四跨膜蛋白CD151在子宫颈癌中的表达及意义*

张静艳 孙玉荣

CD151是四次跨膜蛋白家族的重要成员，其具有四次跨膜蛋白的一般特征，参与调控细胞信号转导、细胞增殖及移行等过程。研究证实， CD151在多种肿瘤中存在过表达，参与了肿瘤的迁移、侵袭，并与肿瘤的预后呈正相关[1]。CD151有可能成为肿瘤治疗的新靶点。本研究采用S-P免疫组化方法检测子宫颈癌组织中的CD151的表达，并结合临床病理资料进行分析，以探讨其与子宫颈癌分化程度、临床分期及淋巴结转移的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 100例标本取自齐齐哈尔医学院第一附属医院肿瘤外科2008-2011年间行根治性切除子宫颈癌患者，且术后经病理学证实诊断。按UICC标准分级及TNM分期。所有患者术前均未接受放、化疗。同时选取同一手术切除标本远端的正常宫颈黏膜组织24例作为对照。标本均在手术切除后15 min内采集。

1.2 实验试剂 鼠抗人CD151单克隆抗体，由美国ABCAM公司生产，免疫组织化学SP试剂盒和 DAB 显色试剂盒由上海长岛生物技术公司生产。

1.3 实验方法

1.3.1 切片制作 新鲜标本于10%中性甲醛溶液固定并过夜，常规乙醇梯度脱水后，二甲苯透明及石蜡包埋，以 5 μm厚度切片，制成玻片。

1.3.2 免疫组化学染色 免疫组化主要染色步骤：（1）切片二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化；（2）3%双氧水甲醇灭活内源性过氧化物酶；（3）枸橼酸缓冲液进行抗原修复；（4）滴加一抗、二抗和三抗并进行DAB显色；（5）苏木素复染；（6）常规脱水、透明、封片。使用PBS代替一抗进行阴性对照。

1.3.3 染色结果判断 以细胞膜和细胞质见棕褐色颗粒为CD151表达阳性细胞。每例切片选5个高倍视野，按阳性细胞总数占同类计数细胞总数的百分比，将染色结果分为阴性与阳性，阳性细胞总面积<50%为阴性、≥50%为阳性[2]。

1.4 统计学处理 应用SPSS 13.0软件进行统计学处理，正态性检验用Kolmogorov-Smirnov法，方差齐性检验用Levene法。参数检验用单因素方差分析，组间两两比较运用SNK检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组化检测子宫颈癌中CD151蛋白表达 CD151蛋白的阳性信号主要表达于细胞膜，呈棕黄色或棕褐色颗粒样表现。（图1）。24例正常组织中，CD151阳性表达3例，阳性率为12.5%（3/24）。100例子宫颈癌患者中，CD151阳性表达为63例，阳性率为63%。肿瘤组织中CD151阳性表达率明显高于正常宫颈组织（P<0.01）。

图1 CD151在宫颈组织中的表达（DAB，×400）

2.2 CD151蛋白在子宫颈癌中表达与临床病理特征的关系 CD151蛋白表达与子宫颈癌患者年龄无关（P>0.05），而与肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关（P<0.05）。见表1。

表1 CD151蛋白表达与子宫颈癌患者临床病理特征间关系 例（%）

低级别和高级别子宫颈癌中CD151蛋白表达阳性率分别为31.3%、65.0%（P<0.01）。早期及中晚期子宫颈癌CD151蛋白表达阳性率分别为45.5%和76.8%（P=0.005）。淋巴结转移组及未发生淋巴结转移组CD151蛋白表达阳性率分别为76.6%和39.0%，比较差异有统计学意义（P<0.01）。

3 讨论

子宫颈癌是妇女发病率最高的恶性肿瘤，在所有恶性肿瘤中所占比例为35%～72%，但由于部分患者发现较晚，失去治疗机会[3]。

四跨膜蛋白超家族（ transmenbrane 4 super family，TM4SF）可以与自身或其他细胞表面的整合素、生长因子受体结合形成四跨膜网络，并对后者的生物学功能产生重要影响[4]，在细胞的增殖、融合，肿瘤生长、迁移及血管生成中起重要作用[5-6]。四跨膜蛋白超家族已检出30多个成员，例如CD9、CD82等绝大多数被认为是抑癌基因，其产物与肿瘤发展、预后呈负相关。而新近发现的CD151却与肿瘤发生及预后呈正相关[7]，并且是该家族成员中唯一的癌基因[8]。

作为四跨膜蛋白家族的重要成员，CD151最早在血小板表面被发现。其不仅具有四跨膜蛋白的一般特征，如参与细胞黏附、增殖及血管生成，研究证实，CD151在多种肿瘤中存在过表达，并且参与肿瘤细胞的浸润、侵袭与转移[9]。鉴于CD151与肿瘤发展的正相关性，在肿瘤恶性进展中的重要作用，本实验采用免疫组织化学法检测CD151在子宫颈癌的表达，并探讨其与肿瘤的分化、临床分期及淋巴结转移的关系。

本研究结果表明，CD151蛋白在子宫颈癌组织中的表达水平明显高于正常组织，提示 CD151蛋白与子宫颈癌的发生呈正相关。研究结果表明，CD151在子宫颈癌组织中过表达与肿瘤的分化程度、TNM分期及淋巴结转移等恶性表型明显有关，进一步证实CD151的过表达参与子宫颈癌的浸润及转移。因此CD151的检测可作为子宫颈癌的早期筛查、临床诊断的指标。已有体内实验证实抗CD151抗体可抑制肿瘤的侵袭与转移[10]，CD151的检测有望为子宫颈癌的预后评价提供一种新的分子生物学指标。

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