SD大鼠寒积里实证模型的建立与评价

李 嬛，吴 丽，李 杰，郭 辉，刘 晓，蔡 皓，蔡宝昌

(1.南京中医药大学药学院，江苏南京 210046;2.南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心，江苏 南京 210029;3.南京海昌中药集团，江苏南京 210061;4.武汉名老中医会诊中心 湖北武汉 430000

寒积里实证史载于《金匮要略·腹满寒疝宿食病脉证治第十》篇，原文云:“胁下偏痛，发热，其脉紧弦，此寒也，以温药下之，宜大黄附子汤。”临床表现为胁下偏痛，发热，手足厥冷，脉紧弦。盖阴寒积聚，横陈一处，虽见发热，亦是阳气被郁，难以输布。此则非温阳不能散其寒，非泻下不能去其积也。故仲师拟大黄附子汤以附子、细辛之辛温大热善走者温散之，而后用大黄得以通泄其积滞也，使得邪气终有出路。目前没有寒积里实证模型的报道，因此笔者对该模型的研究报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物 SD大鼠，体重(220+20 g)，♀♂各半，由南京医科大学实验动物研究中心提供，合格证号:SCXK(苏 )2008－0004。

1.2 试剂 高岭土，江西景德镇雅致江南厂家;胃动素(MTL)，生产批号:YS02032B;P物质 (SP)，生产批号:YS01985B;血管活性肠肽(VIP)，生产批号:YS01986B;环腺苷酸 (cAMP)，生产批号:YS02090B、环鸟苷酸 (cGMP)，生产批号:YS01568B，购自上海雅吉生物公司。

1.3 药物 大黄来自蓼科植物掌叶大黄(RADIX ET RHIZOMA RHEI)的根和根茎 (生产批号:001004495);附子来自毛茛科植物乌头(RADIX ACONITI LATERALIS PREPAR ATA)的子根加工品(生产批号:101232825)，细辛来自马兜铃科细辛(HERBA ASARI)的根 (生产批号:101002533)，均购自北京同仁堂公司。经南京中医药大学蔡皓老师鉴定，符合《中华人名共和国药典》(2010年版)项下标准。称取大黄－附子－细辛 (3∶4∶1)药材共24 g，加入10倍量体积水煮30分钟，纱布过滤得滤液。1.4 仪器 酶标仪:芬兰(Labsystems Multiskan MS)352型，洗板机:芬兰 (Thermo Labsystems)AC8，离心机:微量高速离心机TG16W，培养箱:隔水式恒温培养箱GNP-9080型，红外测温仪:Fluke 566。

2 方法

2.1 SD大鼠寒积里实证模型的造摸方法 大鼠每天上午9:00时灌胃给予2℃冰水2 ml·100 g－1，6 h后，每鼠按2.5 ml·100 g－1体重灌胃给予 2 g·ml－1的高岭土混悬液，空白组每天同一时间灌胃相应体积蒸馏水，连续7 d。

2.2 SD大鼠寒积里实证模型的尾部温度测定和排便实验实验用大鼠共60只，取SD大鼠20只，按体重随机分为2组，每组10只，即空白对照组、模型组。模型组动物如2.1方法造模，末次灌胃后，用红外测温仪快速测定各组大鼠尾部温度后，给予活性炭水，随后立即把大鼠逐只置于代谢笼内进行观察，动物禁食不禁水，记录大鼠首粒排黑粪时间和6 h内排黑粪粒数。结果见Tab 1，2。

Tab 1Effect on excretion of rats(±s，n=10)

Tab 1Effect on excretion of rats(±s，n=10)

＊＊P＜0.01 vs control group

Group Time of stool excretion/min Number of stool excretion/granules Control 22.94 ±8.52 12.9 ±3.0 Model 165.44 ±74.63＊＊ 4.92 ±2.6＊＊Therapeutic 43.92 ±18.26 16.0 ±3.2

2.3 SD大鼠寒积里实证模型的客观生物指标测定实验另取SD大鼠20只，分组同2.2项下方法，末次灌胃1 h后，眼眶取血 2 ml，12 000 r·min－1，离心 1 min 取血清，按试剂盒说明书操作测定胃动素 (MTL)、P物质 (SP)、血管活性肠肽(VIP)，环腺苷酸 (cAMP)，环鸟苷酸 (cGMP)含量。结果见Tab 3。

2.4 SD大鼠寒积里实证模型的反证治疗 另取SD大鼠20只，随机分为2组，每组10只。按照2.1项下方法造摸，末次灌胃6 h后给予大黄附子汤(2.5 g· kg－1)，一组大鼠按2.2项下方法进行尾部温度测定和排便实验，一组大鼠按2.3项下进行客观生物指标测定实验。结果见Tab 1，2，3。实验数据均用SPSS 16.0统计软件进行分析，计量数据均采用±s表示。

Tab 2Effect on temperature of rats tail(±s，n=10)

Tab 2Effect on temperature of rats tail(±s，n=10)

