成人特发性血小板减少性紫癜患者细胞免疫功能的变化及临床意义

陈霄峰 梁小裕 郏雪萍 陈文芬 林明增 罗文达

(浙江省台州医院路桥院区,浙江 台州 318050)

特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)是临床上比较常见的出血性疾病。其发病机制尚未完全明确,越来越多的研究证明[1],ITP 是一个多因素参与的病理过程,可能与多种因素诱发的机体体液免疫和细胞免疫紊乱有关,其中细胞免疫异常在ITP 发病机制中有重要的作用。本文应用流式细胞仪(FCM)对ITP 患者外周血淋巴细胞亚群进行检测,并对ITP 治疗前后进行动态检测,探讨细胞免疫功能在ITP 发生发展过程及转化中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本院2009年4月～2012年4月40例ITP 门诊及住院患者,均符合ITP 诊断标准[2],近3个月来未行任何治疗,其中男16例,女24例,年龄18～60岁,平均(37.0±10.2)岁;对照组为30例体检健康者,男12例,女18例,年龄19～62岁,平均(36.1±9.8)岁。两组年龄,性别差异无统计学意义,具有可比性。其中40例ITP 中,有32例治疗有效。激素治疗6周后血小板达正常时进行T 细胞亚群检测,进行治疗前后对比。

1.2 检测方法 T 淋巴细胞亚群测定,晨起抽取静脉血2mL,EDTA 抗凝,仪器为美国BD 公司的fascaliber 流式细胞仪,按操作规程进行总CD3,CD4,CD4/CD8,总CD19,CD16+56 的检测。单克隆标本由美国BD 公司提供。

2 结果

从表1 可以看出,ITP组与对照组比较,CD3、CD4、CD4/CD8、CD16+56 下降,而CD8 及CD19 升高,两组差异有统计学意义(P＜0.01)。

从表2 可以看出,ITP 治疗前后相比较有统计学意义(P＜0.01),经过治疗后ITP组与对照组比较各指标无统计学意义(P＞0.05)。

表1 两组淋巴细胞亚群水平比较(±s)

表1 两组淋巴细胞亚群水平比较(±s)

与对照组比较**P＜0.01

表2 ITP 治疗前后淋巴细胞亚群水平比较(±s)

表2 ITP 治疗前后淋巴细胞亚群水平比较(±s)

与治疗前比较**P＜0.01

3 讨论

虽然,ITP 的确切发病机制尚未完全明了,但随着各种研究的不断深入,目前认为ITP 是以免疫介导血小板破坏为特征,是体液免疫和细胞免疫共同参与的一种自身免疫性疾病[3]。目前很多研究表明,ITP 发病可能与多种病毒及幽门螺旋杆菌感染有关。Emmerich 等[4]报道ITP 患者的B 淋巴细胞刺激因子水平高于正常对照组,提出此因子可能是导致ITP 发生的重要因素之一。Olsson 等[5]报道ITP患者T 细胞毒性相关基因,如Apo21/Fas、granzyme B、granzyme A 和perforin 表达增加,从而证实CTL(细胞毒T 淋巴细胞)确实介导血小板破坏,并进一步证实,ITP 患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)家族基因增强了表达。Yamanoto 等[6]发现ITP 患者骨髓巨核细胞超微结构异常,包括线粒体和内质网肿胀形成的胞浆内空泡增多及染色质固缩等,自身抗体通过GP(糖蛋白)分子与巨核细胞结合,引起巨核细胞的成熟和功能障碍。机体正常状态下,内环境保持一定的稳定性是至关重要的,免疫功能的稳定亦如此,如果免疫功能紊乱,则导致多种疾病的产生。本文从细胞免疫这一方面来探讨发病机制。T细胞淋巴细胞亚群之间保持正常的比例是形成正常免疫应答的基础,T 淋巴细胞比例失调在自身免疫病的发生发展过程中也起重要作用[7]。本文结果显示,患者CD3、CD4、CD4/CD8、CD16+56 均下降,而CD19 及CD8 上升,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),而经过治疗有效者各指标恢复正常,与对照组相比,无统计学意义。说明ITP 患者存在一定的T 淋巴细胞比例失调。CD3 是外周血中成熟T 淋巴细胞的特异标志物之一,代表外周成熟T 细胞的总数,在无补体存在时,抑制T 细胞对靶细胞的细胞毒作用,抑制依赖白介素-2 的T细胞生长。其下降提示免疫功能下降[8]。本文中CD3 下降,亦支持这一观点。CD4 是辅助性T 细胞的代表性抗原。CD4 下降机制可能是CD4T 淋巴细胞接受抗原提呈细胞提呈的自身抗原的刺激后活化,凋亡调节基因Fas 的表达增加,易发生活化诱导的细胞死亡而被清除。外周血CD8T 淋巴细胞比例增高则可能是由于CD4 淋巴细胞减少,CD8T 淋巴细胞反馈性升高所致[9]。本文中CD4/CD8 比例失调,提示细胞功能紊乱。CD19 是B 细胞分化、活化、增殖及抗体产生的重要抗原。本文中CD19 升高,提示B 细胞增加激活。CD16+56 是NK 细胞的特异性标志,NK 可抑制B 细胞的增殖和抗体的产生,正常或亢进的NK 细胞可以减少自身抗体的产生。Johansson 等[10]发现激活的NKT 细胞能抑制ITP 的自身免疫反应。NK 细胞活性降低,可致其对B 细胞激活、增殖、分化和抗体应答的抑制能力下降,从而使B 细胞的异常活化,产生自身抗体增加,体液免疫紊乱而发病。本文中,CD16 +56 下降,CD19 升高,亦证明了这一点。ITP 中一部分病例经激素治疗后血小板恢复正常,对其治疗前后进行T细胞亚群测定,结果显示,治疗后CD3、CD4、CD4/CD8、CD16+56 上升,CD19、CD8 下降。治疗前后各指标有明显差异,而治疗后同正常组对比,无明显差异。可能为激素等抑制了ITP 患者T 淋巴细胞抗原的表达,下调血小板Fas 和Fas2L 蛋白的表达,减少CD4 T 淋巴细胞的清除,通过下调抗凋亡蛋白BCL-2 的过度表达,导致B 淋巴细胞凋亡比例上升[11]。说明在治疗上应用激素纠正了免疫功能紊乱,有利于疾病恢复。在临床上作者遇到应用激素无效,而应用细胞免疫抑制剂环孢霉素胶囊治疗有效的ITP例子,说明可能纠正了细胞免疫功能,同样促进了疾病的好转。

总之,ITP 发病机制复杂,细胞 免疫与体液免疫紊乱共同存在,本文仅从细胞免疫方面探讨发病机制,动态观察T 淋巴细胞亚群水平,对于ITP 发病机制探讨、临床治疗、判断疗效均有一定的积极的意义。随着研究的不断深入,ITP 的发病机制会越来越清晰。

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