耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属酶检测及耐药性分析

张 蕾 卢晋英

(天津市第三中心医院检验科 天津 300170)

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PAE)是临床常见的条件致病菌之一。近10年来，耐碳青酶烯类抗菌药物的PAE日趋增多，其耐药机制主要由于OprD缺失、MexAB OprM等外排泵的过度表达、金属β-内酰胺酶(IMP、VIM)的产生等［1］。金属β-内酰胺酶(metallo-beta-lactamase，MBL)又称金属酶，它能水解除单环类抗菌药物以外的几乎所有β-内酰胺类抗菌药物。使细菌对青霉素、头孢菌素类和碳青酶烯类药物耐药［2］。由于金属酶对碳青酶烯类抗菌药物的高效水解及缺乏有效的抑制剂，已成为临床抗感染治疗棘手的问题。本研究对我院临床分离的64株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌进行金属酶检测及耐药性分析，了解亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的耐药谱特点及产生金属酶情况。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验菌株。所选菌株为从2010年8月～2011年1月在天津市第三中心医院住院的患者各类送检标本(包括痰、尿、血、胸水、腹水等)中分离到的耐亚胺培南铜绿假单胞菌64株。质控菌株为大肠埃希菌(ATCC25922)、铜绿假单胞菌(ATCC27853)。

1.1.2 M-H营养琼脂培养基。购自上海伊华医学科技有限公司。

1.1.3 VITEK2-Compact全自动微生物分析仪及其配套的GN鉴定卡、AST-GN16药敏卡片。购自法国Biomérieux公司。

1.1.4 E-test试剂。购自法国Biomérieux公司。

1.2 方法

1.2.1 药物敏感性试验。采用VITEK2-Compact全自动微生物分析仪进行体外药敏试验，按照CLSI标准进行操作和结果判读。

1.2.2 E-test。按说明书操作，在以0.5麦氏单位待测菌菌液均匀涂布的MH平板中间粘贴两侧分别是IPM及IPM+EDTA的E-test条，若E-test条含EDTA一侧IPM的MIC值下降8倍或8倍以上，提示金属酶阳性。

1.3 统计学处理 采用世界卫生组织细菌耐药性监测软件whonet-5.4进行分析。

2 结果

2.1 药敏试验结果 见表1。

表1 64株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的耐药率

2.2 E-test检测 64株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中6株金属酶阳性，阳性率为6.25%。金属酶阳性菌株表现为多重耐药性，其药敏结果见表2。

表2 E-test金属酶阳性菌株药敏结果

3 讨论

铜绿假单胞菌作为一种重要的医院感染病原菌，其临床分离率日益增高。本研究中64株临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌对临床常用的革兰阴性抗菌药普遍耐药，头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢噻肟的耐药率分别为50%、53.1%、59.4%，替卡西林/棒酸、环丙沙星、氨曲南、头孢他啶、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为60.9% ～70.3%，米诺环素、哌拉西林、复方新诺明、妥布霉素、庆大霉素、左氧氟沙星、头孢噻肟、美洛培南的耐药率为75.0% ～98.4%。本试验中头孢曲松、哌拉西林/舒巴坦耐药率低于国内相关研究［3］，头孢噻肟，庆大霉素，妥布霉素耐药率则较高，与各地区抗生素的临床使用有关。在64株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌，一株对美洛培南敏感，说明存在不同的耐药机制。有研究发现［4］，OprD2是以亚胺培南为代表的碳青霉烯类抗生素(美洛培南除外)进入菌体的特异性通道，OprD2的缺失是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因，美洛培南可经除OprD2外的其他外膜蛋白通道进入菌体。对于仅因OprD2缺失引起的亚胺培南耐药的菌株，对美罗培南仍敏感，临床上可用于对亚胺培南耐药的菌株。

金属β内酰胺酶，能够导致对单酰胺菌素外所有β-内酰胺类抗生素耐药，并且它们的催化活性基本不能被非MBL抑制剂(如克拉维酸和他唑巴坦)所抑制。目前，铜绿假单胞菌金属酶表型检测方法主要有双纸片协同试验法、组合纸片法和E-test法较，这几种方法的敏感性均达到100%，但特异性存在一定的差异。E-test法的敏感性、特异性最高，均为100%［5］。本研究中64株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌，经E-test(IPM/IPM+EDTA)检测4株金属酶阳性，阳性率为6.25%，低于国内有关研究［6］可能与地区差别有关。金属酶阳性菌株，3株分离自ICU，1株来自神经内科病房，均为痰标本。且患者有严重的基础疾患，住院时间长，使用抗生素广，患者免疫功能低下的共同特征，这些都是碳青霉烯类耐药的PAE的易感因素。本研究金属酶阳性菌株中，1号菌株头孢他啶中介敏感其余均耐药，2号菌株仅对丁胺卡那霉素敏感，3号菌株仅对哌拉西林/他唑巴坦敏感，4号菌株仅对米诺环素敏感，4株菌均为多重耐药铜绿假单胞菌，且都对氨曲南耐药，说明以上菌株除产金属酶外还存在其它耐药机制。

铜绿假单胞菌的耐药机制异常复杂，研究显示，多种耐药机制可同时存在于同一菌株中，单一药物治疗多重耐药的铜绿假单胞菌十分困难，推荐联合用药。有文献报道，黏菌素、利福平联合(加用或不加用替加环素)治疗［7］，多粘菌素B等毒性较强，比较早期的抗菌药物也开始投入使用［8］。总之，耐亚胺培南铜绿假单胞菌对多种抗菌药耐药率高，产MBL是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要机制，应加强对MBL的检测，合理治疗，防止其扩散。

［1］王贵年，吴 娟.产金属酶铜绿假单胞菌研究进展［J］.中国感染控制杂志，2007，6(3):211

［2］沈定霞，罗燕萍，崔 岩，等.分离产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌［J］.中华医院感染学杂志，2004，14(1):86

［3］黄 颖，徐元宏，王中新，等.耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药性及金属β-内酰胺酶的检测［J］.临床输血与检验杂志，2007，2(4):9

［4］Rodriguez-Mart inez JM，Poirel L，Nordmann P.Molecular epidemiology and mechanisms of carbapenem resist ance in Pseudomonasaerug inosa［J］.Ant imicrob Agent s Chemother，2009，53(11):4783

［5］陶 晶，张俊丽，瞿婷婷，等.铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶分布及产金属酶检测方法比较［J］.检验医学，2009，24(2):145

［6］苏维奇，朱元祺，孔繁荣.青岛地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶检测及耐药性分析［J］.中华医院感染学杂志，2009，19(2):205

［7］徐 力，邵春红，王会琴.291株铜绿假单胞茵的分离及耐药性分析［J］.医学检验与临床，2010，21(2):20

［8］Perez F，Hujer AM，Hujer KM，et al.Global challenge of multidrug-resistant Acinetobacter baumannii［J］.Antimicrob Agents Chemother，2007，51(10):3471