“益气调血，扶本培元”针法对快速老化痴呆小鼠脑组织海马细胞凋亡的影响*

河北医科大学中医学院 (石家庄050091)

吴中秋 梁玉磊 徐江红△ 王子鸣△△ 张瑞娟 陈子龙 张 敏 张一昕

随着社会老龄化的加剧，老年痴呆症的发病率呈上升趋势，严重影响着患者的生存质量，给社会、家庭带来巨大的负担，已成为临床中亟待解决的难题之一。［1］临床发现，“益气调血，扶本培元”治疗本病疗效显著。［2－3］为进一步指导临床，故设计本实验，研究以快速老化痴呆鼠SAMP10 为研究对象，正常老化鼠SAMR1 为对照，观察小鼠脑组织海马细胞凋亡情况，探求“益气调血，扶本培元”针法治疗老年性痴呆可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组 选用健康雄性8月龄快速老化痴呆小鼠(SAMP10)30 只，体质量28～32 g/只，由天津中医药大学第一附属医院实验动物中心提供(津实动质M 准字第108 号)，随机分为3 组，即P10 对照组，P10 针刺组和P10 非穴组，每组10 只。选取同源健康雄性8月正常老化小鼠(SAMR1)10 只作为正常对照组，即R1 对照组。恒温单笼饲养，自然进食水。

1.2 试剂与仪器 原位细胞凋亡(Tunel)试剂盒(德国宝灵曼公司);一次性30 号0.5 寸无菌针灸针(苏州医疗器械厂);小鼠跳台仪(中国医学科学院药物研究所);BX60 荧光显微镜(日本OLYMPUS 公司);RM2125 型切片机(德国LEICA 公司);HPIAS－1000 型高清晰度彩色病理图文分析系统(同济医科大学千屏影像工程公司)。

1.3 治疗方法 选穴:P10 针刺组遵循“益气调血，扶本培元”针刺，［4］穴取膻中、中脘、气海、血海、足三里;穴位定位参照《中国兽医针灸学》。［5］针刺方法:针刺膻中、中脘、气海、足三里得气后，行捻转补法30 s，血海得气后，行捻转泻法30 s。非穴位组取双胁下两个固定非穴位点，行平补平泻30 s。R1 和P10 对照组经行相同时间和程度的捉抓。1 次/d，连续治疗15 d。

1.4 指标及检测方法

1.4.1 行为学检查:治疗结束后进行跳台实验，将小鼠置于跳台仪中适应3 min，然后接通36 v 交流电，记录动物受电刺激后跳上橡皮垫的反应时间和5 min 内受到电击的次数(错误次数)，结果作为学习成绩。

1.4.2 脑组织细胞凋亡检测:采用Tunel 法检测。行为学实验结束后断头处死小鼠，取左侧脑组织进行染色封片、镜检，用图象分析仪分别对海马CA1 区进行处理，测量单位面积凋亡细胞数目。(光镜下阳性细胞标记呈棕黄色，阴性细胞呈淡蓝色。以上指标由河北医科大学中医学院实验中心检测。)

2 结果

2.1 行为学检测 P10 对照组和P10 非穴组较R1 对照组和P10 针刺组反应时间明显延长(P＜0.01)，错误次数明显增多(P＜0.01);P10 针刺组与R1 对照组比较，小鼠反应时间延长，错误次数略多，但是差异无显著性(P＞0.05)。详见表1。

表1 各组大鼠跳台学习成绩 (±s)

表1 各组大鼠跳台学习成绩 (±s)

注:与R1 对照组比较，△△P＜0.01;与P10 针刺组比较，◇◇P＜0.01

分组 n 反应时间(s) 错误次数(次)10 36.72±2.16 2.52±0.32 P10 对照组 10 50.78±6.67△△◇◇ 7.89±2.06△△◇◇P10 针刺组 10 40.12±3.48 3.04±1.15 P10 非穴组 10 47.31±7.23△△◇◇ 7.03±1.98 R1 对照组△△◇◇

