉淀物时,闭合导管,阻断虹吸.将血浆与沉淀物混合,制成冷沉淀凝血因子,将其热合封口后立即将冷沉淀快速置于-18℃以下冰箱中保存备用.

1.4.3 改进水浴虹吸法通过低温水流不停作用在血浆袋上,对血浆进行挤压、按摩,使得血浆融化,融化后的血浆里含有的冷不溶解物质为凝血因子,通过虹吸现象,血浆经管路流到转移血袋中,原血袋中剩下的冷不溶解物为冷沉淀凝血因子.将新鲜冰冻血浆置于1~6℃循环水槽中,空联袋悬于水浴箱外,且空联袋的位置低于血浆袋,两袋之间产生一定落差.冰冻血浆融化后,蠕动泵运转形成虹吸,融化的血浆流入空袋中,剩余的白色絮状结晶即为冷沉淀.将冷沉淀快速置于-18℃以下冰箱中保存备用.

1.5 标本检测将3种方法制备的冷沉淀凝血因子袋同时放入37℃水浴箱中至完全融化后从冷沉淀凝血因子袋中取样2 ml,进行纤维蛋白原和FⅧ因子含量检测.

1.6 质量标准按照GB18469-2012《全血及成分血质量要求》规定的冷沉淀凝血因子质量控制项目和要求:来源于400ml全血制备的冷沉淀FⅧ≥80IU,纤维蛋白原含量≥150mg,容量为标示量(ml)± 10%[1].

1.7 临床应用情况应用血站成品库管理系统中临床用血出库明细,统计各级医院冷沉淀制品应用情况,通过到医院调查应用冷沉淀的病人病历,统计出冷沉淀的应用效果,冷沉淀的应用效果评价,根据临床医生对输注患者每天检测的Fg水平及凝血状态进行评估.

1.8 统计学分析采用SPSS 17.0统计软件,计量数据用x±s表示,独立样本t检验;率的比较采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义.

2 结果

2.1 3种制备冷沉淀方法的工艺特点比较见表1.

表1 传统离心法、传统虹吸法、改进虹吸法3种方法工艺比较

2.2 传统离心法、传统虹吸法、改进虹吸法3种方法制备的冷沉淀质量比较见表2,3种方法制备的冷沉淀合格率比较见表3.

表2 传统离心法、传统虹吸法、改进虹吸法3种方法制备的冷沉淀质量比较

表3 传统离心法、传统虹吸法、改进虹吸法3种方法制备的冷沉淀合格率比较

2.3 冷沉淀在宜春市的临床应用情况见表4,应用效果见表5.

3 讨论

冷沉淀凝血因子的制备需要在特定的温度范围1~6℃,血浆中含有的凝血因子及纤维蛋白原成分才能结晶,从血浆中分离出来.冷沉淀凝血因子是FFP在1~6℃融化后,分离出沉淀在血浆中的冷不溶解的物质,含有FⅧ因子、纤维蛋白原、血管性血友病因子、纤维结合蛋白等[2].因传统手工离心方法采用4℃血液冰箱融化血浆,需要在4℃冰箱中经过长时间缓慢融化至一定程度后,再进行离心分离,耗时长,离心时不可避免的温度上升,制备后期在室温下完成,均可导致Ⅷ因衰减较多,且温度不好控制,融化时间较长约9h,从而导致纤维蛋白原和FⅧ因子回收率下降.而传统虹吸法采用的是低温水浴融化箱融化血浆,设备虽有微电脑系统,也可将水浴温度维持在6℃,自动水浴箱通过摇摆及循环水,使血浆袋之间融化温度和速度达到均衡,制备时间约50 min,相对4℃离心法纤维蛋白原和FⅧ因子的回收率较高,也相对减少人为因素的影响,但传统虹吸法制备冷沉淀存在几个方面的不足:仅依靠一个水环境的局域温度控制,虹吸出的血浆长时间暴露在外界,如在高温条件下易引起蛋白质等有效成分破坏和丢失;水箱体积小,由于纤维蛋白原和FⅧ在制取时温度交换慢、不充分,影响融化速度,也增大了暴露血浆变性的可能性;只能通过水箱的整体晃动来达到水温均衡和加速融化的目的,但在晃动过程中,容易把刚刚析出未抱团的冷沉淀物质晃散而随血浆被吸出,造成成品效价不足.血站在制取时经常遇到"堵管"实际上是纤维蛋白原等不溶物质,没有附着在冰块上或血袋内表面,而是随血浆流出来了,这样制备的最终产品是不合格的.

