血管紧张素Ⅱ对血管外膜成纤维细胞亚群增殖的影响

刘 培，邵铁梅，李 雪，焦 展，温 昕，仵 陶，安胜军

(河北化工医药职业技术学院，河北省高校生物反应器与蛋白类药物开发应用技术研发中心，河北石家庄 050026)

血管损伤后发生的管壁结构重塑是血管重建术后再狭窄、动脉粥样硬化等多种心血管疾病发病的共同病理基础。已有研究表明血管外膜并非仅起支撑作用，在血管损伤和高血压中也起重要作用。特别是在某些刺激因子作用下，成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞，表达α-平滑肌肌动蛋白，迁移至内膜下区域和新生内膜中并增殖，同时胶原合成增加，导致血管重构［1］。因此，成纤维细胞的增殖、迁移及转化在血管重构的发生发展中扮演着重要的角色。本实验旨在比较在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)刺激下，两细胞亚群在增殖能力方面的异同，以期为研究其在血管重构机制中的作用提供实验数据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级 ♂ SD大鼠，体质量150～180 g，购自河北医科大学实验动物中心，许可证号:SCXK(冀)2008-1-003。

1.2 试剂 AngⅡ购自Sigma公司;MTT购自Solarbio公司;dNTP、TaqDNA聚合酶购自Promega公司;所用引物由上海生工生物技术有限公司根据设计合成。

1.3 方法

1.3.1 血管外膜成纤维细胞亚群培养与鉴定 方法同参考文献［2］。

1.3.2 细胞增殖活性检测 取生长状态良好的细胞亚群，用0.25%的胰酶消化成细胞悬液，以1.0×107·L－1接种于96孔培养板，每孔200 μl，置培养箱中孵育24 h后，换无血清DMEM培养过夜，使其生长同步化，分为实验组和对照组，实验组 Ang Ⅱ浓度依此为10、102、103nmol·L－1，每组6孔，继续培养72 h，采用酶联免疫检测仪测定各孔吸光度值(A值)。细胞增殖率/%=(实验组A值－对照组A值)/对照组A值×100%。

Tab 1 Effects of AngⅡon proliferation of adventitial fibroblast subpopulations

2 结果

2.1 细胞亚群纯度鉴定 经克隆环法获得的成纤维细胞亚群和圆形细胞亚群不混有内皮细胞、平滑肌细胞和白细胞，为纯细胞系。

2.2 细胞亚群增殖活性分析 从Tab 1可看出，与自身对照相比，在10～103nmol·L－1范围内，AngⅡ对两细胞亚群的增殖活性有不同程度的促进作用，AngⅡ 102nmol·L－1对纺锤形细胞的增殖率高达19.9%(P＜0.01);而当AngⅡ浓度增加时，对圆形细胞的增殖促进作用也更加明显，增殖率分别为9.8%、23.3%(P＜0.01)、30.5%(P＜0.01)。这说明AngⅡ对两细胞亚群的增殖促进作用存在差异。

3 讨论

AngⅡ是肾素血管紧张素系统的一个重要效应物质。循环和局部自分泌或旁分泌的AngⅡ，通过其受体介导，引起血管收缩、血压增高、交感神经系统兴奋、醛固酮分泌促进水钠潴留，还致细胞生长增殖，细胞外基质成分合成增加，促进其它生长因子和生物活性物质释放，在心肌、血管组织的病理性重构、顺应性下降、功能失代偿的过程中起着重要作用［3］。之前的研究显示两细胞亚群的生长特性略有不同［2］，本实验进一步发现AngⅡ对亚群的增殖能力有不同程度的促进作用，其中AngⅡ103nmol·L－1对纺锤形细胞亚群的增殖活性无明显影响(增殖率6.8%，P＞0.05)，而对圆形细胞亚群的增殖作用有明显促进作用(增殖率30.5%，P＜0.01)。提示两细胞亚群可能在血管重构等病变中扮演不同角色，为研究AngⅡ对两细胞亚群的增殖及转化等作用机制奠定基础。

［1］Siow R C，Mallawaarachchi C M，Weissberg P L，et al.Migration of adventitial myofibroblasts following vascular balloon injury:insights fromin vivogene transfer to rat carotid arteries［J］.Cardiovasc Res，2003，59(1):212－21.

［2］刘 培，邵铁梅，卢海刚，等.大鼠血管外膜成纤维细胞亚群生长特性及功能研究［J］.中国病理生理杂志，2012，28(1):47－52.

［2］Liu P，Shao T M，Lu H G，et al.Growth characteristics and function of rat vascular adventitia fibroblast subpopulations［J］.Chin J Pathophysiol，2012，28(1):47－52.

［3］张晓一，刘玉环，廖端芳，秦旭平.Losartan和CGRP对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖作用的影响［J］.中国药理学通报，2006，22(1):101－5.

［3］Zhang X Y，Liu Y H，Liao D F，Qin X P.Effect of Losartan and CGRP on the proliferation of vascular smooth muscle cell induced by angiotensin Ⅱ［J］.Chin Pharmacol Bull，2006，22(1):101－5.