舒郁胶囊及主要组份对PMS肝气郁证大鼠海马中CACNA1C蛋白表达和功能的影响

宋春红，李 芳，郭英慧，张惠云

（山东中医药大学1.实验动物中心，2.基础医学院，3.科技处，山东 济南 250355；4.北京丰台妇幼保健医院药剂科，北京 100069）

CACNA1C基因编码L型钙通道α1C亚基，其基因多态性与多种情感障碍类疾病如精神分裂症和重度抑郁等发生有关［1］。经前期综合征（premenstrual syndrome，PMS）发生的易感神经生物学因子与重度抑郁症相似［2］，该基因与 PMS的关系如何？尚未见报道。因此，本研究从PMS肝气郁证入手，以舒郁胶囊及主要组份进行药物干预，采用Western blot和全细胞膜片钳技术，探索CACNA1C与PMS肝气郁证的关系和舒郁胶囊的干预机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 Wistar大鼠，体质量140-160 g，♀，Wistar新生鼠，由山东中医药大学实验动物中心提供［生产许可证号 SCXK（鲁）2011-0003］。

1.2 药品与主要试剂 舒郁胶囊、柴胡提取物和白芍提取物（青岛阳光海川医药科技发展有限公司生产，批号：2011L06107、20110526和20110527）；氟西汀（礼来苏州制药有限公司，批号H20050463）；尼莫地平（德国拜尔医药保健有限公司：北京，批号：H20003010）。CACNA1C一抗（ab58552，abcam）；山羊抗兔二抗（SB200，远达晶美）。

1．3 PMS肝气郁证大鼠模型复制及给药 利用慢性束缚应激法制备模型［3］，根据旷场实验基线期数据将大鼠分为6组，每组10只，分别为正常对照组（生理盐水，5 ml·kg-1）、PMS肝气郁证模型组（生理盐水，5ml·kg-1）、舒郁胶囊组（0.41 g·kg-1）、柴胡提取物组（0.32 g·kg-1）、白芍提取物组（0.036 g·kg-1）、氟西汀 +尼莫地平组（2.7 mg·kg-1）。给药与人当量，每天灌胃1次。连续5 d。造模完成后，分离血清并迅速剥离海马备用。

1．4 Western blot检测CACNA1C蛋白表达 按 RIPA方法提取海马脑区总蛋白。以50μg总蛋白每泳道上样，SDSPAGE电泳分离蛋白，ECL化学发光试剂检测杂交信号，用扫描仪对X光片进行灰度扫描，采用Image J软件对图像进行灰密度分析。

1.5 全细胞膜片钳实验 各组大鼠血清孵育原代大鼠海马神经元，利用全细胞膜片钳技术检测L型钙通道电流密度（由北京爱思益普生物科技股份有限公司提供技术服务）。

1.6 数据分析 利用GraphPad Prism 5软件对实验数据进行ANOVA分析。

2 结果

2．1 PMS肝气郁证大鼠海马中CACNA1C蛋白的表达量与正常组相比，各组大鼠海马中蛋白表达量差别无显著性（P＞0.05）。

2．2 各组海马神经元细胞L型钙通道钙电流密度 与正常组相比，模型组大鼠血清孵育后细胞内L型钙电流密度明显升高（P＜0.05），各给药组大鼠血清孵育的细胞L型钙电流密度差异无显著性（P＞0.05）。

3 讨论

本研究从CACNA1C蛋白表达和功能两个方面对其与PMS肝气郁证的关系进行了研究，结果发现CACNA1C蛋白在各组大鼠海马中表达差异无显著性，但是模型组大鼠血清孵育的海马神经元L型钙电流密度明显升高，药物干预组大鼠血清孵育的海马神经元差别无显著性。有研究发现，CACNA1C杂合基因敲除小鼠可以改变抑郁状的表型，同时L型钙通道蛋白表达水平降低和LTCC通道电流减少［4］。但是本实验没有在蛋白水平发现表达差异，很可能与模型复制所需时间短有关；而体外试验结果表明LTCC通道电流增加可能与PMS肝气郁证的发生有关。雌激素和芍药苷均可阻断L型钙通道［6-7］，柴胡皂苷d有类似雌激素的作用，因此我们推测舒郁胶囊和其主要组分柴胡和白芍提取物可能作为L型钙通道的拮抗剂，但是对其具体作用微观机制我们还将进一步证实和深入研究。

参考文献：

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