表4 改进技术制备的冷沉淀制品2013年7至11月份在宜春市的临床应用情况(U)

表5 改进技术制备的冷沉淀制品2013年7至11月份在宜春市的临床应用效果(%)

由于冷沉淀凝血因子是一种不稳定的凝血因子,在制备过程中受融化时间、融化温度以及人为因素影响较大,为了保证临床患者的冷沉淀凝血因子输注效果,我站改进冷沉淀制备技术,引进先进设备,制备过程中,设备能够控制制备温度范围在2~8℃,水浴温度控制在1~6℃,整个融化和制备过程均处于有效的温度控制中,在制备过程中严格控制融化温度和时间,通过低温水流不停的作用在血浆袋上,对血浆进行挤压、按摩,使得血浆融化时间大大缩短.融化后的血浆里含有的冷不溶解物质为凝血因子,通过虹吸现象,血浆经管路流到空血袋中,原血袋中剩下的冷不溶解物为冷沉淀凝血因子.此改进方法在制备过程中虹吸出的血浆未暴露在外界,整个制备过程处于一个有效温度控制的设备内,当柜内水浴温度和内环境温度有异常情况时,设备发出报警提示;两步自动精确称重(可控制在±5g);设备配有蠕动泵,能自动形成血浆虹吸,避免人为因素的影响;设备具备自动上水和自动排水功能,节省人力,应用新设备可一次制取冷沉淀1~15袋,提高了工作效率;血袋能够自动进入低温融化水浴箱,在制取完成后,可自动离开水浴箱;可根据需要,开启定时自动上水预冷功能,缩短制备等待时间;当冷沉淀总量达到设定制备参数时,夹管阀自动关闭,保证了冷沉淀的质量,并且减少操作环节.

综上所述改进方法较传统方法有储多优势:如能有效控制整个融化和制备过程,避免人为因素的影响,节省人力、提高工作效率;血浆袋自动升降;一键式智能操作,制备过程在操作画面采用提示性操作方式,使操作更加具有人性化;控制页面各项参数设定方便,显示页面的控制参数可实时显示;可提高冷沉淀制品的合格率,更加安全、可靠,有效.

冷沉淀凝血因子由于富含冷沉淀富含因子Ⅷ、纤维蛋白原(Fg)以及血管性血友病因子(vWF),纤维粘连蛋白(Fn)、凝血因子ⅩⅢ等成分,应用价值很高,近年来随时着成分输血的不断推广,其应用不再局限于血液病患者的治疗,越来越多地应用于各种手术、创伤引起的凝血机制障碍等出血性疾病[3],冷沉淀的临床应用已经成为医学界的热点[4],应用更加广泛,各级医院的各临床专业科室均在不同程度地应用冷沉淀进行治疗.统计分析了宜春市各医院2013年7月至11月的冷沉淀使用情况及使用效果,三级和二级医院重症监护室使用占相当大的比例,改进技术制备的冷沉淀制品临床应用效果效果显著.因此,我站在全省率先改进冷沉淀制品的制备方法因其制备的冷淀淀凝血因子的质量及合格率明显优于传统离心法和传统虹吸法,值得推广应用.

[1]GB18469-2012.全血及成分血质量要求[S].2012.

[2]杨建英,雷万军,孙先玲.冷沉淀在医学领域中的应用[J].河南科技大学学报(医学版),2007,25(4):318-320.

[3]中华人民共和国卫生部.临床输血技术规范之内科输血指南[S]. 2000.

[4]魏晓娟.冷沉淀在临床中的应用[J].检验医学与临床.2013,10(2): 255-256.

R457.1+4

A

1674-1129(2014)03-0350-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.03.050

2014-02-11;

2014-03-10)