PTTG和bFGF在结直肠癌组织中的表达

张耀明，周臻涛，邓国明，罗宇峰

（梅州市人民医院肿瘤外一科，广东梅州514031）

PTTG和bFGF在结直肠癌组织中的表达

张耀明，周臻涛，邓国明，罗宇峰

（梅州市人民医院肿瘤外一科，广东梅州514031）

目的探讨垂体肿瘤转化基因（PTTG）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在结直肠癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组化法检测120例结直肠癌、30例结直肠腺瘤、30例正常结直肠黏膜组织中PTTG及bFGF的表达。结果结直肠癌组织中PTTG和bFGF阳性表达率明显高于结直肠腺瘤组织及正常结直肠黏膜组织（P均＜0.05）；结直肠癌组织中PTTG和bFGF阳性表达率均与结直肠癌Dukes分期及淋巴结转移有关（P均＜0.05）。结论PTTG和bFGF与结直肠癌生物学行为及预后有密切关系，两者联合检测有助于结直肠癌恶性程度和预后的判断。

结直肠癌；垂体肿瘤转化基因；碱性成纤维细胞生长因子；免疫组化

结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，目前已发现多种基因与其生物学特性有关，1999年发现的原癌基因垂体肿瘤转化基因（pituitary tumor transforming gene，PTTG）高表达在促进细胞增殖、转化及肿瘤发生、发展中起着十分重要作用［1］。该原癌基因在结直肠癌的发生、发展过程中作用如何，迄今国内外少有报道。血管新生是肿瘤生长和转移过程中一个关键限速步骤，碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）是强烈的内皮细胞和管壁结缔组织的促生长因子，可促进肿瘤新生血管的形成。体外实验［2］结果证实，PTTG能直接引起bFGF mRNA及其蛋白水平增加，刺激bFGF蛋白合成和分泌。作者利用免疫组化法检测结直肠癌组织中PTTG及bFGF的表达情况，探讨两者与结直肠癌的临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象收集我院肿瘤外科2008年1月至2008年12月经手术切除的结直肠癌标本120例，患者年龄32～88（59.7±11.9）岁，男74例，女46例，男女之比为1.7∶1；所有患者术前均未接受过放疗和化疗等新辅助治疗；组织类型：高分化腺癌21例，中分化腺癌64例，低分化腺癌35例；肿瘤直径：≥5 cm 69例，＜5 cm 51例；肿瘤部位：结肠癌43例，直肠癌77例；Dukes分期：A期23例，B期48例，C期37例，D期12例；淋巴结转移情况：未转移72例，转移48例；手术方式：根治性切除术94例，扩大根治性切除术18例，姑息手术8例。另取手术切除结直肠腺瘤组织、手术切缘正常结直肠黏膜组织标本各30例作为对照，患者年龄20～71（51.0±14.5）岁，男19例，女11例，男女之比为1.9∶1。术后均有明确的病理诊断，免疫组化染色之前，HF染色切片经资深病理科医生再次确诊。

1.2 主要试剂兔抗人PTTG多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，鼠抗人bFGF单克隆抗体、S-P试剂盒、DAB显色系统购自福州迈新生物技术公司。PTTG多抗及bFGF单抗的工作浓度均为1∶100。

1.3 检测方法全部标本制成4 μm厚的切片，常规脱蜡，充分水化；柠檬酸热抗原修复，蒸馏水洗5 min，重复3次；用体积分数3%H2O2作用10 min，除去内源性过氧化物酶，室温孵育12 min，蒸馏水洗5 min，重复2次；PBS洗5 min，重复3次，滴加正常山羊血清封闭液即用液，室温孵育2 h；滴加稀释好的一抗（临时配制），4℃孵育过夜；PBS洗5 min，重复3次，滴二抗即用液，室温孵育30 min；PBS洗5 min，重复3次，滴加SABC即用，室温孵育30 min；PBS洗5 min，重复3次。滴加DAB显色剂，显微镜下观察，自来水及时终止染色；苏木素复染，中性树胶封固。另外，用已知阳性切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。

1.4 结果判断采用双盲法由2名病理科医生均在不知临床资料的情况下，对免疫组化染色结果进行评估。阳性细胞必须具备：细胞结构清晰，阳性染色定位准确，着色明显高于背景。在低倍（×100）镜下观察切片着色情况，随机选取上下左右中5个部位，分别在高倍（×400）镜下计数。每个视野计数200个肿瘤细胞中阳性表达细胞数。综合5个视野的细胞数，计算平均值。根据显色深浅程度及阳性细胞数，分别进行评分。显色程度：不显色或显色不清楚为0级；土黄色为1级；棕黄色为2级；深褐色为3级。阳性细胞百分率：无细胞显色或阳性细胞的百分率≤5%为0级；＞5%～35%细胞显色为1级；＞35%～65%细胞显色为2级；＞65%细胞显色为3级。2种评分的平均值作为该切片的最终评分。根据最终评分结果，将0、0.5～1.0、1.5～2.0、2.5～3.0分别定为（-）、（+）、（++）和（+++）。其中（-）为阴性，（+）、（++）和（+++）为阳性。

1.5 统计学处理应用SPSS 13.0进行数据分析，计数资料的比较采用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 不同组织中PTTG和bFGF的表达两者阳性表达位于肿瘤细胞的胞质，呈弥漫性或灶性分布，肿瘤间质及炎症细胞见不规则弱阳性分布。120例结直肠癌组织中PTTG阳性表达率为84.17%（101/120），bFGF阳性表达率为69.17%（83/120）。30例结直肠腺瘤组织中PTTG阳性表达率为26.67%（8/30），bFGF阳性表达率为30.00%（9/30）。30例正常结直肠黏膜组织中PTTG阳性表达率为6.67%（2/30），bFGF阳性表达率为10.00%（3/30）。结直肠癌组织中PTTG和bFGF阳性表达率明显高于结直肠腺瘤组织及正常结直肠黏膜组织（P均＜0.05）。