2.2 小鼠脑组织海马CA1区细胞凋亡情况 各组小鼠脑组织海马CA1区细胞凋亡结果:R1 对照组见少量散在凋亡细胞，P10 对照组与P10 非穴组分布有大量阳性细胞，其凋亡细胞数目多于R1 对照组和P10 针刺组(P＜0.05);P10 针刺组见部分凋亡细胞略多于R1 对照组，但差异无显著性(P＞0.05)。详见表2。

表2 各组小鼠脑组织海马CA1 区细胞凋亡结果(个，±s)

表2 各组小鼠脑组织海马CA1 区细胞凋亡结果(个，±s)

注:与R1 对照组比较，△P＜0.05;与P10 针刺组比较，◇P＜0.05

分组 n 细胞凋亡数R1 对照组10 18.74±1.58 P10 对照组 10 32.71±6.58△◇P10 针刺组 10 21.79±5.57 P10 非穴组 10 28.75±5.70△◇

3 讨论

中医学认为，痴呆的病位在脑府，与气虚血瘀关系密切。《医林改错》指出:“元气既虚，必不能达于血管，血管无气，必停留而瘀。”本病病发老年，脏腑已虚，元气不足，血运无力，终致脑髓失养，神明失常，出现健忘失聪、思维迟钝等智能低下之症。杨氏指出气非单指元气，也包括三焦之气。其认为老年痴呆症是三焦气化功能紊乱的结果。［6］三焦是气机升降出入的通道，主导各部气机。其下合于肾与膀胱，上连于心肺，中聚于脾胃，元气通过三焦而充沛全身。膻中位于上焦，为气之会。《灵枢·胀论》言:“君主之宫城也。”能疏利上焦气化，行气以活血;中脘、足三里意在调理中焦，补中益气，资生气血;气海位于脐下，为元气汇聚之处。《铜人》释言:“生气之海”，可总调下焦气机，善治“真气不足”，具培补升发元气之功。诸穴合用，通条三焦各部气机，配以血海养血行血，使肌体功能协调共济。［7］

现代研究表明，神经细胞的存活数量可直接影响神经突触的可塑性，神经细胞凋亡可出现学习记忆障碍，［8］发生进行性认知功能障碍。［9］实验结果表明，“益气调血，扶本培元”针法能够减低SAMP10 小鼠的学习反应时间，减少错误次数;同时能够降低脑组织海马CA1区细胞凋亡率，从而达到改善老年痴呆症状和提高其学习记忆的能力。

［1］杨辉，Colette B rowning，Shane Thomas.老年痴呆—基于社区干预策略的政策探讨［J］.中国全科医学，2008，8A:(11):1 323－1 325

［2］韩景献，于建春，于涛，等.针刺干预脑衰老的临床及基础研究［J］.天津中医药，2005，22 (5):438－438

［3］胡起超，孙兆元，孟媛，等.益气调血、扶本培元针法治疗老年性痴呆40 例［J］.陕西中医，2010，31 (3):343－344

［4］刘存志，于建春，韩景献.“益气调血，扶本培元”针法对多发梗死性痴呆模型大鼠联合型学习能力的影响［J］.天津中医学院学报，2005，24 (2):67－69

［5］中国兽医针灸学会.中国兽医针灸学［M］.北京:北京农业大学出版社，1984.212

［6］杨宏波，张雪竹，于建春，等.脾胃在“三焦气化失司所致痴呆”中的作用［J］.辽宁中医杂志，2011，38 (1):60

［7］于建春，韩鹦赢，成海燕，等.“益气调血，扶本培元”针法腧穴配伍思想探微［J］.中国针灸，2011，31 (9):814－816

［8］彭跃钢，黄立武.复方绞股蓝总甙胶囊对血管性痴呆大鼠海马神经细胞凋亡的影响［J］.广西医科大学学报，2005，22(3):368

［9］周毅，王景，周高东，等.人脐血细胞静脉输注对血管性痴呆大鼠行为和海马细胞凋亡的影响［J］.中国行为医学科学，2006，10 (15):868－870