两种抗凝剂对血小板的影响因素临床分析

刘学斌， 邹雪松， 黄冬梅， 董志伟

(1.河北省承德市中心医院检验科， 河北 承德 067000 2.河北省承德市中心血站， 河北 承德 067000)

目前，随着工作量的逐渐加大，血常规已经由全自动分析仪代替了手工计数，而血常规标本大部分以EDTA盐作为抗凝剂，EDTA盐对红、白细胞形态影响很小，根据国际血液学标准化委员1993年文件建议，血细胞计数用EDTA二钾作为抗凝剂。但极少数患者或正常人血液中血小板会受EDTA－K2的影响而发生聚集，导致血细胞分析仪在计数过程中出现血小板的降低，即发生EDTA依赖性假性血小板减少(PTCP)。由此所造成的血小板计数的假性减少会给临床医生的诊治过程带来很大困扰，极易造成误诊而引起不必要的麻烦。现就我院1例EDTA依赖性假性血小板减少症患者的血液进行实验分析报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料:患者，男，42岁。因感冒上呼吸道感染来我院，查血细胞分析PLT计数为42×109L－1，无出血、瘀点、瘀斑等症状。

1.2 仪器与试剂ABX Panter60血细胞分析仪;Olympus CX21显微镜;20ul微量吸管;EDTA－K2抗凝管，枸橼酸钠抗凝管;全血质控物由ABX公司提供;瑞氏染液(珠海贝索公司生产)，血小板稀释液(自配)，细胞计数板。

1.3 方 法

1.3.1 用微量吸管取患者未抗凝血20ul于血小板稀释液中，后加于细胞计数板，与显微镜下手工计数三次，取平均值。

1.3.2 分别用EDTA－K2抗凝管和枸橼酸钠抗凝管抽取患者静脉血，上下颠倒混匀，分别于5min、10min、20min、30min、1h、2h 在 ABX Panter60 血细胞分析仪上进行计数，所有操作均按操作规程进行。

1.3.3 将EDTA－K2抗凝血、枸橼酸钠抗凝血和指尖血各做血涂片一张，用瑞士染液按照操作步骤染色，显微镜下观察。

2 结果

2.1 参考结果:计数三次结果分别为:161、156、172，取平均值结果为 163×109L－1。

2.2 EDTA－K2抗凝血、枸橼酸钠抗凝血在不同时间血小板计数，见表1。

表1 EDTA－K2抗凝血、枸橼酸钠抗凝血在不同时间血小板计数

2.3 三张血涂片经瑞氏染液染色后显微镜下可见:EDTA－K2抗凝血涂片中大部分血小板呈聚集状态，仅可见少量分散状血小板，且聚集的血小板大小不一，多数分布在血膜的两侧和尾部;枸橼酸钠抗凝血和未抗凝血涂片中血小板大小正常，散在分布，无聚集现象。

3 讨论

乙二胺四乙酸(EDTA)盐对红细胞、白细胞形态影响很小，因此国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐将EDTA－K2作为血细胞计数的抗凝剂，目前在世界各地广泛应用［1］。但EDTA二钾可诱导血小板某些成分发生改变，从而发生聚集、堆积等现象，导致血细胞计数仪不能正常识别血小板，而使血小板假性减少。到目前EDTA引起的血小板假性减少的机制并不完全清楚，其发生的原因可能有两点，其一是在作为免疫介导的血液中，出现的冷抗血小板自身抗体［2］，这种EDTA依赖的冷抗血小板自身抗体可与单核细胞或淋巴细胞膜上Fc受体结合，出现卫星现象;其二是EDTA可导致血小板活化，因而改变血小板膜表面某种隐匿性抗原构象，从而与存在于血浆中的自身抗体结合，形成抗原抗体复合物激活了细胞膜中的PLA、PLC、AA、ADP、52TH等活性物质。这些血小板活性物质又能不同程度的活化血小板纤维蛋白原受体，促使血小板与纤维蛋白原聚集成团，出现血小板聚集现象，导致血小板假性减少。

在本实验中结果2中可看出，用EDTA－K2抗凝的血细胞分析中血小板计数明显低于手工计数的参考结果，而且随着时间的延长，血小板计数呈下降的趋势;而用枸橼酸钠抗凝的结果接近手工计数的参考结果，且没有随着时间的延长有明显的趋势性变化，再结合结果3的涂片镜检可以看出此患者是EDTA依赖性血小板假性减少。在血细胞分析的过程中，血小板的聚集可导致血细胞分析仪错将聚集的血小板误认为白细胞或巨大血小板从而导致出现低血小板计数。通过本实验可以看出，EDTA－K2能导致血小板假性减少，而且，是随着时间的延长血小板的计数也随之下降，所以时间也可能是加速EDTA依赖性血小板减少的另一因素;而枸橼酸钠可以用作疑似PTCP患者的筛查血小板的抗凝剂使用;而未抗凝血加于血小板稀释液中的手工计数方法仍作为血小板计数的参考方法。PTCP的发生率虽然很低，有报道其约为0.09－0.21%，但在近几年的文献报道中并不少见。在2011年刘春生等的报道中［3］，他们对EDTA－K2和柠檬酸钠这两种抗凝剂做了针对正常人群的对比分析，最后得出EDTA－K2能导致血小板假性减少，柠檬酸钠能一定程度降低血小板计数的影响，同时也指出，时间也能影响血小板的假性减少，与本实验结论一致。在张茹、张涛的报道中［4］，他们是用EDTA－K2和肝素钠作为对比进行的实验分析，其结论为EDTA－K2能导致血小板假性减少，肝素钠可作为PTCP患者筛查血小板的抗凝剂来使用。而对于柠檬酸钠和肝素钠是否可以作为PTCP患者筛查血小板的抗凝剂，有待在以后的实验中分析证实。

综上所述，日常工作中，在进行血常规检测时，如遇血小板显著减少，血小板直方图异常，且患者无淤点、淤斑等出血情况，可考虑假性血小板减少。对于这种血小板减少的患者，首先要进行血涂片镜检，观察血小板的数量和形态，尤其要注意观察血膜的尾部和两侧是否有血小板的聚集;其次，告知患者后，用枸橼酸钠抗凝管重新抽取患者血液，做血细胞分析，并抽取患者未抗凝血20ul于血小板稀释液中，手工计数作为参考方法，以避免因血小板假性减少而引起的误诊，为临床医生提供准确可靠的诊断依据。

［1］张文，周强，黄宪章.临床检验抗凝剂特点及应用［J］.广东医学，2005，26(8):1158－1160.

［2］鲁平，王丹，靳伟东，等.32例EDTA－K2抗凝血引起血小板假性减少的结果分析［J］.哈尔滨医科大学学报，2010，44(6):618－619.

［3］刘春生，柳发虎，等.不同抗凝剂对血小板检测结果的影响［J］.临床医学与临床，2011，8(8):899－900.

［4］陈言伟，张一民，董娟.EDTA依赖性假性血小板减少症1例分析［J］.中国误诊学杂志，2011，11(4):849.