＊＊P＜0.01 vs control group

Group Temperature of rats tail/℃Control 17.15 ±1.13 Model 15.67 ±0.45＊＊Therapeutic 16.8 ±0.62

Tab 3 Influence on gastrointestinal hormones and neurotransmitters in rats( ± s，n=10)

Tab 3 Influence on gastrointestinal hormones and neurotransmitters in rats( ± s，n=10)

*P＜0.05 vs control group

Groups MTL VIP SP cAMP/cGMP Control 366.65±88.49 109.95 ±31.28 189.12±37.20 0.14 ±0.11 Model 283.50±75.69* 101.45 ±16.41 121.30±62.48* 0.09 ±0.07 Therapeutic 284.61±145.94 119.96 ±50.07 156.24±37.53 0.15 ±0.03

3 实验结果与讨论

3.1 模型一般生物学特征 模型组动物普遍于3～4 d时出现排便粒数减少，大便干燥，摄食量减少，反应迟缓，抓取时挣扎无力，触之觉披毛松弛。

3.2 SD大鼠寒积里实证模型的尾部温度测定和排便实验由Tab1，2可以看出，造模后，与空白对照组比较:模型组首粒排便时间明显延迟，6 h内排便粒数明显减少;尾部温度明显下降。

3.3 SD大鼠寒积里实证模型的客观生物指标测定实验由Tab 3可以看出，与空白对照组比较:模型组动物胃动素，P物质含量明显降低，血管活性肠肽含量和cAMP/cGMP有降低趋势。

3.4 SD大鼠寒积里实证模型的反证治疗 由Tab1～3可以看出，大黄附子汤使得寒积里实证模型大鼠的首粒排便时间提前，排便粒数增加，尾部温度升高，使 P物质，血管活性肠肽含量，cAMP/cGMP趋于正常，但是对胃动素的影响不大。

4 对SD大鼠寒积里实证模型的评价

4.1 对造模因素的评价 证候造模因素有两类，一类相同于临床病因，一类是能导致证候病理的非自然因素。本实验选择采用李杰医生提供的理论，选择相同于临床病因的因素进行造模。寒积里实证在《金匮要略》中的描述为:胁下偏痛，发热，脉紧弦，寒积之因乃是寒邪直中太阴阳明所致，首先通过灌胃给予大鼠一定体积的冰水造成中寒邪直中脏腑，阳气温运不开，寒凝形成实证。里实可以指代肠的状态，里实即便秘。而古人在饥饿状态下会食用高岭土充饥，继而引发便秘。因此我们选择灌胃给予大鼠高岭土来复制里实的模型。该模型复制的注意点是首先模拟形成寒实证，继而可形成里实证。

4.2 对症状诊断的评价 鉴于动物模型是在动物体上模拟与人类疾病相似的临床征候，因此动物模型的诊断依据必须与临床病征候的诊断依据相一致。本实验选用观察模型动物的一般状态、排便量、首粒排便时间、尾部温度作为寒积里实证动物模型的诊断标准。其中大鼠尾部温度能够灵敏的反应寒证信息［1］。结果表明动物的首粒排便时间延长，排便粒数降低，尾部温度下降，可以判断此模型为寒积里实证模型。

4.3 对客观指标的评价 鉴于寒积里实与寒证及胃肠运动功能密切相关，故选择与寒证和胃肠运动功能密切相关的客观指标。cAMP/cGMP，胃肠激素(MTL，SP)和肠神经递质(VIP)，来判断寒积里实动物模型成功与否［2］。

4.4 对大黄附子汤反证治疗的评价 在证候模型上，由于证状观察受一定限制，故治疗反证重要性提高。选取治疗寒积里实证的对应复方大黄附子汤作为反证治疗的药物，可以看出大黄附子汤使寒积里实证模型大鼠的首粒排便时间和排便粒数增加，尾部温度升高。P物质和血管活性肠肽(VIP)含量升高，但对胃动素的影响不大。

4.5 对新建的SD大鼠寒积里实证模型的评价 遵循实验动物模型设计相似性、重复性、标准化、实用性及经济性等原则，本实验采用冰水加高岭土灌胃方法建立SD大鼠寒积里实模型，该模型在一定程度上模拟了中医临床寒积里实证的症状特点，模型的生物学特征、客观指标的检测经过多次重复实验结果一致。该模型具有重复性好，复制简单、实用、经济等特点。

［1］袁永明，陈 晓，潘志强，等.寒证 热证大鼠模型的红外热图研究［J］.辽宁中医杂志，2008，35(5):785－7.

［1］Yuan Y M，Chen X，Pan Z Q，et al.Study on the infrared thermographic of cold and heat rat model［J］.Liaoning J tradit Chin Med，2008，35(5):785－7.

［2］彭 成，王 岚，赵小梅.SD大鼠阳虚便秘模型的建立及评价［J］.中国药理学通报，2007，23(2):407－9.

［2］Peng C，Wang L，Zhao X M.Establishment and evaluation on SD rats model with yang-deficiency and constipation［J］.Chin Pharmacol Bull，2007，23(2):407－9.