2.2 PTTG和bFGF的表达与结直肠癌临床病理特征的关系结直肠癌组织中PTTG和bFGF阳性表达率均与结直肠癌Dukes分期的高低有关，Dukes分期中，C期+D期与A期+B期间PTTG和bFGF阳性表达率比较差异有统计学意义（P＜0.05）；结直肠癌组织中PTTG和bFGF阳性表达率均与淋巴结转移有关，有淋巴结转移者PTTG和bFGF表达水平显著高于无淋巴结转移病例（P＜0.05）。PTTG和bFGF阳性表达率均与病理类型、肿瘤部位、肿瘤直径等无关（P＞0.05）。

3 讨论

PTTG是一个强有力的细胞转化基因，无需其他原癌基因的参与下可使细胞转化，可通过多途径参与肿瘤的病理过程，促进其他原癌基因的表达，干扰姊妹染色单体分离，与肿瘤的侵袭性、恶性程度密切相关［3-4］。bFGF是一种具有广泛生物活性的肽类物质，其与酪氨酸激酶受体结合后，通过自分泌和（或）旁分泌的形式促进细胞分裂增殖，可以调节血管形成及神经系统的发育等。崔虎啸等［5］利用免疫组化法研究发现原发性肝癌组织中bFGF表达明显高于正常肝组织（P＜0.05），亦高于癌旁组织（P＜0.05），bFGF表达与肝癌的临床分期有关（P＜0.05），bFGF高表达促进了肝癌微血管的形成，促进肿瘤的生长、侵袭和转移。林称意等［6］应用免疫组化S-P法检测PTTG和bFGF在48例食管鳞癌组织和癌旁正常食管组织中的表达情况，结果显示48例食管鳞癌组织中PTTG和bFGF的阳性表达率显著高于癌旁正常食管组织（P＜0.05），PTTG和bFGF的表达均与淋巴结转移、TNM分期有关（P＜0.05）。本文结果显示，结直肠癌组织中PTTG、bFGF阳性表达率均高于结肠腺瘤及正常结直肠黏膜组织（P＜0.05）；PTTG和bFGF阳性表达率均与结直肠癌 Dukes分期和淋巴结转移有关（P＜0.05）。该结果提示高表达的PTTG和bFGF可能与结直肠癌的发生、发展密切相关，其机制可能是PTTG高表达直接引起了细胞转化，导致结直肠癌的发生［1］；bFGF可能通过自分泌和（或）旁分泌作用于肿瘤细胞，刺激肿瘤血管的生成，为肿瘤提供营养物质，促进肿瘤的生长、发展。PTTG与bFGF可能成为反映结直肠癌生物学行为及侵袭性的重要指标，但其参与机制尚有待于进一步深入研究。

［1］ Zhang X，Horwitz GA，Prezant TR，et al.Structure，expression，and function of human pituitary tumor-transforming gene（PTTG）［J］. Mol Fndocrinol，1999，13（1）：156-166.

［2］ Ishikawa H，Heaney AP，Yu R，et al.Human pituitary tumor-transforming gene induces angiogenesis［J］.J Clin Fndocrinol Metab，2001，86（2）：867-874.

［3］ Mu YM，Oba K，Yanase T，et al.Human pituitary tumor transforming gene（hPTTG）inhibits human lung cancer A549 cell growth through activation of p21（WAF1/CIP1）［J］.Fndocr J，2003，50（6）：771-781.

［4］ Yu R，Melmed S.Pituitary tumor transforming gene：an update［J］. Front Horm Res，2004，32：175-185.

［5］ 崔虎啸，宋德霸，王万鹏，等.人肝细胞肝癌中PLGF、bFGF和MVD的表达及意义［J］.肿瘤基础与临床，2009，22（2）：93 -95.

［6］ 林称意，郭家龙，左顺庆，等.食管鳞状细胞癌中PTTG和bFGF的表达与临床病理因素的关系［J］.世界华人消化杂志，2008，16（21）：2399-2403.

Expression of PTTG and bFGF in the Colorectal Cancer

Zhang Yaoming，Zhou Zhentong，Deng Guomig，Luo Yufeng
（The First Department of Tumor Surgery，Meizhou People’s Hostipal，Meizhou 514031，China）

ObjectiveTo investigate the expression and significance of pituitary tumor transforming gene（PTTG）and basic fibroblast growth factor（bFGF）in the colorectal cancer.MethodsPTTG and bFGF were examined in the 120 cases of colorectal cancer，the 30 cases of colorectal adenoma and 30 cases of normal colorectal mucosa by immunohistochemical assay.ResultsThe positive rates of PTTG and bFGF in the colorectal cancer were significantly higher than those of the colorectal adenoma and the normal colorectal mucosa（P＜0.05）.The positive expression rates of PTTG and bFGF were significantly correlated to the Dukes staging and lymph node metastasis of colorectal cancer（P＜0.05）.ConclusionPTTG and bFGF are highly related to the biological behavior and prognosis of colorectal cancer，combined detection of PTTGa nd bFGF may help to judge the malignant degree and prog-nosis of colorectal cancer.

colorectal cancer；pituitary tumor transforming gene；basic fibroblast growth factor；immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.03.006

R735.3；R730.23

A

1673-5412（2014）03-0202-03

2013-01-09）

张耀明（1974-），男，硕士，副主任医师，主要从事消化道肿瘤研究。F-mail：bluesky01@tom.com

周臻涛（1979-），男，硕士，主治医师，主要从事消化道肿瘤研究。F-mail：zhouzhentao99@126.com